自动化磁珠法提取血清脂溶性维生素应用LC-MS/MS检测的性能评价

目的评估自动化磁珠法提取血清脂溶性维生素应用液相色谱串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测的性能。方法收集200例临床剩余血清样本,采用自动化磁珠法提取血清中脂溶性维生素A,D_(2),D_(3),E和K;同时联合LC-MS/MS检测脂溶性维生素A,D_(2),D_(3),E和K的线性、定量限、精密度、正确度、携带污染率等性能指标以及基质效应。并比较此方法与传统萃取法检测结果的一致性。结果自动化磁珠法提取脂溶性维生素A,D_(2),D_(3),E和K线性相关系数均>0.99;五种物质的定量限分别为5,0.25,0.25,125和0.025ng/ml;批内精密度和批间精密度分别为0.66%~4.83%,0.15%~3.70%;平均加标回收率为87.05%~111.11%;基质效应为95.43%~99.07%;高-低值样本循环进样结果均值与低-低值样本循环进样结果均值之差,均小于低-低值样本循环进样结果均值的3s;统计学结果显示自动化磁珠法和传统萃取法提取的脂溶性维生素结果相关性良好(r>0.99),两种方法的检测结果无显著偏倚。结论自动化磁珠法提取脂溶性维生素的检测性能良好,有望提高样品通量和分析效率。

明胶对肉桂醛液芯凝胶珠物理特性的影响及作用机制

肉桂醛易挥发、对光和热敏感、水溶性差,而明胶作为一种蛋白质,具有改善肉桂醛稳定性的作用,可以用于凝胶填充剂,从而提高肉桂醛的应用范围。将肉桂醛制备成水包油乳液,再通过离子交换反应制备成液芯凝胶珠,从表观黏度、粒径分布、Zeta电位等方面分析明胶质量浓度对肉桂醛液芯凝胶珠的影响。结果表明,添加少量明胶会降低复合凝固浴的表观黏度,增大芯液粒径,提高其稳定性。SEM图显示明胶与海藻酸钠间形成了三维螺旋结构,可以调控肉桂醛的释放。当明胶质量浓度为10 g/L时,肉桂醛液芯凝胶珠较为稳定,9 d内的释放量仅为未添加明胶组的15%。

免疫磁珠净化/高效液相色谱检测植物油中黄曲霉毒素含量

采用基于免疫磁珠净化的高效液相色谱技术测定植物油中黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))、黄曲霉毒素B_(2)(AFB_(2))、黄曲霉毒素G1(AFG1)和黄曲霉毒素G_(2)(AFG_(2))含量。样品以甲醇-水(70∶30,体积比)提取后,经黄曲霉毒素总量免疫磁珠试剂盒净化,并结合免疫磁珠自动工作站,显著提升了净化效率。4种黄曲霉毒素在一定质量浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数(r^(2))均大于0.99,AFB_(1)与AFB_(2)、AFG1与AFG_(2)的定量下限分别为0.05μg/kg和0.10μg/kg。4种毒素在5种商品植物油基质中的平均回收率为74.0%~96.0%,日间和日内相对标准偏差(RSD)均小于7.0%。所建立的方法与国标GB 5009.22-2016的免疫亲和柱法无显著性差异,方法准确、灵敏,适用于植物油中4种黄曲霉毒素的同时定量分析。

基于流式量子点微球技术的甲乙型流感病毒抗原检测方法的建立和初步应用分析

目的建立基于流式量子点微球技术的甲型流感病毒(FluA)和乙型流感病毒(FluB)抗原联检方法,为常见呼吸道病毒抗原多重检测打下基础。方法分别使用自制的不同量子点编码微球和小鼠抗FluA/FluB核蛋白(NP)单克隆抗体进行偶联,在流式细胞仪上对已知浓度的甲乙型流感病毒抗原分别和同时进行检测,对检测条件进行优化,建立甲乙型流感病毒抗原联检方法,利用此方法对临床样本进行检测,与实时荧光定量PCR法(quantitative real-time PCR,qPCR)进行比对,验证此方法的临床性能。结果建立了甲乙型流感病毒抗原联检方法,该方法的甲乙型流感病毒抗原的检出限分别为26.1 pg/ml和10.7 pg/ml,测量范围均为15.3~250000 pg/ml。对临床样本检测,与qPCR比对一致性良好,阳性符合率为57.4%,阴性符合率为100%,总符合率71.6%,并优于临床常用胶体金试剂(阳性符合率为56.49%,阴性符合率为99.75%)。结论此流式量子点微球多重检测方法可以用于甲乙型流感病毒抗原的联检,其灵敏度较高、特异度好、检测范围广,可以为呼吸道常见病毒多重检测打下良好基础,在临床上具有应用前景。

