Yarrowia lipolytica酵母产赤藓糖醇的工艺研究

对自行筛选诱变得到的高产菌（Yarrowia lipolytica）FT-3进行发酵条件优化试验。最佳培养基组成为：葡萄糖32%,酵母粉0.6%,柠檬酸铵0.5%,硫酸镁0.025%,p H自然;移种的最佳条件为：培养时长20h,出芽率50%,细胞密度8×108~10×108/m L;最佳发酵条件,温度：前期28℃,对数期和发酵中期30℃,发酵后期32℃;溶氧30%~40%,通气量7NL/min,约1.0vvm。在此条件下,发酵结束后醪液中赤藓糖醇的浓度达到187g/L。

利用米根霉混合培养饲用布拉迪酵母BS-F1的研究

本研究旨在利用米根霉和布拉迪酵母菌BS-F1混合培养的方法来生产饲用布拉迪酵母,并对其生产工艺进行优化,对混合发酵培养基进行了单因素和正交试验。结果表明:混合培养最佳培养基为玉米6%、豆粕3%、磷酸氢二铵0.2%。通过优化培养基组分和培养条件后,利用米根霉混合发酵,布拉迪酵母菌数可达到14.3亿/mL。

酵母水解物对哺乳犊牛生长性能、血清抗氧化指标和瘤胃菌群的影响

本试验旨在探讨补饲酵母水解物对哺乳犊牛生长性能、血清抗氧化指标及瘤胃菌群的影响。试验选取30头1日龄、健康、体重[(39±2)kg]相近的荷斯坦母犊牛,随机分为对照组(不补饲酵母水解物)和试验组(每头犊牛每天补饲5 g酵母水解物),每组15个重复,每个重复1头牛。试验期为63 d。记录犊牛体重和采食量,采集血清和瘤胃液样品,测定血清抗氧化指标和瘤胃菌群多样性。结果显示:1)补饲酵母水解物显著增加了犊牛14和28日龄的胸围以及28和42日龄的体斜长(P<0.05),但对生长性能和其他体尺指标未产生显著影响(P>0.05)。2)63日龄时,试验组血清中丙二醛(MDA)含量显著低于对照组(P<0.05),总抗氧化能力(T-AOC)显著高于对照组(P<0.05);7日龄时,试验组血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著高于对照组(P<0.05)。3)补饲酵母水解物使犊牛瘤胃菌群的Alpha多样性指数(Chao1和Observed-species指数)显著降低(P<0.05);同时,Beta多样性也发生了显著变化(P<0.05)。30日龄时,试验组瘤胃菌群中互养菌门(Synergistota)的相对丰度显著低于对照组(P<0.05),而放线菌门(Actinobacteriota)的相对丰度显著高于对照组(P<0.05);试验组瘤胃菌群中理研菌科RC9肠道群(Rikenellaceae_RC9_gut_group)的相对丰度在60日龄时显著低于对照组(P<0.05),而解琥珀酸菌属(Succiniclasticum)和普雷沃氏菌属7(Prevotella_7)的相对丰度在30日龄时显著高于对照组(P<0.05)。综上可知,在本试验条件下,每天每头补饲5 g酵母水解物对哺乳犊牛整体生长性能无显著影响,但显著提高了犊牛的抗氧化能力,并调节了瘤胃菌群结构,有助于改善犊牛健康状况。

产油酵母的研究现状与展望

生物能源是从生物来源的材料制成的可再生能源,主要分为生物质能、生物燃料、生物气体三大类,具有绿色、低碳、清洁、可再生等优点.微生物油作为第三代生物柴油,有可能成为传统化石燃料的绿色替代品,是缓解能源挑战和环境问题的研究热点.本文综述产油酵母油脂合成与调控机制以及代谢工程等研究进展.产油酵母作为微生物油生产的主体,其异柠檬酸脱氢酶的活性依赖一磷酸腺苷(AMP),使得它们在限氮条件下大量积累油脂;酵母积累油脂受到各种条件的影响(比如碳氮源、温度、溶氧、pH值等),相关碳氮源利用与胁迫调控转录因子GAT1、MIG1、ASG1、MYB、GRAS、CBF11、TORC1 bHLH8和PHD等也调控其脂代谢.但产油酵母相对于酿酒酵母来说,其油脂合成机制与遗传背景依旧不清晰,限制了其工业化应用.因此,未来还需要加强微生物油生产技术的研究,从提高菌株鲁棒性、增加经济性代谢副产物产量、提高廉价底物利用能力等方面降低微生物油的生产成本,使其成为传统化石燃料的有效替代品.

