双苓扶正抗癌胶囊对小鼠肝癌的影响

目的 :研究双苓扶正抗癌胶囊对小鼠肝癌的抑制作用及作用机制。方法 :建立小鼠肝癌 (Heps)实体瘤及腹水癌模型 ,观察抑瘤率和生命延长率 ,并用流式细胞术 (FCM)检测小鼠肝癌实体瘤的细胞周期及癌细胞凋亡率。结果 :双苓扶正抗癌胶囊在 15g和 30g kg剂量下 ,对小鼠肝癌实体瘤有显著抑制作用 ,也能延长荷腹水型肝癌小鼠的生存期 ;还可引起小鼠肝癌瘤细胞S期及G2 M期细胞减少 ,G0 G1 期细胞及凋亡细胞增加。结论 :双苓扶正抗癌胶囊对小鼠移植性肝癌具有抑制作用 ,其作用机制可能与抑制细胞周期中S期DNA合成、干扰细胞的分裂增殖速度及诱导癌细胞凋亡有关。

菱灵颗粒有效成分的抗肿瘤作用研究

目的:研究菱灵颗粒有效成分—化合物Ⅰ在体外对Hela细胞的作用及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)还原法检测化合物Ⅰ对肿瘤生长抑制作用,应用光学显微镜、透射电子显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果:化合物Ⅰ对人宫颈癌细胞生长具有明显的抑制作用及诱导细胞凋亡作用,且这种作用有剂量依赖关系,化合物Ⅰ25、12.5、6.25mg/L剂量组30h抑瘤率为52.04%、34.44%、23.72%,100、50、25、12.5、6.25、3.125mg/L剂量组30h抑瘤率显著正相关,相关系数r=0.9860(p<0.01),IC50值为10.9mg/L。透射电子显微镜对化合物Ⅰ25、12.5、6.25mg/L剂量组受试细胞观察,均出现不同程度细胞凋亡现象,细胞核明显皱缩、染色质趋边凝聚、线粒体空化等特征。流式细胞仪检测发现凋亡峰。结论:化合物Ⅰ对Hela细胞增殖抑制作用明显并且有诱导细胞凋亡作用。

RASSF1A基因在人乳腺癌细胞株MCF-7中的表达及对细胞增殖凋亡、体内成瘤能力的影响观察

目的观察Ras相关区域家族1异构体A(RASSF1A)基因在人乳腺癌细胞株MCF-7中的表达及对细胞增殖、凋亡、体内成瘤能力的影响,并探讨其作用的可能机制。方法取MCF-7细胞,分别感染RASSF1A过表达慢病毒oe-RASSF1A和空白载体慢病毒vector,记为oe-RASSF1A组和vector组。两组细胞继续培养72 h,采用qRT-PCR法检测两组细胞中的RASSF1A mRNA。两组细胞在培养24、48、72、96 h时,采用MTS法观察两组细胞增殖能力(以OD值表示细胞增殖能力)。两组细胞继续培养72 h,采用流式细胞仪测算各细胞周期比例。两组细胞继续培养72 h,采用流式细胞仪测算细胞凋亡率。两组细胞继续培养72 h,取1×10~7个细胞重悬于100μL PBS中,分别注射入10只4周龄雌性裸鼠右侧腋下,常规饲养4周后处死,解剖瘤体并称重,以瘤体重表示体内成瘤能力。两组细胞继续培养72 h,采用Western Blotting法检测两组细胞中的RASSF1A、磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(pPI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(pAKT)蛋白。结果oe-RASSF1A组细胞中RASSF1A mRNA相对表达量为13.25±3.20,vector组为1.00±0.03,两组相比,P<0.05。oe-RASSF1A组细胞在培养24、48、72、96 h时的OD值分别为0.36±0.02、0.53±0.06、0.74±0.13、0.91±0.07,vector组分别为0.35±0.03、0.62±0.14、0.95±0.08、1.34±0.21,在培养72、96 h时两组的OD值相比,P均<0.05。oe-RASSF1A组细胞处于G0/G1期、S期、G2/M期的比例分别为60.02%±3.21%、18.30%±2.31%、22.11%±1.03%,vector组分别为63.67%±4.16%、21.04%±2.65%、15.32%±2.52%,oe-RASSF1A组细胞处于G2/M期的比例与vector组相比,P<0.05。oe-RASSF1A组细胞凋亡率为24.38%±5.80%,vector组为4.25%±0.92%,两组相比,P<0.05。注射oe-RASSF1A组细胞的裸鼠成瘤的瘤体重为(63.29±14.03)mg,注射vector组细胞的裸鼠成瘤的瘤体重为(104.58±17.52)mg,两组相比,P<0.05。oe-RASSF1A组细胞RASSF1A、PI3K、pPI3K、AKT、pAKT蛋白相对表达量分别为8.67±1.32、0.86±0.21、0.26±0.15、0.91±0.11、0.30±0.07,vector组分别为1.05±0.04、1.00±0.00、1.01±0.01、1.04±0.04、1.00±0.00,两组细胞RASSF1A、pPI3K、pAKT蛋白相对表达量相比,P均<0.05。结论感染RASSF1A过表达慢病毒oe-RASSF1A的MCF-7细胞RASSF1A mRNA升高;过表达RASSF1A可抑制MCF-7细胞增殖、诱导细胞周期阻滞在G2/M期、促进细胞凋亡、抑制细胞体内成瘤能力,其机制可能与RASSF1A抑制PI3K/AKT信号通路有关。