免疫磁珠净化-高效液相色谱法测定香辛料中的黄曲霉毒素

为更好地监测辣椒、花椒等香辛料中黄曲霉毒素暴露状况,建立了基于免疫磁珠净化的高效液相色谱法测定香辛料中4种黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2。样品经乙腈-水(84+16,V+V)提取后,通过黄曲霉毒素总量免疫磁珠试剂盒净化,并结合CLOVER免疫磁珠自动工作站,显著提升了净化效率。加标回收试验结果表明,在辣椒、花椒等复杂样品基质中,4种毒素的平均回收率为86%~111%,相对标准偏差小于7%。总体而言,所建立的方法准确、灵敏,适用于调味品中4种黄曲霉毒素的同步定量检测。

免疫磁珠高通量全自动净化结合高效液相色谱快速测定饲料中玉米赤霉烯酮含量

本研究旨在建立利用免疫磁珠高通量全自动净化结合高效液相色谱快速测定饲料中玉米赤霉烯酮含量的方法。饲料样品用80%乙腈水提取,经全自动免疫磁珠净化、富集后,采用高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)测定,外标法定量。结果表明:玉米赤霉烯酮在0.01~1.00μg/mL范围内线性关系良好(相关系数≥0.9999),方法检出限为2μg/kg,定量限为10μg/kg;玉米赤霉烯酮在0.01、0.02、0.10和1.00 mg/kg添加水平下的平均回收率为86.90%~100.27%,批内相对标准偏差(RSD)为3.18%~9.88%,批间RSD为4.94%~9.40%。由此可见,与传统固相萃取、免疫亲和柱净化法相比,免疫磁珠净化集提取、分离、净化、浓缩于一体,可实现完全自动化处理,提高工作效率和检测通量,避免因人为操作导致的结果偏差,适用于大批量饲料样本中玉米赤霉烯酮含量的测定。

自动化磁珠法前处理在液相色谱串联质谱检测血浆儿茶酚胺及其代谢物中的应用

目的探讨自动化磁珠法前处理在液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测血浆儿茶酚胺及其代谢物中的应用效果。方法采用自动化磁珠法提取血浆标本中的儿茶酚胺[去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)]及其代谢物[甲氧基去甲肾上腺素(NMN)、甲氧基肾上腺素(MN)、3-甲氧酪胺(3-MT)],并采用LC-MS/MS检测,分析该检测方法的线性、准确度、精密度及基质效应(ME)等性能。结果NE、E、DA、NMN、MN、3-MT检测的线性相关系数r2均>0.99,各浓度值与标准值偏差范围为0%~14.84%,均<15%。NE、E、DA、NMN、MN、3-MT的低、中、高值质控品批内变异系数(CV)为0%~13.480%,批间CV为1.260%~13.590%,符合批内、批间CV均≤15%的要求。NE、E、DA、NMN、MN、3-MT的ME均在-20%~20%范围内,说明ME影响较小。结论LC-MS/MS检测儿茶酚胺及其代谢物采用自动化磁珠法进行血浆标本前处理,各指标检测的线性、准确度、精密度及ME均符合行业标准。

磁珠固相分散萃取-超高效液相色谱串联质谱法检测饲料中的喹诺酮类、磺胺类、四环素类等35种药物含量

本实验采用磁珠固相分散萃取技术,探究了HLB磁性固相萃取剂对饲料中13种喹诺酮类、4种四环素类和18种磺胺类兽用抗菌药的吸附能力,通过优化磁珠用量、洗脱溶剂及洗脱次数等参数条件,旨在建立一种简单、快速、高效的固相分散萃取技术的样品前处理方法,用于上述35种目标化合物的超高效液相色谱-串联质谱分析。结果表明:上述35种药物在2~50μg/L浓度内呈线性关系,且其相关系数(r)均≥0.99。该方法的检出限为0.021 mg/kg,定量限为0.064mg/kg;在空白饲料样品中添加35种药物浓度为0.064、0.128、0.64mg/kg,其回收率均在63.3%~114.3%内,满足饲料中非法添加抗生素的检测需求。

应用多重PCR-液相悬浮芯片技术检测转基因水稻品系

开展转基因水稻的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)液相芯片检测方法研究。针对科丰6号(KF6)、科丰8号(KF8)、华恢1号(BT63)、克螟稻(KMD1)、M12、T1C-19、T2A-1、LL62和LL601九种转基因水稻的侧翼序列,设计合成了在生物素标记的多重PCR扩增引物与固定在荧光编码微球上的探针,建立了2个多重PCR-液相芯片检测体系,可同时检测出这9种转基因水稻成分。结果表明,9种转基因水稻的引物和探针都具有较高的特异性,各组引物/探针之间无交叉扩增和非特异杂交,且在多重PCR-液相芯片检测中9种转基因水稻品系的相对检测灵敏度达到0.1%水平,符合欧盟和其他国家有关转基因产品标识的要求。本方法的检测效率和准确性均高于传统方法,可作为进出口转基因产品和国内转基因检测的有效方法。

