食品中单核细胞增生李斯特菌的危害及其检测

单核细胞增生李斯特菌是一种能引起人畜共患的食源性致病菌之一。近年来 ,在许多国家 ,它被列为卫生部门重点检测的几种食源性致病菌之一。本文综述了单核细胞增生李斯特菌的生理生化特征、分布、污染途径、危害与流行病学概况和检测方法。

食品中李斯特氏菌的检验方法及其影响因素探讨

本文在参考国外近期有关资料的基础上，利用国内现有实验条件，建立起食品中李斯特氏菌的检验方法，并对该方法的有关影响因素及其实用性进行了探讨。结果表明，该法操作简便、快速，适用于基层开展对食品中李斯特氏菌污染的调查及食物中毒的处理。

单核细胞增生李斯特菌检测技术研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是常见的食源性致病菌之一。目前,在众多单增李斯特菌的检测方法中应用较广的是免疫学检测法、分子学检测法。免疫学检测时间短,操作简单,但该方法依赖高特异性的抗体,会出现假阳性,还需要进一步鉴定检测结果。分子学检测法克服了免疫学检测法不能在种的水平鉴定单增李斯特菌的缺点,省时省力,灵敏度高,但是分子学检测法需要丰富的操作经验,并且不适于现场大批量检测。新兴的代谢学检测法、光谱学检测法、生物传感器等也都有各自的优缺点。本文综合近年最新文献,就单增李斯特菌检测的最新方法、检测进展及未来发展趋势予以分析综述,以期为该菌的检测提供参考。

两种酶标抗体制备方法的比较及李斯特菌TASELISA试剂盒性能的优化

研制一种低成本、快速、准确的三抗体夹心酶联免疫(Three antibodies sandwich ELISA,TAS-ELISA)检测试剂盒。采用戊二醛法、改良过碘酸钠法分别制备碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,AP)、辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)标记的山羊抗兔IgG,比较单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)TAS-ELISA试剂盒两种酶标抗体的检测效果,并考察了试剂盒的检测灵敏度、特异性、稳定性、保存周期等指标。结果表明,采用改良过碘酸钠法制备的HRP-IgG效果好,克分子比最高可达2.9,酶结合率达27%;试剂盒检测周期6h,检测成本为3.5元/孔,特异性实验、干扰实验、重复性实验、稳定性实验表明采用该方法制备的酶标抗体,特异性好、结果稳定可靠。自制TAS-ELISA试剂盒检测性能可达到商业化试剂盒水平,为该产品的产业化提供了一定的理论依据。

食品中单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法研究

[目的 ] 建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。 [方法 ] 以miniVIDAS仪结合API系统 ,将该法与传统方法进行比较。 [结果 ] 该方法能检出 <10个 /mL模拟样品中的单核细胞增生李斯特氏菌 ,与食品中常见的细菌无交叉反应 ,能对非单核细胞增生李斯特氏菌作出正确鉴定。在 4天内能作完全鉴定结果。对 2 2 6份实样的检测 ,检出率为 11.5 %。 [结论 ] 以miniVIDAS仪结合API系统建立的方法具有特异性好、灵敏度高、快速简便的特点 。

PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

目的:建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。方法:采用聚合酶链反应 (PCR)特异性扩增单核细胞增生李斯特氏菌溶血素基因(hlyA),用PCR方法检测80份长春地区的食品样品。结果:在706 bp处出现hlyA基因的目的片段,食品样品中单核细胞增生李斯特氏菌阳性检出12份,阳性率为 15％,与吉林省疾病预防控制中心同步进行的国标法检测结果一致,二者符合率100％。结论:PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌更简便、快速、敏感、特异性高,适用于基层单位开展食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染的调查及监测。

食品中单增李斯特菌检测技术研究进展

单增李斯特菌是一种重要的人畜共患食源性致病菌,如何有效控制食品(尤其是即食食品)中的单增李斯特菌,是食品安全的重要任务,其中快速、准确的检测技术是关键因素之一。作者对单增李斯特菌的传统检测法、免疫学检测法和分子生物学检测法进行综述,并对目前国内单增李斯特菌检测过程中所存在的问题进行探讨,以期为今后的研究提供参考。

单核细胞增生性李斯特菌分子分型研究进展

近年来出现了各种灵敏、快速、自动化并且易于操作的分子分型方法。为了解各种分型方法应用于单核细胞增生性李斯特菌对食品链中食源性疾病监测、暴发的诊断及溯源的重要意义,对单核细胞增生性李斯特菌各种分子分型方法进行综述性介绍。

荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌多重PCR检测方法的建立

针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌的hly A基因设计3对特异性引物,在确定引物特异性的基础上,对3种标准菌株及在冷却肉上过夜富集后进行灵敏度检测。结果表明,该多重聚合酶链式反应方法对于同时检测这3种有害微生物具有高度的特异性;同时检测这3种菌时,纯菌DNA检测限可达1 pg/μL;将3种菌一起接种到冷却肉中35℃过夜培养后,荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的检测限分别可达到9、5、70 CFU/m L。

畜禽产品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测

单核细胞增生李斯特氏菌是重要的食源性致病菌,其检测周期经典方法至少要8～12 d,难以满足对外贸易的要求.作者介绍了快速检测方法的主要步骤,全部检测鉴定工作在2～5 d完成.并探讨了保证其结果可靠性的关键控制点.

