表达鸡传染性喉气管炎病毒gD蛋白的重组嵌合型新城疫病毒La Sota株的构建

为构建表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白D(gD)的重组新城疫病毒(NDV)La Sota株,本研究将ILTV强毒株gD基因胞外域与NDV F基因信号肽、跨膜域和胞质尾区融合,并插入到含有NDV基因VII型F和HN基因的嵌合型La Sota株感染性cDNA克隆pLa Sota-VIIF/HN的P和M基因之间,将获得的重组感染性克隆pLa Sota-VIIF/HN-gD与辅助质粒pCIneo-NP-P-L共转染BHK-21细胞,拯救出表达gD蛋白的重组嵌合型NDV La Sota株rLaSota-VIIF/HN-gD,并采用血凝试验鉴定正确后,将重组病毒在9日龄SPF鸡胚中连续传至10代,提取10代重组病毒基因组RNA,反转录成c DNA作为模板,以ILTV gD基因插入位点两侧的鉴定引物进行PCR鉴定;采用第10代重组病毒感染BHK-21细胞,以ILTV gD蛋白多克隆抗体作为一抗进行间接免疫荧光试验(IFA);分别对鸡红细胞吸附的重组病毒感染的鸡胚尿囊液上清和从红细胞上解离下来的纯化的重组NDV病毒粒子经western blot鉴定,并对重组病毒对鸡胚的致病性和在鸡胚中的复制动态进行初步研究。PCR结果显示ILTV gD基因能够在重组病毒中稳定存在;IFA和western blot鉴定结果显示,重组病毒能够正确表达ILTV的gD蛋白,而且gD蛋白嵌合表达在重组病毒颗粒上。鸡胚致病性试验和鸡胚中的复制动态试验结果显示,重组病毒保持了La Sota疫苗株的低致病性和良好的复制特性,rLaSota-VIIF/HN-gD的鸡胚平均死亡时间(MDT)为168 h,1日龄雏鸡脑内接种该重组病毒的致病指数(ICPI)为0.20,鸡胚半数感染量(EID_(50))峰值可达10^(-8.66)/100μL。本研究所制备的重组病毒r LaSota-VIIF/HN-gD为研制基因VII型NDV和ILTV的二联活疫苗奠定了基础。

鸡传染性囊病二价活疫苗攻击保护效果的观察

使用ＳＰＦ雏鸡进行了鸡传染性囊病二价活疫苗攻击保护效果的观察。１４日龄免疫２０００ＴＣＩＤ５０剂量的二价苗或ＢＪ８３６单价苗，免疫后１４ｄ（２８日龄）分别用不同剂量（１∶１、１∶１０、１∶１００）的标准Ⅰ型强毒株ＣＪ８０１株或标准变异株强毒１０８４Ａ株进行攻击，攻击后５ｄ剖杀观察。二价苗免疫组能抵抗极高剂量（１∶１）的ＣＪ８０１株及高剂量（１∶１０）的１０８４Ａ株的攻击，但不能抵抗极高剂量（１∶１）的１０８４Ａ株攻击。ＢＪ８３６疫苗免疫组能抵抗高剂量（１∶１０）的ＣＪ８０１珠及低剂量（１∶１００）的１０８４Ａ株的攻击，但不能抵抗极高剂量（１∶１）的ＣＪ８０１株及高剂量（１∶１０）的１０８４Ａ的攻击。

肠毒素源性定居因子CS6在减毒伤寒沙门氏菌中表达及免疫原性的研究

将编码肠毒素源性大肠杆菌定居因子抗原ＣＳ６ 基因克隆至ｐＸＬ６７０ ，转化ａｓｄ 基因突变的Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ６０９７ ，获得重组质粒ｐＳＳ６４ ，再将后者转化至减毒的△ａｒｏＡ、△ａｒｏＣ、△ａｓｄ 伤寒沙门氏菌，构建了无药物抗性且稳定的大肠杆菌和伤寒双价菌苗候选株。小鼠腹腔免疫和攻击实验表明，该菌株对伤寒沙门氏菌毒株的攻击具有良好的保护作用。家兔免疫实验证明，该菌株能产生抗ＣＳ６ 和伤寒菌Ｖｉ

