水蛭素-草酸二维生素E酯脂质体的构建及其体外抗凝作用评价

目的基于维生素E,构建同时具有过氧化氢清除功能和抗凝作用的脂质体,探讨其是否可以作为急性缺血性脑卒中的治疗方式并评价其体外抗凝作用。方法利用过氧草酸酯键将两分子维生素E(生育酚,VE)化学键合,得到目标化合物草酸二维生素E酯(oxalate vitamin E,OVE);通过酰胺化反应将抗凝药物水蛭素(hirudin)连接到亚油酸(linoleic acid,LA)得到抗凝目标单元亚油酸-水蛭素(LA-hirudin,LH);并通过红外光谱、核磁等手段对所合成的产物进行结构表征。采用薄膜分散法制备水蛭素-草酸二维生素E酯脂质体(hirudin-OVE liposome,HOL),采用激光粒度仪(DLS)和透射电子显微镜(TEM)等方法对脂质体进行表征。选取小鼠脑微血管内皮细胞(mouse brain-derived endothelial cells,bEnd3)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)进行细胞实验。通过ELISA测定过氧化氢以及细胞炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平,以评价脂质体对细胞氧化应激和炎症水平的影响。采用细胞计数实验(CCK-8)和细胞增殖检测实验(Edu)考察脂质体对细胞数目和细胞增殖情况的影响。取小鼠全血,考察所制备脂质体的抗凝作用。结果核磁结果表明成功合成了OVE,红外谱图结果表明水蛭素和亚油酸成功键合得到亚油酸-水蛭素。透射电镜和激光粒度仪结果表明所制备的脂质体形状为类球形,且粒径分布均匀,平均粒径为161 nm。细胞实验表明,脂质体能够显著抑制模型细胞分泌过氧化氢和炎症因子,具有明显的抗氧化、抗炎作用(P<0.05)。细胞计数实验和细胞增殖检测实验结果证明脂质体能够抑制炎症导致的细胞数目减少、缓解LPS刺激所引起的细胞增殖抑制(P<0.01)。抗凝实验结果表明,脂质体能够显著抑制CaCl 2诱导的凝血反应(P<0.01)。结论基于维生素E成功合成过氧化氢清除性材料OVE,并以抗凝药物水蛭素和OVE制备OVE抗凝脂质体(HOL),该脂质体在细胞层面上具有良好的抗氧化、抗炎效果,并具有显著的抗凝作用。

Immunoadjuvant action of liposomes for entrapped Japanese Encephalitis virus E－glucoprotein

ＩｍｍｕｎｏａｄｊｕｖａｎｔａｃｔｉｏｎｏｆｌｉｐｏｓｏｍｅｓｆｏｒｅｎｔｒａｐｐｅｄＪａｐａｎｅｓｅＥｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓＥ－ｇｌｕｃｏｐｒｏｔｅｉｎ￥ＨｕＪｕｎ（胡军）；ＭａＷｅｎｙｕ（马文煜）；ＨｕａｎｇＱｉｎｇｓｈｅｎｇ（黄庆生）...

脂质体携载前列腺素E_1对止血带休克大鼠脂质过氧化的影响

在大鼠止血带休克模型上观察了应用脂质体携载前列腺素E1对止血带休克的影响，发现以脂质体包裹前列腺素E1可显著缓解应用止血带的动物松带后的血压进行性降低及血浆乳酸脱氢酶、组织蛋白酶D活性的增高，与此同时降低了血浆和组织中脂质过氧化产物丙二醛的含量。但应用游离前列腺素E1则无上述明显效果。表明，脂质体携载前列腺素E1具有减轻大鼠松解止血带后的细胞损伤作用，这一作用可能是通过抗组织脂质过氧化反应实现的。

维生素E脂质体的制备

用超声波法制备了维生素E脂质体，测定了脂质体的包封率及放置后的稳定性；观察了脂质体的形态，粘度分布。0．2％维生素E脂质体用于治疗老年性角化斑，试用20例总有效率达95％，优于1％维生素E乳剂。

