双标线性校正法用于川黄芩的多成分定性分析

目的 建立测定川黄芩中5个成分(黄芩苷、未知峰2、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素)的高效液相色谱(HPLC)方法,并比较双标线性校正法和相对保留时间法的优劣。方法 采用20根不同品牌的C_(18)色谱柱,测定川黄芩中5个成分的实际保留时间,并计算标准保留时间(SRT)。借助DRS Origin软件,以黄芩苷(峰1)和黄芩素(峰5)为双标化合物,采用双标线性校正法预测其他3个成分的保留时间,并在另外两根C_(18)色谱柱上进行方法验证。同时以千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(峰3)为参照物,使用相对保留时间法预测其他4个成分的保留时间。结果 双标线性校正法可用于川黄芩的多成分定性分析,且建立的方法符合方法学验证要求。与相对保留时间法相比,双标线性校正法预测保留时间的准确度更高,色谱柱的适用范围更广。结论 双标线性校正法具有更好的辅助色谱峰定性的作用,方法可行、准确且经济实用。

双标线性校正法应用于西洋参破壁饮片的指纹图谱研究

目的:建立西洋参破壁粉碎前后高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱,并采用双标线性校正法进行定性。方法:采用高效液相色谱-电雾式检测器法(HPLC-CAD),以西洋参破壁饮片与传统饮片为研究对象,使用相似度分析进行质量评价。另以人参皂苷Re和人参皂苷Rb2为双标化合物,使用DRSOrigin软件进行双标线性校正,预测特征峰的保留时间,并比较其与相对保留时间法的差别,以辅助色谱峰定性分析。结果:所选10批西洋参破壁饮片与传统饮片指纹图谱相似度均在0.939以上,共确定17个共有峰,并建立了以人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)、Rc、Rb_(2)、Rb_(3)、Rd及拟人参皂苷F_(11)为特征峰的对照特征图谱。双标线性校正法预测保留时间的精度优于相对保留时间法。结论:所建立的方法简便、准确,可为该品种的质量评价与控制提供有力的技术支持。同时,可为其他破壁饮片质量标准研究提供参考。

双标线性校正法用于板蓝根的多成分定性分析

目的:建立同时检测板蓝根中6个成分(尿苷、腺嘌呤、鸟苷、(R,S)-告依春、腺苷、直铁线莲宁B)的HPLC方法,考察双标线性校正(LCTRS)法对于板蓝根多成分定性分析的可行性。方法:采用HPLC法,以甲醇为流动相A,水为流动相B,梯度洗脱(0~3 min,3%A;3~18 min,3%A→14%A;18~25 min,14%A→26%A;25~34 min,26%A;34~40 min,26%A→46%A;40~60 min,46%A→90%A),流速0.8 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长为0~32 min,254 nm;32~60 min,230 nm,进样量10μL;测定板蓝根中6个成分在16根不同品牌和型号的C18色谱柱的实际保留时间,以鸟苷和直铁线莲宁B 2个成分作为双标化合物,采用LCTRS法定位各成分色谱峰,并用3根未知色谱柱进行方法验证。同时以鸟苷为参照物,采用RRT法预测其他5个成分的保留时间。比较这2种方法的预测准确性和色谱柱符合率。结果:LCTRS法能够较好地对6个指标性成分进行保留时间的预测和定性分析。与RRT法相比较,LCTRS法所预测结果准确性更高,色谱柱普适性更优。结论:LCTRS法用于同时测定板蓝根中多成分可行且准确,操作简便,耐用性好,具有推广价值。