即食肉制品中李氏杆菌的杀菌方法

李氏杆菌污染是即食肉制品的主要安全问题,巴氏杀菌、辐照和紫外线、食品防腐剂、高压处理和栅栏技术都是消除李氏杆菌污染的有效方法,本文对这些方法的研究进展进行了综述。

食品中单增李斯特氏菌检测PCR-免疫胶体金试纸条方法的建立

目的建立食品中单核增生李斯特氏菌快速检测PCR-免疫胶体金试纸条法。方法通过设计特异性引物建立单增李斯特氏菌检测PCR方法并使用免疫胶体金技术建立PCR产物快速检测试纸条;用试验菌株检测PCR-免疫胶体金试纸条方法的检测特异度与敏感度。使用新建方法对市售肉制品和乳制品中单核增生李斯特氏菌进行检测,验证该方法在食品检测中的可行性。结果 PCR-免疫胶体金法具有良好的特异度,敏感度比标准琼脂糖凝胶电泳法高100倍。采集乳品样品131份,阳性样品1份,检出率1.53%;肉制品224份,阳性样品4份,检测率1.79%。结论建立的单增李斯特氏菌检测PCR-免疫胶体金试纸条法特异度好,敏感度高,适用于食品中单增李斯特氏菌的检测。

单增李斯特菌便捷检测试纸的制备及检测效果

目的:研究一种快速、便捷检测食品中单增李斯特菌的方法,拟对本实验室制备的单增李斯特菌快速检测试纸(Listeria monocytogenes-fast test paper,LM-FTP)(专利受理号:201510274726.9)进行检测效果评价。方法:采集肉样、乳样、水样和蔬菜,用LM-FTP进行检测,并与市售单增李斯特菌检测试纸片(3M Petrifilm^(TM))进行比对实验。结果:LM-FTP的检测特异性为100%,检测限为2.1×10~4 CFU/m L。增菌培养到报告结果只需5.5 h。LM-FTP和3M Petrifilm^(TM)检测都可对样品完成检测,对农贸市场畜产品及蔬菜检测,二者符合率为75%,对超市同类食品检测,二者符合率为62.5%;对超市熟食检测时,二者符合率为93.75%。结论:与市售3M Petrifilm^(TM)检测方法相比,LM-FTP检测试纸制备简单,操作便捷,较3M Petrifilm^(TM)的24 h报告结果更节省时间,但在检测灵敏度方面有一定差距,尚需进一步研究改进。

迷迭香多酚提取工艺响应面优化及抑制李斯特菌活性研究

文章主要研究了响应面优化迷迭香多酚提取工艺及其抑制李斯特菌活性。通过响应面分析法确定迷迭香多酚的最佳提取条件,即液料比为15,乙醇浓度为56%,超声波功率为376W,超声波时间为38min。迷迭香多酚能在一定程度上抑制李斯特菌的活性,且随着迷迭香多酚浓度提高,抑制程度增大。

添加扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法的建立与应用

以单增李斯特菌inl A基因为靶基因,设计一对特异性引物,以16S rRNA为扩增内标对照,建立了一种含有扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法。优化了PCR反应体系,并对PCR检测方法的特异性、灵敏度、人工污染样品及食品样品检测效果进行了测试。对2株单增李斯特菌、1株英诺克李斯特菌以及19株非李斯特菌菌株进行PCR检测,结果显示,只有2株单增李斯特菌能被检出大小为826 bp的特异性片段,其余20株细菌只能检出1 500 bp的扩增内标片段。灵敏度实验结果显示,基因组DNA和纯培养物的最低检出限分别为1.80×10~2fg/μL和1.21×10~2CFU/m L。当人工污染牛乳样品中单增李斯特菌在最低接种量为0.48 CFU/m L时,经8 h增菌培养后可被该方法检出。采用该研究建立的检测方法对36种食品样品进行检测,证实了该检测方法可以指示检测过程中出现的假阴性现象。综上所述,该研究建立的PCR检测方法能特异性的检测单增李斯特菌,并可有效排除检测过程中出现的假阴性现象,提高检测的准确性。