气管内应用脂质体前列腺素E_1对油酸致大鼠急性肺损伤的保护作用

目的：探讨气管内应用脂质体携载的前列腺素Ｅ１（ＬｉｐＰＧＥ１）对油酸致大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法：Ｗｉｓｔａｒ大鼠４０只，随机均分为５组：正常对照组、油酸致伤组、ＬｉｐＰＧＥ１组、游离前列腺素Ｅ１（ＦＰＧＥ１）组和空白脂质体（ＰＬｉｐ）组。观察肺系数、肺湿重／干重比、肺组织碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）、髓过氧化酶（ＭＰＯ）的活性和丙二醛（ＭＤＡ）含量的变化。结果：与油酸损伤组比较，ＬｉｐＰＧＥ１组的肺系数、肺组织湿重／干重比与ＭＰＯ活性、ＭＤＡ水平明显降低，而ＡＬＰ与ＡＣＥ活性显著提高；ＬｉｐＰＧＥ１的作用显著优于ＦＰＧＥ１；ＰＬｉｐ无效。结论：经气管内给予ＬｉｐＰＧＥ１对油酸引起的大鼠急性肺损伤有良好的保护作用，其机制可能与抑制肺内中性粒细胞的聚集与抗氧自由基所造成的损伤有关。

Lipo-PGE_1对老年PAOD微循环及血液流变学的影响

目的 动态观察前列腺素E1脂微球载体制剂 (Lipo PGE1)对老年周围动脉硬化闭塞症 (PAOD)患者的足背激光多普勒血流成像、甲襞微循环及血液流变学的影响和疗效。 方法 36例PAOD住院患者 ,给予Lipo PGE110 μg·d-1,静脉滴注 ,共 14d。观察治疗前后临床症状、踝肱指数变化、足背激光多普勒血液成像的改变、血液流变学、甲襞微循环指标等。 结果 治疗后临床症状明显改善 ,甲襞微循环的总积分值明显降低 (P <0 0 1) ,血粘度降低 (P <0 0 5 )。踝肱指数增加 ,足背激光多普勒血流成像明显改善。 结论 Lipo PGE1可明显降低血粘度 ,改善甲襞微循环 ,改善PAOD患者的临床症状 ,可安全有效的用于老年PAOD的治疗。甲襞微循环明显障碍 。

硫酸多粘菌素E脂质体的制备及含量和包封率的测定

目的:建立硫酸多粘菌素 E 脂质体的含量测定和包封率的 RP-HPLC 方法。方法:Diamonsil C_8柱(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为0.01mol·L^(-1)三氟乙酸-乙腈,从77%～75.5%二元梯度洗脱;流速:1.0mL·min^(-1);紫外检测波长:205nm;进样量:20μL;柱温:30℃。采用5%聚乙二醇辛基苯基醚的乙醇溶液对硫酸多粘菌素 E 脂质体进行破乳测定含量,用透析法分离硫酸多粘菌素 E 脂质体和游离药物。结果:硫酸多粘菌素 E_1在50～300μg·mL^(-1)范围内线性良好(r=0.9998,n=5),日内精密度的 RSD 分别为1.34%,1.53%,1.97%(n=5),日间精密度的 RSD 分别为1.46%,1.62%,2.05%(n=5)。高、中、低3个浓度的回收率分别为101.2%,99.6%,98.5%;RSD 分别为0.49%,0.61%,0.36%(n=3)。结论:该方法准确可靠、简单快速,可用于硫酸多粘菌素 E 脂质体的含量和包封率的测定。

维生素E脂质体的制备工艺筛选、优化及其性质研究

目的优化维生素E（VE）脂质体的制备工艺并考察其性质。方法采用乙醇注入法、乙醚注入法、逆相蒸发法、薄膜水化法和复乳法分别制备v。脂质体，以包封率和保留率为考察指标，选择最优制备方法；经L9（3^4）正交试验设计优化选择，确定脂质体的最佳配方。结果薄膜水化法制备所得的VE脂质体包封率最高，VE保留率较高；用薄膜水化法制备脂质体的最佳配方为磷脂：VE：胆固醇=20：0．8：1．5；用透射电镜观察最佳实验组VE脂质体发现其具有指纹状结构，Zeta电位为．30．9±0．9mV，平均粒径为33．7nm。结论薄膜水化法制得的V。脂质体具有包封率高，VE保留率高，粒径均匀等特点。

经气道应用脂质体携载前列腺素E_1减轻油酸型大鼠肺损伤

目的研究经气道应用脂质体携载前列腺素Ｅ１（Ｌ－ＰＧＥ１）对油酸所致的大鼠急性肺损伤的保护作用。方法观察肺水肿的程度，测定肺组织碱性磷酸酶（ＡＬＰ）与血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性。结果Ｌ－ＰＧＥ１明显降低了损伤大鼠的肺系数（Ｐ＜０．０１）和肺湿重／干重比（Ｐ＜０．０５），显著提高了肺组织的ＡＬＰ（Ｐ＜０．０１）与ＡＣＥ（Ｐ＜０．０５）的活性。Ｌ－ＰＧＥ１的作用明显优于游离的ＰＧＥ１或空白脂质体。结论气道内给予Ｌ－ＰＧＥ１对治疗急性肺损伤具有良好的效果。