双标线性校正法用于延胡索中5个生物碱的定性分析

目的:建立延胡索中巴马汀、小檗碱、脱氢延胡索碱、延胡索乙素和延胡索甲素5个生物碱的高效液相色谱(HPLC)方法,考察双标线性校正(LCTRS)法对其色谱峰定性分析的可行性。方法:采用HPLC法,以乙腈为流动相A,0.1%磷酸水溶液(用三乙胺调pH 6.0)为流动相B,梯度洗脱(0~23 min, 20%A;23~35 min, 20%A→30%A;35~50 min, 30%A→80%A),流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为35℃,检测波长为280 nm,进样量为5μL;测定延胡索中5个生物碱在20根不同品牌和型号C_(18)色谱柱的实际保留时间,以巴马汀和延胡索甲素2个成分作为双标化合物,使用双标线性校正法定位各成分色谱峰,并用3根未知色谱柱进行方法验证。同时以中间色谱峰脱氢延胡索碱为参照物,采用相对保留时间法对其他4个成分色谱峰的保留时间进行预测。比较这2种方法的预测准确性和色谱柱的符合率。结果:在10批次样品中,5个生物碱成分均有较好的分离。其中采用双标线性校正法的色谱峰预测准确率和色谱柱符合率均为100%,均显著高于相对保留时间法,能够更好地预测延胡索中待测成分在未知色谱柱上的保留时间。结论:建立的双标线性校正法预测色谱峰保留时间准确度高,可用于延胡索中生物碱类成分定性分析,值得进一步推广及应用。

双标线性校正法用于盐沙苑子配方颗粒多组分定性分析

目的:建立HPLC-MS法对盐沙苑子配方颗粒中化合物A、杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷、化合物B、沙苑子苷B、沙苑子苷A进行定性分析,考察双标线性校正(LCTRC)法预测保留时间的可行性,并对LCTRC法和相对保留时间(RRT)法2种替代对照品定性方法进行比较。方法:采用HPLC-MS法,以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸水溶液为流动相B,梯度洗脱(0~5 min, 10%A→15%A;5~15 min, 15%A;15~45 min, 15%A→25%A;45~65 min, 25%A→45%A),流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为35℃,检测波长为266 nm。通过对照品保留时间及样品的紫外光谱、质谱数据进行样品色谱峰定位,在18根不同品牌或型号的C_(18)色谱柱上,测定盐沙苑子配方颗粒中5个成分的实际保留时间,计算标准保留时间(SRT),以化合物A和沙苑子苷A为双标化合物,使用LCTRC法预测保留时间,并在另外3根C_(18)色谱柱上进行方法验证。同时以中间峰化合物B为参照物,使用RRT法预测保留时间。结果:建立了LCTRC法对化合物A、杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷、化合物B、沙苑子苷B、沙苑子苷A进行定性分析,5个成分在17根色谱柱上的SRT分别为14.433、19.556、34.071、37.662、39.643 min,线性关系良好(r>0.995)。与RRT法相比,LCTRC法预测保留时间的准确度更高,色谱柱适用范围更广。结论:作为一种新的替代对照品定性方法,LCTRC法能较好地辅助色谱峰定性,值得应用和推广。

高效液相色谱波长切换法结合双标线性校正法用于茯神木指纹图谱的定性研究

目的:建立茯神木高效液相色谱波长切换法指纹图谱,考察双标线性校正法对色谱峰定性的可行性。方法:采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)波长切换法建立指纹图谱,使用C18柱,流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脱(0~6 min,60%A;6~30 min,60%A→80%A;30~34 min,80%A→90%A;34~40 min,90%A),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长242 nm(0~28 min)、210 nm(28~30.5 min)、242 nm(30.5~40 min),柱温30℃,进样量5μL。以相似度分析进行质量评价,并使用DRS Origin软件进行双标线性校正,以16α-羟基松苓新酸、松苓新酸为双标化合物,预测其余待测峰的保留时间,并在另1根C18色谱柱上进行验证,将预测结果与相对保留时间法进行比较,以辅助色谱峰的定性分析。结果:10批茯神木指纹图谱相似度≥0.972,表明不同批次间茯神木的成分比例稳定,整体相似度很高。双标线性校正法对保留时间的预测准确率(86%)更高,且有更高的色谱柱适用性(11根色谱柱)。结论:双标线性校正法在多波长条件下同样具有优势,可辅助色谱峰的定性。该方法可行、准确、经济。

