脂氧化酶活性体外测定方法研究

目的:研究脂氧化酶(LOX)活性体外测定方法。方法:以亚油酸为底物,3ml反应液在25℃和pH8.0条件下反应5分钟,加5ml甲醇终止反应。采用高效液相色谱法检测亚油酸,Agilent Eclipse XDB-C8(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸溶液(80∶20)为流动相,检测波长205nm。根据反应后亚油酸减少的量计算酶活性。采用文献报道的UV法和本文首创的HPLC法,对比测定了中药土连翘体外抑制LOX活性。结果:亚油酸浓度在5.296～264.8μg/ml范围内呈线性关系,r=0.9998,检测方法精密度RSD为1.74%,测定方法重复性RSD为2.43%。土连翘体外抑制LOX活性IC50为235μg药材/ml。与传统UV法比较,HPLC法专属性更好,更准确可靠。结论:我们创立的测定方法快速、简便、专属性强、准确、重复性好。