电子鼻对两种食源性致病菌在菌株水平上区分的研究

利用基于金属氧化物传感器阵列的电子鼻技术对五株单增李斯特菌和五株副溶血性弧菌的挥发性代谢产物进行研究,结合主成分分析(PCA)和聚类分析(CA)等化学计量学方法对电子鼻原始数据进行统计学分析。结果显示,电子鼻模式识别技术能够很好地将五株单增李斯特菌的挥发性代谢产物图谱进行区分,而在同一技术条件下对五株副溶血性弧菌的挥发性代谢产物图谱只能进行部分区分,利用向这五株副溶血性弧菌的培养液中添加NaCl至饱和的方法,可以将五株菌完全区分开来,区分效果显著增强。实验表明利用电子鼻结合主成分分析和聚类分析技术对食源性致病菌在菌株水平上的区分和鉴定具有一定的可行性,有望将该技术开发成为一种快速、简便、无损的食源性致病菌新型检测分型方法。

单核细胞增生李斯特氏菌Rapid’L.mono快速筛选方法的评价

目的对单核细胞增生李斯特氏菌Rapid’L.mono快速筛选方法进行评价。方法以国家标准GB4789.30-2016作为参照方法,在检测特异性、交叉反应试验、添加实验、不同批次产品培养条件的影响和实际样品的检测方面对Rapid’L.mono快速筛选方法进行比较和评价。结果 Rapid’L.mono快速筛选培养基准确率达到97%,与30株非目标菌无交叉反应。GB 4789.30-2016方法的检出率高于快速筛选方法,2种方法的检测差异存在统计学意义(χ~2=15.864,P<0.05)。培养温度和培养时间的变化对Rapid’L.mono快速筛选方法的检出率没有影响。230份样品中,GB 4789.30-2016方法和Rapid’L.mono快速筛选方法均未检测到阳性结果样品。结论 Rapid’L.mono快速筛选培养基可以作为一种选择性培养基来使用,Rapid’L.mono快速筛选方法可以辅助国标方法应用于食品检测中。

肉及肉制品中单增李斯特菌的研究进展

单增李斯特菌是一种人畜共患致病菌,也是重要的食源性致病菌之一。单增李斯特菌对肉及肉制品污染严重,这将导致严峻的食品安全问题,严重威胁人类健康。综述了单增李斯特菌在肉及肉制品中的污染情况、肉及肉制品中单增李斯特菌的抑制因素和检测方法,并对单增李斯特菌的亚致死状态的恢复和抗生素的耐受作用进行了展望。

3种单增李斯特氏菌快速检测方法的比较

【目的】确定适用于不同条件下快速检测单增李斯特氏菌的方法。【方法】以单增李斯特氏菌标准菌株CMCC54004和市售盐水鸭、凉拌菜为研究对象,按照国家食品安全标准(GB 4789.30-2010)对检测样品进行选择性增菌培养,选择阴性样品进行人工布菌,比较单增李斯特氏菌蛋白条检测法、CPA恒温扩增法以及实时荧光PCR方法的检测效果,并以传统平板分离法进行验证。【结果】蛋白条检测法操作简单但灵敏度低,最低检测限为106cfu/mL;实时荧光PCR方法灵敏度高,最低检测限为101 cfu/mL,但操作繁琐,对操作技术及实验室条件要求较高;CPA恒温扩增方法灵敏度相对较高,最低检测限为105 cfu/mL,操作相对简单。【结论】实时荧光PCR方法适合灵敏度要求高、且具备良好实验条件时使用;CPA恒温扩增法适于对灵敏度要求不高、实验室条件简单的基层实验室使用。

RapidChek检测食品中单增李斯特菌的方法评价

目的评价RapidChek法检测食品中单增李斯特菌的检测效果并验证。方法采用t检验,比较RapidChek方法与GB 4789.30-2016方法的培养基增菌效果。依据ISO 16140:2003《食品和动物饲料微生物学-可替代方法的验证方案》,比较RapidChek检测方法与GB 4789.30-2016检测方法的检测效果,涉及的性能指标有相对准确性、相对特异性和相对灵敏度、包含性和排他性。结果 RapidChek检测方法增菌培养基效果优于GB 4789.30-2016方法增菌培养基LB_1。根据RapidChek检测方法、GB 4789.30-2016培养基+RapidChek试纸条方法、RapidChek培养基+GB 4789.30分离鉴定方法的统计检验得出,3种方法与参照方法在相对准确性、相对特异性和相对灵敏度方面无显著性差异。在包含性和排他性方面,RapidChek检测方法与GB 4789.30-2016检测方法的检测结果均一致。结论在所验证的指标上,RapidChek检测方法(包括与GB4789.30-2016组合的方法)与GB 4789.30-2016方法无差异。