蜂蜜中嗜渗酵母菌TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立

【目的】建立蜂蜜中嗜渗酵母菌的快速检测方法,为保障蜂蜜品质提供理论基础。【方法】根据GenBank中嗜渗酵母菌26S rDNA D_(1)~D_(2)基因序列设计特异性引物,PCR扩增获得嗜渗酵母D_(1)~D_(2)基因片段,构建重组质粒pMD-18T-JM为阳性标准品,对荧光定量PCR反应条件进行优化,建立嗜渗酵母菌TaqMan探针实时荧光定量PCR方法,并对160份蜂蜜样品进行验证。【结果】建立的蜂蜜中嗜渗酵母菌TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法特异性好,灵敏度达0.004 pg/μL。TaqMan实时荧光定量PCR检测阳性率达98.5%,比普通PCR检测(阳性率84.1%)高14.4百分点,检测敏感性达100%。【结论】嗜渗酵母菌TaqMan探针实时荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速、重复性好,适合于蜂蜜中嗜渗酵母菌的快速检测。

生物胁迫下黄瓜酵母双杂交cDNA文库构建与鉴定

以黄瓜抗病高代自交系D9320为试验材料,采用Gateway技术构建了黄瓜霜霉病和棒孢叶斑病菌胁迫下黄瓜酵母双杂交cDNA文库。结果表明:酵母文库克隆数为350个,文库滴度为3.5×10^(7)CFU/mL,重组率达到100%,插入片段长度在750~2000bp,平均片段长度超过1000bp。文库容量和重组率及插入片段大小均说明霜霉病菌和棒孢叶斑病菌胁迫下黄瓜酵母双杂交cDNA文库构建成功,可用于黄瓜双抗机制互作蛋白的筛选。

日粮中添加酵母提取物有益于猪只生长

0引言众所周知,饲料中有较高水平的霉菌毒素就会影响猪只的健康及其生长性能,从而影响猪场经济效益。现在越来越多的研究表明,即使饲料中霉菌毒素含量水平较低,(长期摄食的话)也会对猪只产生不良影响,因此也不能轻视。霉菌毒素是世界各地猪饲料中常见的污染物,一旦摄入霉菌毒素,就会对猪只造成不利的影响。日粮中添加酵母细胞壁提取物对猪只的生长及健康有益,它可有效应对猪饲粮中的霉菌毒素问题。

分离纯化重组解脂耶氏酵母发酵液中虫草素的研究

多项研究证明以解脂耶氏酵母作为虫草素生物合成的细胞工厂,是获得虫草素的有效途径。为获得下游虫草素分离纯化工艺,该研究采用不同规格的大孔吸附树脂对重组解脂耶氏酵母发酵液中的虫草素进行静态、动态纯化。结果显示,以NKA-Ⅱ大孔吸附树脂作为吸附材料,在虫草素质量浓度为3 mg/mL、pH值为9的上样液以上样流速为3 BV/h、上样体积为10 BV、洗杂流速为2 BV/h、洗杂体积为3 BV、洗脱剂为体积分数为30%乙醇、洗脱流速为3 BV/h、洗脱体积为15 BV时,发酵液中虫草素回收率可达到87.67%,纯度达65.82%。该研究为今后利用重组解脂耶氏酵母大规模生产制备虫草素提供数据参考。