中药标准物质替代测定法技术指导原则

中药标准物质替代测定法是符合中药特点的多指标质量控制的一种有效模式。为了指导该法的建立,统一并规范该法的研究及在国家药品标准中的应用,并证明采用的方法是否适合于相应的检测要求,探讨并提出本技术指导原则。本指导原则从该法的定义与分类、定量的原理与方法、色谱峰的定位与确认、技术要求四个方面进行论述。当中药指纹图谱(特征图谱)鉴别项或多指标含量测定项采用中药标准物质替代测定法时,按照本原则进行方法学验证研究。

双标多测法Ⅰ-双标线性校正技术用于色谱峰的定性

目的:建立一种新的替代对照品模式的多指标含量测定技术——双标多测法,并应用于大黄及其制剂中5种蒽醌的分析。方法:在5台不同的高效液相色谱仪和14根不同品牌和型号的C18色谱柱上,测定大黄中5种游离蒽醌的峰面积和保留时间,再进行数据分析。定量方面,以芦荟大黄素为参照物,测得与大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的相对校正因子。定性方面,以芦荟大黄素和大黄素甲醚2个成分,使用双标线性校正法预测保留时间。结果:定量方面,相对校正因子可耐受柱温、流速和流动相比例在一定范围内的变动。定性方面,14根色谱柱的验证结果表明,双标线性校正法的预测效果明显优于相对保留时间法。结论:双标多测法在中药多指标含量测定方面有较好的实用价值和应用前景。

双标线性校正结合PDA辅助色谱峰定性用于印度獐牙菜指纹图谱分析

目的建立印度獐牙菜指纹图谱,探讨和验证双标线性校正法结合PDA辅助法用于色谱峰定性的可行性。方法采用HPLC建立印度獐牙菜指纹图谱,使用相似度分析和二维聚类分析进行质量评价,并使用双标线性校正结合PDA辅助法进行色谱峰定性。结果 10批次印度獐牙菜药材选定10个色谱峰作为指纹图谱的共有峰,经化学计量学评价,可对其质量进行初步评价;双标线性校正法预测保留时间的精度优于相对保留时间法;双标线性校正法结合PDA辅助法可更好的对色谱峰进行定性。结论与相对保留时间法相比,双标线性校正法预测保留时间的准确度更高,色谱柱的适用范围更广。双标线性校正结合PDA对色谱法进行辅助定性可扩大双标线性校正的使用范围。

化学计量学及双标线性校正法应用于马钱子指纹图谱的研究

目的建立马钱子药材指纹图谱,并采用化学计量学方法和双标线性校正法进行研究。方法采用HPLC建立马钱子指纹图谱,使用相似度分析、二维聚类分析和主成分分析进行质量评价,并使用双标线性校正法进行色谱峰定性。结果 10批次马钱子药材选定14个色谱峰作为指纹图谱的共有峰,进一步选择马钱苷酸、绿原酸、士的宁和马钱子碱4个色谱峰作为指纹图谱的特征峰。经化学计量学评价,可对其产地进行初步分类。双标线性校正法预测保留时间的精度优于相对保留时间法。结论本实验建立的指纹图谱有较强的针对性,可用于马钱子的质量评价。与相对保留时间法相比,双标线性校正法预测保留时间结果的准确度更高,色谱柱的适用范围更广。