包裹外毒素Ⅲ的VEGF-脂质体靶向杀伤肿瘤血管内皮细胞的实验研究

目的 利用包裹绿脓杆菌外毒素单元Ⅲ的VEGF (血管内皮生长因子 ) 脂质体于体外靶向杀伤肿瘤血管内皮细胞。方法 通过结合实验 ,验证VEGF连接脂质体对肿瘤血管内皮细胞具有特异结合能力。利用体外细胞毒实验(MTT)方法 ,检测外毒素单元Ⅲ及靶向脂质体包裹的单元Ⅲ对肿瘤血管内皮细胞的杀伤作用。结果 连有VEGF的脂质体可与表达血管内皮生长因子受体 (VEGFR)的肿瘤血管内皮细胞特异性结合 ,结合率可达非特异性脂质体的 2倍。在去除外毒素单元Ⅰ和Ⅱ后 ,单元Ⅲ的细胞毒作用消失 ,但包裹单元Ⅲ的VEGF 脂质体可特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞。结论 VEGF 脂质体可特异性地识别肿瘤血管内皮细胞 ,并作为良好载体将绿脓杆菌外毒素单元Ⅲ带入细胞 ,实现其杀伤作用 ,可望成为一种有效的抗肿瘤物质。

不同制备方法对硫酸多黏菌素E脂质体包封率的影响

目的筛选硫酸多黏菌素E脂质体2种制备方法的最优处方,选择适合的制备方法。方法薄膜分散-超声法、逆相蒸发法制备脂质体,HPLC测定硫酸多黏菌素E脂质体包封率,正交设计法优化脂质体处方。结果制得的脂质体形状均匀、粒径适宜,包封率较高。结论逆相蒸发法较薄膜分散-超声法更适合于硫酸多黏菌素E脂质体的制备。

维生素E、维生素C和BHT对大豆磷脂脂质体的抗氧化作用

用共轭二烯法和硫代巴比妥酸法,研究了维生素E对大豆磷脂脂质体的抗氧化作用,以及维生素C和BHT对维生素E抗氧化作用的影响.结果表明,维生素E可抑制大豆磷脂脂质体的氧化,其抑制作用随着加入量的增加而增强。维生素C和BHT对维生素E的抗氧化作用具有明显的协同作用,BHT的协同作用强于维生素C。因此以大豆磷脂为原料制备脂质体的最佳抗氧化剂是维生素E和BHT,最佳用量是x(维生素E)=5%,x(BHT)=4%。

维生素E和维生素C对大豆磷脂脂质体的抗氧化作用

利用分光光度法，研究了不同含量维生素Ｅ或维生素Ｃ对大豆磷脂脂质体的抗氧化保护作用及维生素Ｃ的存在和温度的变化对维生素Ｅ抗氧化作用的影响．结果表明，适量维生素Ｅ可明显抑制磷脂脂质体的氧化，含量越高，抑制作用越强；大量维生素Ｃ虽可起到抗氧化作用，但少量维生素Ｃ在铁离子的存在下却可起到促氧化作用；维生素Ｃ的存在对维生素Ｅ的抗氧化作用具有明显的协同作用；

微脂球载体前列腺素E_1治疗肾病综合征疗效观察

目的 探讨微脂球载体前列腺素E1(LipoPGE1)对肾病综合征的治疗作用。方法 18例肾病综合征患者 ,采用治疗前后自身对照方法进行研究。给予LipoPGE12 0 μg +10 %Glucose 5 0 0mlivdrip .每天 1次 ,连续 2 8天为一疗程。对血压 15 0 / 90mmHg以上者给予Betaloc 75mg、DHCT 2 5mg/d。在开始LipoPGE1治疗前的 1周内 ,停用血管紧张素转换酶抑制剂和钙离子拮抗剂。在用药开始前和结束后的 3天内 ,测定 2 4h尿量、2 4h尿蛋白定量、尿钠、尿肌酐、血肌酐、血尿素氮、内生肌酐清除率 (Ccr) ,同步测定血白蛋白、谷丙转氨酶、胆固醇、甘油三酯等。结果 用药后较用药前尿量增加 (P<0 .0 5 ) ,尿蛋白明显减少 (P <0 .0 1) ,Ccr明显提高 (P <0 .0 1)。结论 LipoPGE12 0 μg +10 %Glucose 5 0 0mlivdrip每天 1次 ,连续 2 8天 ,可以使肾病综合征患者尿量增加 ,尿蛋白含量降低 。