一株抗真菌卡利比克迈耶氏酵母(Meyerozymacaribbica lut-Y1)的鉴定及其抑菌活性

该文从宁夏枸杞果实霉腐斑中分离得到一株能拮抗多种病原真菌的酵母lut-Y1菌株,研究该菌株的菌落形态、细胞形态、生长曲线特征及适宜的生长温度、pH值及盐耐受度,用平板对峙法观察该菌株对链格孢菌(Alternaria alternate)、小孢壳二孢(Ascochyta leptospora)、细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)的拮抗效果,并分析该菌株发酵液对3种病原真菌的抑菌活性。结果表明,酵母lut-Y1菌株在PDA液体培养基上生长良好,能分泌红色素,并具有酵母菌的一般形态特征。根据形态、rDNA-ITS区测序比对和系统进化树分析将酵母lut-Y1菌株鉴定为卡利比克迈耶氏酵母(Meyerozyma caribbica)。酵母lut-Y1菌株在PDA液体培养下,6~18 h后进入对数生长期,18~36 h为稳定生长期,其适宜的生长温度和pH值分别为30℃和6~7,最适生长NaCl浓度为0%~3%。酵母lut-Y1菌株菌落与3种霉菌菌落之间形成明显的抑菌带。该菌株发酵液浓度与3种病原真菌生长圈直径之间均呈极显著负相关(P<0.01),根据拟合方程,发酵液浓度分别为42.04%、38.42%、37.03%时,可完全抑制链格孢菌、小孢壳二孢、细极链格孢菌生长。酵母lut-Y1菌株可作为一种有广谱抑菌效果的生物防治菌,应用于果蔬防腐。

德尔布有孢圆酵母对苹果酒发酵过程风味物质合成的影响

本研究利用德尔布有孢圆酵母(Torulasporadelbrueckii)与酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)进行苹果酒发酵实验,通过比较混合发酵与酿酒酵母单独发酵过程中有机酸以及挥发性风味物质差异,探究德尔布有孢圆酵母对苹果酒风味物质合成的影响。结果表明,德尔布有孢圆酵母显著提高了苹果酒中草酸(+0.077 g/L)、乙酸(+1.68 g/L)、L-乳酸(+0.83 g/L)以及琥珀酸(+0.45 g/L)的含量(P<0.01),并减少了苹果酒中高级醇的数量。共现网络分析显示德尔布有孢圆酵母的加入增强了挥发性风味物质合成的稳定性。此外,混合发酵显著提升了苯乙醇、苯甲醛、乙酸苯乙酯、辛酸、己酸等11种挥发性风味物质含量,有助于凸显苹果酒中苹果特征香、花果香,增强蜜甜感。基于差异风味物质通路富集结果,德尔布有孢圆酵母可赋予发酵体系更强的原料利用能力,糖类物质的转化能力以及风味物质合成能力。研究结果表明该菌株有着优异的混合发酵性能,为其在苹果酒酿造中进一步利用提供了依据。

酵母及其衍生物在果酒酿造中的特性及应用进展

在果酒生产中,酵母及其衍生物具有关键作用。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)与非酿酒酵母(non-Saccharomyces)通过不同代谢途径共同参与并决定果酒的风格与品质;酵母衍生物在果酒发酵阶段可提高酵母活力、增强发酵效率,在发酵后阶段可促进酒体协调、提升感官品质。因此,酵母及其衍生物在果酒酿造过程中有天然不可分割的关系。目前,有关酵母及其衍生物在果酒酿造过程中的协同应用主要集中在葡萄酒上,在其他果酒上的系统研究仍鲜见报道。该文综述果酒酿造常用酿酒酵母、非酿酒酵母种类、特性、功能及在果酒酿造中的应用,介绍酵母衍生物的酿造特性及功能作用,旨在为我国果酒产业高质发展提供理论依据。

高脯氨酸利用能力的本土酿酒酵母的筛选

脯氨酸是葡萄汁中含量最为丰富的α-氨基酸之一,但难以被酵母利用。为筛选出高脯氨酸利用能力的本土酿酒酵母,本研究对靛红衍生化比色法进行了优化,确定了脯氨酸的最佳检测条件;在以脯氨酸为唯一氮源的模拟葡萄汁中检测了17个酿酒酵母菌株对脯氨酸的利用特性,于含有不同水平酵母可同化氮(YAN)和脯氨酸的模拟汁中检测菌株发酵后的脯氨酸残留量,计算脯氨酸利用率。结果表明,在100 mg·L^(-1) YAN+350 mg·L^(-1)脯氨酸和250 mg·L^(-1) YAN+200 mg·L^(-1)脯氨酸的条件下,与450 mg·L^(-1) YAN相比,酿酒酵母的平均发酵速率减缓了22.98%和12.15%,其中本土酿酒酵母LFP525的脯氨酸利用率达69.42%与62.31%,高出EC1118商业酿酒酵母5.42个百分点与11.29个百分点,有较高的应用潜力。