基于HPLC指纹图谱及双标多测法的四妙丸质量评价研究

目的:建立四妙丸指纹图谱,并采用化学计量学方法和双标多测法对四妙丸进行质量评价研究。方法:采用HPLC法,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1 mL·min^(-1),检测波长为327 nm(0~17 min)、284 nm(18~30 min)、340 nm(31~92 min),柱温为30℃。建立四妙丸指纹图谱,使用化学计量学分析进行初步质量评价,再测定四妙丸中8个特征峰在12根不同型号的C_(18)色谱柱上的实际保留时间,双标化合物选定为绿原酸(峰4)和小檗碱(峰14),采用双标线性校正(LCTRS)法预测8个特征峰的保留时间,并在1根未知色谱柱上进行方法验证。再以小檗碱为参照峰,计算绿原酸、黄柏碱的相对校正因子,对各成分进行定量,并将所得结果与外标法进行比较。结果:13批次四妙丸样品选定16个色谱峰作为指纹图谱的共有峰,经化学计量学分析初步评价其质量;进一步选择采用对照品法归属的8个特征色谱峰进行LCTRS法定性分析。结果表明,LCTRS法预测保留时间的正确率更高(100%),其预测保留时间的准确度优于相对保留时间(RRT)法;绿原酸、黄柏碱相对于小檗碱的相对校正因子分别为0.7782和0.2415,以相对校正因子法(RCFM)和常规外标法(ESM)的定量结果显示,二者无显著性差异。结论:双标线性校正法提高了色谱峰预测保留时间的准确度,能较好地应用于四妙丸多成分的含量测定。

双标多测法在党参5个成分含量测定中的应用

目的:建立双标多测法同时测定党参中腺苷、色氨酸、紫丁香苷、绿原酸、党参炔苷的含量,探索双标多测法(双标线性校正法用于色谱峰定性以及采用相对校正因子定量)在党参质量评价中应用的准确性和可行性。方法:采用HPLC法,以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~10 min,3%A→5%A;10~20 min,5%A→15%A;20~30 min,15%→25%;30~50 min,60%A),流速为1 mL·min^(-1),检测波长为257,214,218 nm,柱温25℃;在19根不同的C_(18)色谱柱上测定党参中5个成分的实际保留时间,计算各成分在各色谱柱保留时间的平均值,得到各成分的标准保留时间,选取腺苷(峰1)和紫丁香苷(峰3)作为双标化合物,使用双标线性校正法准确定位各成分色谱峰,预测成分在未知色谱柱的保留时间并与相对保留时间法进行比较。以中间峰紫丁香苷为参照物,计算其余成分的相对校正因子,对各成分进行定量,将所得结果与外标法进行比较。结果:双标线性校正法能够准确预测待测化合物在未知色谱柱的保留时间,比相对保留时间法偏差更小,适用性更强;腺苷、色氨酸、绿原酸、党参炔苷相对于紫丁香苷的相对校正因子分别0.3152、2.2654、0.5955、1.4414,RSD均小于2%;相对校正因子法和常规外标法的定量结果显示二者无显著性差异。结论:双标多测法同时测定党参5个成分,简便准确且经济实用,可更好地控制该品种质量。

陈皮特征图谱方法比较研究

目的:建立陈皮特征图谱,并比较探讨相对保留时间法、双标线性校正法及随行对照法在陈皮特征图谱建立中的优缺点。方法:采用十八烷基键合硅胶为填充剂的液相色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱。分别采用相对保留时间法、双标线性校正法及随行对照法建立陈皮特征图谱,并比较分析其各自的优缺点。结果:20批陈皮样品液相色谱图中选定6个共有峰建立陈皮的特征图谱,其中相对保留时间法所需对照品最少,但受色谱柱影响最大,色谱峰定性准确度较差;双标线性校正法采用2个对照品对其他峰进行校正,色谱峰定性准确度高;随行对照法采用对照药材及对照品双重定性色谱峰,色谱峰定性准确度较高,但需较多标准物质。结论:建立的陈皮特征图谱可以用于陈皮的质量评价。双标线性保留时间校正法是陈皮特征图谱建立的较优方法。