含益髓灵兔血清诱导HL-60细胞凋亡与对Bcl-2抑制研究

目的 :探讨中药复方益髓灵治疗白血病作用机理 :方法 :在已知益髓灵具有诱导 HL- 60细胞凋亡的基础上 ,通过血清药理学方法 ,选择含不同浓度益髓灵初提物的兔药血清 ,与人急性早幼粒白血病 HL- 60细胞共同孵育不同时间后 ,观察兔药血清对 HL- 60细胞凋亡的影响 ,并对其发生凋亡机制进行初步探讨。结果 :益髓灵兔药血清有较强的诱导 HL- 60细胞凋亡作用 ,以 1 0 %兔药血清作用 48h效果最好 ,并发现其诱导凋亡机制与抑制 Bcl- 2基因表达相关。结论 :益髓灵进入动物体内也有诱导白血病细胞凋亡作用 ,其诱导白血病细胞凋亡是治疗白血病的关键机制之一。

灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞的诱导凋亡作用

[目的]观察灵芪胶囊含药血清在体外对K562白血病细胞凋亡的影响。[方法]采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用流式细胞仪(FCM)及DNA片段凝胶电泳观察和检测细胞凋亡情况。[结果]不同浓度灵芪胶囊含药血清能够诱导K562细胞的凋亡,且凋亡率随着剂量的增加而增大,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见典型的DNA梯形带形成。[结论]灵芪胶囊含药血清具有诱导细胞凋亡的作用,其作用强度与时间—浓度呈正相关。灵芪胶囊含药血清对K562细胞发生细胞毒作用可能与诱导K562细胞凋亡有关。

内异痛经灵调控Wnt7a/β-catenin信号通路改善子宫内膜异位症的实验研究

目的旨在明确内异痛经灵(NYTJL)对大鼠子宫内膜异位症的改善效果并从调控Wnt7a/β-catenin信号通路明确其分子机制。方法将30只雌性,SPF级,SD大鼠,随机分为5组,每组6只。除Control组外,Sham组、Model组、高剂量内异痛经灵(NYTJL-H,40 mg/kg)组和低剂量内异痛经灵(NYTJL-L,20 mg/kg)组均将大鼠子宫内膜固定在腹壁进行上造模;并对应灌胃给药,干预结束后,利用HE染色观察子宫内膜组织形态变化,应用Ki67免疫组化及TUNEL染色检测子宫内膜组织中细胞增殖及凋亡,应用RT-qPCR及蛋白印迹检测子宫内膜组织中Wnt7a及β-catenin的表达,以免疫荧光检测β-catenin的表达。结果与Model组比较,NYTJL高剂量组可以显著改善子宫内膜的组织学形态,降低浸润细胞数量,促进细胞分散排布,减少腺体数量,缩小腺腔体积;与Model组比较,NYTJL-H组和NYTJL-L组均可显著促进异位子宫内膜细胞凋亡,抑制异位子宫内膜细胞增殖;与Control和Sham组比较,Model组Wnt7a和β-catenin的mRNA和蛋白表达均显著上升,而与Model组比较,NYTJL-H组和NYTJL-L组对Wnt7a和β-catenin的表达有显著的抑制作用。结论NYTJL可以抑制Wnt7a/β-catenin信号通路进而促进异位子宫内膜细胞凋亡,进而治疗子宫内膜异位症。