黄萎病菌诱导下陆地棉酵母双杂交文库的构建及GhMAPKKK2互作蛋白的筛选

为了探究棉花响应黄萎病菌侵染的分子机制并筛选GhMAPKKK2的互作蛋白,以陆地棉XLZ35为材料,基于Gateway克隆技术构建了棉花黄萎病菌诱导的陆地棉酵母双杂交文库,其中初级文库和次级文库的库容分别为1.2×10^(7)和2.0×10^(7)CFU,插入片段重组率均为100%且平均长度大于1000 bp。次级文库质粒浓度为953 ng·μL^(-1),符合构建酵母文库的标准,可用于酵母双杂交筛选互作蛋白。构建了pGBKT7-GhMAPKKK2表达载体,并验证了该载体对酵母细胞无毒性且不存在自激活活性。以GhMAPKKK2为诱饵蛋白,利用酵母文库初步筛选,获得81个阳性互作蛋白,经测序对比选取6个候选蛋白,通过酵母双杂交及双分子荧光互补试验(BiFC)验证,明确了候选蛋白GhFLA与GhMAPKKK2存在互作关系。本研究结果为解析GhMAPKKK2调控棉花抗黄萎病反应分子机制及调控网络提供了重要参考。

一株梅奇酵母与商业酿酒酵母发酵对枸杞酒品质的影响

枸杞酒作为枸杞深加工的主要产品之一,具有抗疲劳、抗氧化、提高免疫力等多种生理功能。目前枸杞酒基本都是采用单纯的酿酒酵母发酵,而非酿酒酵母对于枸杞酒酿造的影响研究很少。为选育适用于枸杞酒发酵的非酿酒酵母菌,提升枸杞酒的香气,该文从枸杞鲜果、枸杞叶和枸杞园的土壤中分别采样并进行筛选,获得6株非酿酒酵母,通过耐受性实验,发现其中1株菌(编号JMJ)发酵性能较好,经26S rDNA序列分析,确定该菌为美极梅奇酵母。以商业酿酒酵母STR单独发酵的枸杞酒作为对照,用非酿酒酵母JMJ与商业酿酒酵母STR进行混合发酵,结果发现,JMJ与STR接种比例为10∶1的顺序发酵有利于枸杞酒中香气物质的积累。

耐盐产香埃切假丝酵母的筛选、特性分析及其在豆瓣酱的应用

为丰富豆瓣酱的风味,从自然发酵酱醅中筛选得到一株耐盐产香酵母,经鉴定为埃切假丝酵母(Starmerella etchellsii)Y18。该酵母的耐盐性较好,能耐受200 g/L盐度,且具有较好的产香代谢能力。将Y18菌株豆瓣酱发酵过程中进行生物强化接种,能够显著提高酱醅中的挥发性风味物质种类和含量,具有更强的果香和酱香,其中酯类和醇类物质的种类分别增加26种和3种,含量分别提高了8.28倍和6.71倍。此外,接种埃切假丝酵母Y18酱醅中苯乙酸乙酯、苯乙醇、3-甲硫基丙醇和2,3,5-三甲基吡嗪等重要挥发性风味物质的含量也有显著的提高。因此,埃切假丝酵母Y18有利于提升酱醅的风味,在豆瓣酱的工业化生产过程中具有潜在的应用价值。