基于双标线性校正法的银黄口服液多组分定性分析

目的:建立银黄口服液中7个成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、黄芩苷)的高效液相色谱方法,考察双标线性校正法用于色谱峰定性的可行性,并比较双标线性校正法和相对保留时间法2种替代对照品定性方法的优劣。方法:采用25根不同品牌或型号的C18色谱柱上,测定银黄口服液中7个成分的实际保留时间,并计算标准保留时间(SRT)。借助DRS Origin软件,以新绿原酸(峰1)和黄芩苷(峰7)为双标化合物,采用双标线性校正法预测其他5个成分的保留时间,并在另一根C18色谱柱上进行方法学验证。同时以绿原酸(峰2)为参照物,使用相对保留时间法预测其他6个成分的保留时间。结果:双标线性校正法可用于银黄口服液的多组分定性分析,且建立的方法符合方法学验证要求。与相对保留时间法相比,双标线性校正法预测保留时间的准确度更高,色谱柱的适用范围更广。结论:双标线性校正法能较好地辅助色谱峰定性,方法可行、准确且经济实用。

基于多波长检测和替代对照品法用于通滞苏润江制剂的综合质量控制

目的 提出一种中成药综合质量控制的策略,并遵循该策略建立通滞苏润江制剂的HPLC分析方法。方法 该策略包括3个步骤,步骤1采用多波长进行色谱数据检测,步骤2为多元统计分析进行鉴别和定量,步骤3建立多种技术的替代对照品法。制剂使用甲醇超声提取。使用乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,270、350、410和440 nm 4个波长检测。并使用雷达图分析、聚类热图分析、主成分分析和夹角余弦相似度分析方法对数据进行统计。最后使用双标线性校正法、相对保留时间法和PDA光谱法进行色谱峰的定性;采用相对校正因子法进行定量。结果 同时测定没食子酸、诃子酸、秋水仙碱、番泻苷B、番泻苷A、西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的多指标含量测定方法和评价18个特征峰的指纹图谱方法符合方法学验证的要求。数据分析表明,各企业的样品存在差异,区分各类样品的强特征峰为没食子酸、诃子酸、诃子肉、番泻叶、番泻叶和西红花苷Ⅰ。结论 该策略建立的方法全面、专属、成本较低,能有效地对通滞苏润江制剂进行质量控制。

双标线性校正法用于槐角炭的指纹图谱研究

目的:建立槐角炭高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并采用双标线性校正法进行分析。方法:采用HPLC建立槐角炭指纹图谱,用相似度进行质量评价,并使用双标线性校正法进行色谱峰定性。结果:18批次槐角炭饮片中,确定了10个共有峰,并建立了以芦丁、染料木苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槐属双苷、槐角苷及染料木素为特征峰的对照特征图谱。与相对保留时间法相比,双标线性校正法预测保留时间的准确度更高,色谱柱的适用范围更广。结论:双标线性校正法能较好地辅助色谱峰定性,方法可行、准确且经济实用。

基于双标多测法辅助HPLC的肿节风配方颗粒的多组分分析

目的:建立肿节风配方颗粒中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、迷迭香酸等6个多指标成分含量测定方法,探索双标线性多测法在色谱峰定性及采用相对校正因子定量的可行性。方法:采用十八烷基键合硅胶为填充剂的液相色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱。在17根不同的C_(18)色谱柱上测定肿节风配方颗粒6个成分的实际保留时间,计算各成分在各色谱柱保留时间的平均值,得到各成分的标准保留时间,选取绿原酸和异嗪皮啶2个成分作为双标化合物,使用双标线性校正法准确定位各成分色谱峰,预测成分在未知色谱柱的保留时间并进行方法学验证。以绿原酸为参照物,计算绿原酸与其余各成分的相对校正因子,对各成分进行定量。结果:不同企业的样品中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、迷迭香酸的含量范围分别为0.482~0.625、0.44~1.30、0.298~0.452、0.808~1.502、1.24~2.79、1.10~3.54 mg·g^(-1)。双标线性校正法能够准确地预测待测成分在未知色谱柱上的保留时间,且预测结果与实际值的偏差小于相对保留时间法,对色谱峰的定位比相对保留时间法更加精准;以相对校正因子法和常规外标法的定量结果显示二者无显著性差异。结论:双标多测法作为一种新的替代对照品方法,能较好地运用于肿节风配方颗粒多成分的测定中,值得进一步研究完善和推广。