一种快速高效提取酵母质粒的方法

质粒提取是遗传工程操作的重要步骤。酵母细胞壁坚韧,不易破壁,使酵母质粒提取变得非常困难。为了获得一种快速、简便、高效、稳定的提取酵母质粒的方法,利用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白测定仪和PCR扩增等方法,对玻璃珠液氮法、蜗牛酶法和试剂盒法提取的酵母质粒,在产率、纯度和对后续实验的影响等方面进行了比较。结果表明,与另外两种方法比较,玻璃珠液氮法提取酵母质粒具有效率高、质量好、成本低、时间短、操作简单的优点,可作为实验室规模化提取酵母质粒的常用方法。

化探样品中金、银、铜的野外现场快速联合测定黄原酯棉富集分离金试剂液珠萃取比色法

本文研制了一个野外快速联合测定化探样品中金、银、铜的新方法。采用黄原酯棉(CCX)富集分离,以金试剂-TBP液珠萃取比色法进行测定,检出限分别为Au:0.2×10^(-9),Ag:50×10^(-9),Cu:0.1×10^(-6)。利用该法制备了野外快速分析箱,可在野外无电无排风条件下进行测定。

二苯硫脲－甲基异丁酮泡塑富集液珠萃取比色法测定化探样品中的金银

在１０％ＨＣＩ介质中，采用二苯硫脲（ＤＰＴＵ）－甲基异丁酮（ＭＩＢＫ）泡沫塑料富集，以金试剂液珠萃取比色法测定了化探样品中的Ａｕ和Ａｇ。方法的检出限：Ａｕ０．５×１０￣－９；Ａｓ５×１０￣－９（１０ｇ称样）。利用此方法制备了“野外快速分析箱”，可在野外简陋条件下进行现场测定。

深海浮力材料的研制

以环氧树脂为基体,选用低分子聚酰胺树脂为固化剂,液体聚硫橡胶为增韧剂,并填充经表面活化处理的空心玻璃微珠,制得高强度、低密度、低吸水率的深海浮力材料。结果表明,随着空心玻璃微珠用量的增加,深海浮力材料的密度、压缩强度和冲击强度均逐渐降低,而吸水率上升。当固化剂TY–203的质量分数为环氧树脂的1/2、增韧剂液体聚硫橡胶的质量分数为10%、改性空心玻璃微珠的质量分数为35%时,制得深海浮力材料的综合性能较好,密度为0.633 g/cm3、压缩强度为45.21 MPa、冲击强度为36.39 J/m、吸水率为0.67%。

离子液体复合溶剂法制备纤维素多孔微球

针对传统纤维素溶解方法的局限性,以离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氯盐(BmimCl)和有机溶剂1,3-二甲基-2-咪唑啉酮(DMI)组成的复合溶剂溶解微晶纤维素,结合反相悬浮再生法,制备纤维素多孔微球.考察复合溶剂配比对纤维素溶解度和微球制备的影响,比较分析了微球的理化性质,结果表明:所制微球体现出良好的球形度、孔度、孔径和比表面积;进一步选择合适微球,偶联离子交换配基,制备阴离子交换介质,体现出良好的蛋白吸附性能.采用复合溶剂法制备纤维素多孔微球,过程简便,性能优良,可以作为层析介质制备的新方法.

一种改进的丝状真菌DNA提取方法

以丝状真菌雅致枝霉(Thamnidium elegans)和深黄伞形霉(Umbelopsis isabellina)为材料,使用优化的CTAB法提取基因组DNA。改进后的方法使用液氮冻融以及玻璃珠振荡的方法代替了传统的液氮研磨,所需菌体量少,而得到的基因组DNA比用传统的CTAB法得到的基因组DNA产率高、纯度好、且步骤简单,适用于一次微量提取多个样品的基因组DNA。这种方法得到的基因组DNA可用于大部分分子生物学基本实验如PCR和DNA的酶切等。