高产乙醇酿酒酵母单倍体的诱变选育及杂交育种

乙醇作为一种可再生能源,其生产主要以酵母代谢为主,而筛选高耐性高产乙醇菌株是乙醇产率高的关键。该文以6株现有单倍体酿酒酵母为出发菌株,通过常温常压等离子诱变构建突变文库,经氯化三苯基四氮唑显色初筛,40、41℃压力生长复筛,发酵筛选培养基定量分析。最终获得9株优势突变酿酒酵母单倍体菌株,经不同配型单倍体杂交,成功获得一株发酵效率高,耐温、耐酸、耐乙醇性能均优于亲本菌株的二倍体酿酒酵母菌株C6。结果显示,C6菌株35℃复合糖水发酵培养基发酵终点酒精度为14.6%,亲本菌株AE2和M则为12.82%和13.72%,酒精度分别提高13.8%和6.4%,C6菌株在30℃条件下,酒精度可达17.9%。耐温性能提高较为明显,40℃条件下生长,C6、AE2和M菌株平稳期OD _(680)值分别为4.12、0.35和1.15,生物量增幅在1.2~12倍。C6菌株在乙醇生产领域具有较高的工业应用价值。

贺兰山东麓产区非酿酒酵母筛选及发酵特性研究

该研究对112株宁夏本土非酿酒酵母进行高糖、乙醇、pH、SO_(2)耐受性筛选及生长曲线的测定,筛选出耐受性强的本土非酿酒酵母进行赤霞珠葡萄酒发酵试验,通过理化指标测定、感官评价和挥发性物质测定,研究菌株发酵特性。结果表明,筛选出的4株本土非酿酒酵母YC-A13、YC-B10、YC-C13、YQY-B12均可耐受葡萄糖质量浓度450 g/L、乙醇含量13%、pH 1.0、SO_(2)质量浓度250 mg/L,优于商业酿酒酵母F33、CECA、XR。与商业酿酒酵母发酵酒样相比,4株本土非酿酒酵母发酵酒样产生了独有的香气物质癸酸乙酯、2-糠酸乙酯,质量浓度分别在17.63~19.85μg/L、4.04~20.42μg/L,癸酸甲酯的OAV>1可作为葡萄酒的主要香气成分;YC-B10、YC-C13、YQY-B12发酵酒样中产生了具有草本香、蔷薇花香的香茅醇,质量浓度在5.82~8.43μg/L。非酿酒酵母菌株发酵酒样之间产生的香气物质也存在明显差异,葡萄汁有孢汉逊酵母YC-B10和YQY-B12发酵酒样中产生了该种属独有的香气物质己酸丁酯,质量浓度分别为69.31和69.06μg/L,还分别产生了具有奶酪香气的己酸(质量浓度为536.25μg/L)和具有杏仁、菠萝香气的丙酸异戊酯(质量浓度为1.71μg/L)。美极梅奇酵母YC-A13和泽普林假丝酵母YC-C13发酵酒样中产生了具有脂香、黄油香气的2,3-丁二酮,质量浓度分别为69.31和69.06μg/L。美极梅奇酵母YC-A13中检测出具有扁桃仁、脂香气的1-戊醇,含量为280.15μg/L,OAV>0.1可作为潜在香气成分。综上所述,筛选出的4株优良本土非酿酒酵母具有不同的发酵特性,在提升葡萄酒香气品质和丰富度方面都有着独特的贡献与优势,为酿造具有产区特色的葡萄酒提供了理论依据。

鹿源藿香假丝酵母菌DZ018的分离鉴定及其体外益生特性研究

[目的]从梅花鹿瘤胃液中分离和鉴定出具有益生菌潜能的酵母菌,并对其体外益生功能进行评价,为其在动物营养与饲料中应用以及鹿源益生菌制剂的研制提供参考。[方法]采用YPD固体培养基从健康雄性梅花鹿瘤胃液中分离出酵母菌菌株,对分离株进行形态学观察、生理生化和分子生物学鉴定,测定其生长性能及产酸性能,并绘制生长曲线;探究其在不同pH、不同浓度胆盐及人工胃液和人工肠液中的耐受性;采用纸片扩散法(K-B法)检测菌株的药物敏感性,并对菌株进行小鼠安全性试验。[结果]从梅花鹿瘤胃液中分离到1株优势酵母菌,并将其命名为DZ018,其菌落菌体形态特征、生理生化特性和ITS rRNA序列均与藿香假丝酵母菌(Candida rugosa)的特征相符。生长性能测定结果显示,分离株在YPD液体培养基中生长迅速,培养2 h时进入对数生长期,且具有一定的产酸能力。耐受性评价结果显示,分离株对低pH有较好的耐受性,在pH为2.5~6.5范围内均能正常生长,最适生长pH为4.5;对胆盐耐受性较强,在0.3%和1.0%胆盐中存活率均>100%,在2.0%胆盐中存活率可达74.27%;在人工胃液和人工肠液中的存活率分别为31.64%和64.80%。药敏试验结果显示,分离株对氟胞嘧啶、氟康唑和酮康唑表现敏感,对两性霉素B耐药。小鼠安全性试验结果显示,分离株对小鼠生长性能和脏器系数均无不良影响。[结论]本研究从梅花鹿瘤胃液中分离获得1株具有一定益生潜力的藿香假丝酵母菌DZ018,其耐受性强、安全性好。试验结果为鹿源益生菌在鹿科动物生产中的应用及微生态制剂的开发提供参考和理论依据。