表达霍乱CT-B和LPS-O抗原的鼠伤寒菌苗株的构建

将编码霍乱ＣＴＢ和ＬＰＳＯ抗原的基因与载体质粒ｐＹＡ２４８重组后，转入ΔｃｙａΔｃｒｐΔａｓｄ减毒鼠伤寒疫苗株ｘ４０７２，构建成无药物抗性、带双价抗原的工程菌株ｘ４０７２（ｐＭＧ３０６）。该菌株能分泌表达特异的霍乱ＣＴＢ抗原，并且在菌体表面同时表达霍乱和鼠伤寒的Ｏ抗原。小鼠腹腔免疫和攻击试验表明该菌苗株对霍乱毒株的攻击具有良好的保护作用。

口服痢疾双价活疫苗FS胶囊安全性观察

目的:了解口服痢疾双价活疫苗FS胶囊在接种时的不良反应,为痢疾疫苗的推广应用提供依据。方法:选择北京市朝阳、丰台两个区,抽取406人进行全程口服痢疾双价活疫苗FS胶囊,观察服药后的副作用。结果:无严重副反应发生,服药后的副反应均为一过性的腹痛、腹泻、呕吐或过敏,总副反应发生率3.94%,主要以腹痛、腹泻为主。结论:口服痢疾双价活疫苗副反应发生率低,安全性高。

鸡传染性囊病二价活疫苗攻击保护滴度的测定

使用ＳＰＦ雏鸡进行鸡传染性囊病二价活疫苗的攻击保护滴度的测定。ＳＰＦ雏鸡１４日龄免疫，于免疫后７ｄ、８ｄ、９ｄ、１０ｄ、１２ｄ、１４ｄ采血进行ＩＢＤ中和抗体的测定，同时分别进行标准Ｉ型强毒ＣＪ８０１株和标准变异株强毒１０８４Ａ株的攻击，建立抗体滴度与攻击保护率之间的直线回归方程。二价苗免疫后１４ｄＩＢＤ中和抗体滴度达到２９６８（ＧＭＴ），其对ＣＪ８０１株和１０８４株的攻击保护率分别为８９２１％和８２５９％，从而表明在免疫抗体达到２９６８时，免疫鸡表现对ＩＢＤ强毒良好的攻击保护效果，并将此抗体滴度暂定为鸡传染性囊病二价活疫苗的中和保护滴度。

新支二联活疫苗免疫与鸡滑液囊支原体感染相关性研究

为了解新支二联活疫苗和鸡滑液囊支原体之间有无相互影响,选用100只1日龄SPF鸡随机分为5组,每组20只,进行比对试验。其中G1和G2组免疫新支二联苗活疫苗,G2组在疫苗免疫7 d后MS攻毒,G3、G4和G5组分别为IBV攻毒组,MS攻毒组及阴性对照组。免疫21 d后进行ND血清抗体检测,26 d后剖检进行气囊评分,气管MS和IBV再分离及病理观察。结果显示,G1和G2组ND抗体阳性率分别为94.11%和94.73%;G2和G4组出现气囊病变数量均为16只,气管MS再分离阳性数分别为18只和20只;气管IBV再分离结果显示,G1和G2组新支二联苗的保护率分别为88.24%和89.47%;气管病理学观察显示G3组出现了典型的传染性支气管炎病理变化,而G1组和G2组未出现明显IB病理变化,但G2组与G4组均有轻微的MS病理变化。新支二联苗免疫后7 d感染MS不影响疫苗的免疫效力,新支二联苗免疫不会加剧MS感染的致病性。本研究通过SPF鸡动物试验,探讨商品化新支二联活疫苗与MS的相互作用。