自动化磁珠法标本制备联合液相色谱串联质谱检测人血清中25-羟基维生素D的性能评价

目的 评估自动化磁珠法(MSPE)提取25-羟基维生素D[25-(OH)D]及联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测25-(OH)D_(2)、25-(OH)D_(3)的性能。方法 采用MSPE提取血清中的25-(OH)D_(2)和25-(OH)D_(3),并联合LC-MS/MS检测25-(OH)D_(2)、25-(OH)D_(3)的线性、定量限、回收率、精密度及基质效应。收集120例临床剩余血清标本,同时采用MSPE、液液萃取法(LLE)和固相支撑液液萃取法(SLE)这3种方法进行提取,经LC-MS/MS测定后比较MSPE分别与LLE、SLE结果的一致性。结果 MSPE提取25-(OH)D_(2)、25-(OH)D_(3)的线性均>0.99;定量限分别为0.4 ng/mL、0.9 ng/mL;重复精密度分别在5.3%~6.5%、5.1%~6.8%;实验室内总不精密度分别在7.3%~10.6%、6.1%~8.0%;相对回收率分别在97.0%~104.0%,96.5%~106.3%;与预期浓度百分偏差均在15%以内。LLE、SLE和MSPE提取25-(OH)D_(2)和25-(OH)D_(3)结果的相关性均较好(r>0.98),相对百分偏差在15%以内。结论 该研究中MSPE前处理提取25-(OH)D_(2)、25-(OH)D_(3)性能良好,有望提高临床检测自动化及通量。

东北山葡萄酵母菌基因组DNA提取方法的比较研究

利用液氮研磨法、蜗牛酶法和玻璃珠法提取东北山葡萄分离的酵母菌株S60基因组DNA,采用琼脂糖凝胶电泳、微量核酸蛋白测定仪和PCR方法检测基因组DNA的纯度和浓度。结果显示,蜗牛酶法提取的酵母菌基因组DNA纯度最好、浓度最高;液氮研磨法提取的基因组DNA浓度虽然较高,但含有较多的蛋白等杂质;玻璃珠法提取的酵母菌基因组DNA纯度和浓度均最低。

离子液体改性漂珠对聚氨酯复合材料的燃烧及热解行为影响研究

利用离子液体[EOOEMIm][PF_6]对粉煤灰漂珠(FB)进行改性,制得了一种新型阻燃剂(FB@[EOOEMIm][PF_6]),并应用于热塑性聚氨酯弹性体(TPU)当中。采用烟密度仪(SDT)、锥形量热仪(CCT)、热重红外联用(TG-IR)等手段研究了复合材料的燃烧及热降解性能。SDT实验表明,在无焰或有焰条件下,FB@[EOOEMIm][PF_6]均能够增加TPU复合材料的光通量。CCT实验表明,FB@[EOOEMIm][PF_6]能够使得TPU复合材料的生烟速率(SPR)、总生烟量(TSR)、热释放速率(HRR)等参数较纯FB阻燃TPU显著降低,因而降低材料的生热及生烟性能。热重(TG)及热重红外联用(TG-IR)实验结果显示,FB@[EOOEMIm][PF_6]能够提高TPU复合材料的热稳定性,降低烟颗粒及有毒、有害气体的生成。所有实验结果证实,FB@[EOOEMIm][PF_6]在提高TPU的燃烧及热降解性能方面将会有较好的前景。

免疫磁珠亲和纯化-超高效液相色谱串联质谱法快速检测小麦中多种真菌毒素

目的建立免疫磁珠亲和纯化-超高效液相色谱串联质谱法用于小麦中真菌毒素多组分检测。方法用NaIO_4将抗体Fc段的糖残基氧化生成醛基,与磁珠上的氨基共价偶联,实现抗体在磁珠上的定向固定化。以该方法同时偶联多种抗体,获得定向固定多种真菌毒素抗体的免疫磁珠。进而对其亲和性能及使用条件进行详细表征和优化,建立免疫磁珠亲和纯化—超高效液相色谱串联质谱检测方法,用于小麦中真菌毒素多组分同时检测。结果本研究制备的免疫磁珠对8种真菌毒素有较好的保留效果,建立的免疫磁珠亲和纯化-超高效液相色谱串联质谱方法能够同时测定小麦中8种真菌毒素,对于各毒素的检出限在0.1~2μg/kg之间,方法回收率为78%~113%。结论该方法灵敏度高、特异性强、操作简单、有机试剂使用较少,适用于小麦样品的检测。

基于响应面法优化“二次包埋”制备蓝莓爆爆珠的工艺研究

以蓝莓果汁为芯材,海藻酸钠为壁材,利用二次包埋的方式对蓝莓果汁进行包埋制备蓝莓爆爆珠,运用Box-Behnken响应面设计,建立回归模型,优化选择爆爆珠包埋的工艺条件。结果表明:在第一次凝胶时间为17 min,乳酸钙浓度为0.121 mol/L;第二次凝胶时间为6 min,乳酸钙浓度为0.068 mol/L时,可得最大包埋率为87.43%。