犬瘟热病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

【目的】建立一种犬瘟热病毒(CDV)RT-nested PCR检测方法。【方法】根据CDV弱毒株Onderstepoort的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计套式引物,进行特异性、敏感性、重复性实验。【结果】特异性试验表明,该方法可以特异扩增出CDV NP基因片段,但从RNA病毒狂犬病病毒(RV)、DNA病毒犬细小病毒(CPV)以及正常Vero细胞中均未扩增出该条带。敏感性试验表明,RT-PCR可以扩增10-3稀释度的病毒RNA,而建立的RT-nested PCR可以扩增10-6稀释度的病毒RNA,后者的敏感性明显高于前者。重复性实验表明,不同情况下的3次重复实验,结果相同。用RT-nested PCR对石河子地区疑似感染CDV的病料进行检测,结果表明,该研究建立的RT-nested PCR不仅能有效的检测CDV感染,而且能够检测不同组织的样品。【结论】建立的RT-nested PCR检测方法,适用于动物CDV的快速诊断和流行病学调查。

KAI1在宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨KAI1在宫颈鳞癌组织中的表达，及其与宫颈癌侵袭、转移的关系。方法采用免疫组化S—P法、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法和Western blot方法，检测92例宫颈鳞癌组织中KAI1的表达。结果免疫组化结果显示：KAI1在宫颈癌组织中的表达率明显低于宫颈正常上皮组和宫颈上皮内瘤变组，差异有统计学意义（χ^2=29．51，P〈0．01；χ^2=22．38，P〈0．01），且有淋巴结转移的癌变组织其表达情况明显低于未转移的宫颈癌组织，差异显著（χ^2=11．15，P〈0．01），KAI1在宫颈癌中的阳性表达与临床分期无关，但随着病理分期的增加阳性表达率逐渐减少，且有统计学意义（χ^2=7．16，P〈0．05）。RT—PCR及Western blot同样证实：KAI1在宫颈癌组中的相对表达量明显低于宫颈正常上皮组（F=6．6，P〈0．01；F=9．73，P〈0．01）。结论宫颈癌中KAI1的异常表达与宫颈癌的恶变程度有关。