细粒棘球绦虫EgM123表面展示型酿酒酵母菌株的构建及免疫原性初步评价

旨在构建并制备细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株,并初步评价其免疫效果,以期为细粒棘球绦虫终末宿主酿酒酵母活载体口服疫苗的研发提供理论基础。克隆细粒棘球绦虫EgM123基因,构建EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母菌株。诱导培养表面展示型酿酒酵母EBY100/pYD1-EgM123,并进行体外分析,通过免疫荧光分析以及BCA蛋白定量法对EgM123蛋白进行定位鉴定及定量分析。诱导表达表面展示型酿酒酵母EBY100/pYD1-EgM123菌株并免疫BALB/c小鼠。通过检测小鼠血清中抗体及细胞因子水平变化评价细粒棘球绦虫EgM123口服酵母活载体菌株的免疫效果。结果成功克隆了细粒棘球绦虫EgM123的ORF序列,长度为594 bp。PCR检测以及酶切鉴定结果表明,成功构建EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母菌株。免疫荧光结果显示,EBY100/pYD1-EgM123表面具有绿色荧光,BCA蛋白定量法测定50 OD_(600 nm)EBY100/pYD1-EgM123诱导72 h后蛋白的表达量为15.59μg,浓度为0.31μg/OD_(600 nm)。抗体水平检测结果表明,EBY100/pYD1-EgM123免疫组特异IgG、IgA、IgM抗体的分泌均高于PBS组、EBY100组及EBY100/pYD1组(P<0.05)。细胞因子检测发现,EBY100/pYD1-EgM123免疫组对小鼠细胞因子IL-17、IFN-γ的分泌量显著加强(P<0.001)。综上所述,通过对细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株免疫效果的初步评价,发现该口服活载体菌株具有免疫原性,可以刺激小鼠产生特异性免疫应答,进一步说明其具有成为终末宿主抗囊型包虫候选疫苗的潜力。

基于酿酒酵母多拷贝系统策略提高三乙酸内酯的产量

三乙酸内酯(triacetic acid lactone,TAL)是一种具有广泛应用前景的聚酮,可用作各种有机化合物的前体。为了提高酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中TAL的产量,该研究利用基因组重复序列整合的方法构建了S.cerevisiae多拷贝整合系统,应用该系统提高TAL的生产。首先以绿色荧光蛋白表征多拷贝Delta1整合,通过截短遗传霉素和潮霉素B两种抗生素基因的启动子以及增加抗生素浓度的方法增加筛选压力,进而提高整合效率和拷贝数,最优参数为将抗生素基因启动子截短至15 bp的同时采用160μg/mL的抗生素。将该优化系统随后用于新的多拷贝整合位点Delta2的表征。最后应用该系统合成TAL,通过HPLC分析TAL产量。结果表明,利用Delta1和Delta2序列表征绿色荧光蛋白的最高拷贝数分别为10和7,Delta1略优于Delta2。应用该系统在S.cerevisiae中合成TAL,Delta1和Delta2的产量分别为1.50、1.17 mmol/L,比单拷贝菌株产量分别提高460%和337%。该多拷贝系统有效提高了TAL的产量,为S.cerevisiae异源途径的表达提供了一种高效、模块化的多拷贝整合方法。