双标多测法测定乳块消片中5个成分的含量

目的:建立乳块消片中5个成分(丹参素、王不留行黄酮苷、橙皮苷、丹酚酸B、丹酚酸A)的含量测定方法,探索双标多测法(双标线性校正法用于色谱峰定性以及采用相对校正因子定量)的可行性。并以5个成分的含量测定为例,比较双标线性校正法和相对保留时间法2种定性方法,以及相对校正因子法和常规外标法2种定量方法的优劣和差异。方法:采用HPLC法,以乙腈为流动相A,0.2%磷酸水溶液为流动相B,梯度洗脱(0~30 min,5%A→20%A;30~40 min,20%A→30%A;40~50 min,30%A),流速为1 mL·min-1,检测波长为282 nm,柱温为30℃。在4根不同的C18色谱柱上测定乳块消片5个成分的实际保留时间,计算各成分在各色谱柱保留时间的平均值,得到各成分的标准保留时间,选取丹参素(峰1)和橙皮苷(峰3)2个成分作为双标化合物,使用双标线性校正法准确定位各成分色谱峰,预测成分在未知色谱柱的保留时间并进行方法学验证。以中间峰橙皮苷为参照物,计算橙皮苷与其余各成分的相对校正因子,对各成分进行定量。结果:不同企业的样品中丹参素、王不留行黄酮苷、橙皮苷、丹酚酸B、丹酚酸A的含量范围分别为3.14~6.25、0.37~1.79、0.42~1.18、0.91~3.50、1.40~6.97 mg·g-1。双标线性校正法能够准确地预测待测成分在未知色谱柱上的保留时间,且预测结果与实际值的偏差小于相对保留时间法,对色谱峰的定位比相对保留时间法更加精准;以相对校正因子法和常规外标法的定量结果显示二者无显著性差异。结论:双标多测法作为一种新的替代对照品方法,能较好地运用于乳块消片多成分的测定中,值得进一步研究完善和推广。

双标多测法测定陈皮中5个黄酮类成分

目的:建立陈皮中5个黄酮类成分的双标多测法。方法:在3台不同厂家生产的液相色谱仪、13根不同品牌和型号的C色谱柱上,以橙皮苷为参照物,测得其与芸香柚皮苷、川陈皮素、3,3’,4’,5,6,7,8-七甲氧基黄酮、橘皮素的相对校正因子;以5个组分在13根色谱柱上实际保留时间的平均值作为标准保留时间,再以橙皮苷和橘皮素为双标物,利用双标线性校正法对待测物进行定位,从而实现定性定量。同时采用外标法测定陈皮中芸香柚皮苷、川陈皮素、3,3’,4’,5,6,7,8-七甲氧基黄酮、橘皮素含量,比较两种方法测定结果的差异,以验证双标多测法在含量测定中的准确性和可行性。结果:定量方面,相对校正因子可以耐受不同仪器和色谱柱,以及波长、柱温、流动相比例和流速在一定范围内的变动,测得的芸香柚皮苷、川陈皮素、3,3’,4’,5,6,7,8-七甲氧基黄酮、橘皮素相对校正因子分别为0.86、0.50、1.11、0.59,其RSD均不大于2.0%;定性方面,双标线性校正法预测值的绝对偏差均小于0.5 min,准确度优于相对保留时间法。双标多测法与外标法所测定的5个组分的含量相对平均偏差小于4%,表明结果无显著性差异。结论:双标多测测定陈皮中5个黄酮类成分方法可行性好、耐用性好。