壳聚糖包衣的维生素E脂质体的制备及其体外性质考察

目的:制备壳聚糖(CS)包衣的维生素E(VE)脂质体,以期提高VE的稳定性。方法:用薄膜分散法制备VE脂质体,用0.1%CS溶液包衣。以包封率为指标,筛选出最佳的卵磷脂与胆固醇的比例及VE投药量,并对最佳处方制备的CS包衣VE脂质体进行形态、粒径、ζ电位及VE稳定性考察。结果:包封率最大的配方为卵磷脂:胆固醇为40:60,VE用量为70 mg,脂质体形态圆整,可见明显的CS包衣层,ζ电位由包衣前的负值变为包衣后的正值,说明CS包衣成功。与VE原料、VE脂质体初悬液相比,CS包衣VE脂质体体外稳定性显著提高。结论:CS包衣VE脂质体可明显增加VE的体外稳定性。

葫芦素E溶解度、正辛醇-水及脂质体-水分配系数测定

目的测定葫芦素E溶解度、正辛醇-水分配系数及脂质体-水分配系数。方法分别采用平衡法、经典摇瓶法及平衡透析法测定葫芦素E溶解度、正辛醇-水分配系数及脂质体-水分配系数。结果葫芦素E在水中溶解度为0.155 mg.L-1,在乙醇、叔丁醇中有潜溶现象;正辛醇-水分配系数为（2.088±0.054）;脂质体-水分配系数为0.003~1.819。结论葫芦素E为水不溶性药物;正辛醇-水分配系数及脂质体-水分配系数均中等偏低。

脂质体携载前列腺素E_1对大鼠动脉血压的影响

为了探讨脂质体对前列腺素Ｅ１生物学作用的影响，使用麻醉大鼠和离体灌流的动脉条比较脂质体前列腺素Ｅ１和游离前列腺素Ｅ１对平均动脉血压及血管舒张作用的影响。结果发现与游离前列腺素Ｅ１比较，脂质体前列腺素Ｅ１降低平均动脉血压的幅度增大，血管舒张时间延长。

维生素E脂质体对猪肉制品品质的影响

本文通过研究添加维生素E脂质体、非脂质体维生素E混合物的猪肉制品在4℃贮藏条件下过氧化值、酸价、TBA值变化的趋势分析,研究维生素E脂质体在肉制品中的抗氧化特性。结果表明,维生素E脂质体在猪肉制品中有较好的抗氧化性能,贮藏10 d后,与对照组相比,虽然酸价差别不大,但过氧化值约降低了18%,TBA值约降低了16%。

葫芦素E脂质体的制备及含量测定

目的:制备葫芦素E(cucurbitacin E,CuE)脂质体,建立HPLC测定CuE脂质体含量的方法。方法:乙醇注入法制备CuE脂质体;使用Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水-冰醋酸(66∶34∶0.01,v/v);流速:1 ml/min;检测波长:228 nm;柱温:35℃。结果:制得CuE脂质体的平均包封率为89.7%,在实验条件下所用辅料对CuE的测定无干扰,在3.5 mg/L^84 mg/L浓度范围内线性关系良好(r=0.9999,n=9);CuE平均回收率99.9%,RSD为0.4%(n=9)。结论:乙醇注入法可用于制备CuE脂质体;高效液相色谱法简便易行、结果准确,可用于CuE脂质体含量的测定。

脂质体携载前列腺素E_1治疗不稳定性心绞痛

目的:观察脂质体携载前列腺素E_1(Lipo-PGE_1)对不稳定性心绞痛(UA)的治疗作用并探讨其可能的作用机制。方法:随机将87例入选的UA患者分为Lipo-PGE_1治疗组(A组,41例)和安慰剂对照组(B组,46例)。在常规抗心绞痛治疗基础上A组加用Lipo-PGE_1 40μg,每日一次静滴,连用7d,B组则给予等容量的脂肪乳剂(Lipo-PGE_1溶剂)。观察1周内心绞痛发作次数及硝酸甘油服用量,评价动态心电图(DCG)及运动试验(ET)致心肌缺血的客观指标,并测定治疗前后血小板最大聚集率(PAGT_(max)),血浆α颗粒膜蛋白140(GMP-140)及P-选择素水平。随访1个月。结果:治疗期7d内,平均胸痛发作次数及硝酸甘油服用量A组明服低于B组;DCG及ET显示的心肌缺血客观指标A组较B组显著改善。治疗后PAGT_(max)及血浆GMP-140和P-选择素水平A组均显著低于B组。随访30d内两组心血管事件发生率无显著性差异,但A组病人较少复发心绞痛。结论:Lipo-PGE_1 40 μg每日iv一次,结合常规的抗心绞痛措施治疗UA,能明显减少心绞痛发作,改善心肌缺血客观指标。抗炎、抗血小板特性可能是其抗心肌缺血的机制。