鸡传染性支气管炎双价活疫苗效力检验方法的比较

以血清交叉中和方法进行鸡传染性支气管炎双价活疫苗效力检验 ,结果与攻毒方法效检结果一致。表明可以采用血清交叉中和方法进行双价活疫苗效力检验。

HCV/HBV复合抗原基因的克隆、表达及免疫应答研究

为探讨ＨＣＶ／ＨＢＶ 复合疫苗的可行性，将合成的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）复合多表位抗原基因ＰＣＸ与ＨＢｓＡｇ 基因连接成ＰＣＸＳ基因，与β－半乳糖苷酶（ＧＺ）基因融合后在大肠杆菌及减毒鼠伤寒沙门氏菌中获得表达．目的蛋白ＧＺ－ＰＣＸＳ可被抗－ＨＢｓ 及抗－ＨＣＶ 抗体所特异识别．ＧＺ－ＰＣＸＳ抗原皮下注射免疫ＩＣＲ小鼠后，诱发了较高水平的抗－ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１（ｐＷＲ／ＰＣＸＳ）口服免疫小鼠后，诱发了高水平的ＣＤ８＋ Ｔ细胞增殖反应及抗ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．所有免疫小鼠均未见明显的毒副作用．该研究揭示，ＨＣＶ／ＨＢＶ 复合抗原可诱发特异性体液免疫及细胞免疫应答，而活菌苗口服可能是理想的免疫途径，为ＨＣＶ／ＨＢＶ 双价疫苗研究提供了一定的理论及实验依据．

猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗与猪瘟活疫苗混合免疫效果评价

为评价猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗(以下简称圆支二联苗)与猪瘟活疫苗混合免疫效果,本研究利用圆支二联苗作为稀释剂稀释猪瘟(CSFV)活疫苗,稀释后的混合疫苗在室温放置0、1 h、2 h取样测定CSFV含量,结果显示放置2 h CSFV含量未下降,表明圆支二联苗作为稀释剂不影响CSFV含量。用圆支二联苗对仔猪首次免疫,首免后14 d用稀释后的混合疫苗二免,分别在二免后21 d和28 d利用猪圆环病毒2型(PCV2)和猪肺炎支原体(Mhp)攻毒,结果显示圆支二联苗和CSFV活疫苗混合使用的免疫效果与单独使用圆支二联苗的免疫效果相当,针对PCV2的攻毒保护率均为80%,针对Mhp攻毒,混合疫苗免疫的仔猪肺炎病变减少率分别为73.1%和75.0%。此外,分别在混合疫苗和CSFV活疫苗免疫仔猪后不同时间采血,检测血清中CSFV抗体水平,结果显示混合疫苗免疫一次与CSFV活疫苗免疫一次后CSFV抗体水平相当。以上结果表明圆支二联苗可以作为稀释剂稀释CSFV活疫苗,一次性注射免疫,各疫苗免疫效力均不受影响。本研究为临床免疫程序优化及相关疫病的防制提供了实验依据。

福建省二价脊髓灰质炎疫苗损耗系数影响因素分析

目的分析影响二价脊髓灰质炎疫苗(bOPV)损耗系数的相关因素,为降低bOPV损耗、提高使用效率提供参考依据。方法通过福建省免疫规划信息管理系统查询,福建省共1 046家接种门诊,随机抽取68家接种门诊进行问卷调查;查询九个设区市bOPV使用数和接种数。结果福建省共使用bOPV1 602 980人份,共接种1 125 217人次,平均损耗系数1.43,68家接种门诊平均损耗系数1.42,与福建省平均相比差异无统计学意义(χ~2=1.80,P>0.05)。单因素非条件logistic回归分析显示,乡镇接种门诊较城区接种门诊bOPV损耗系数较大(OR=15.17,P<0.05);接种频次≥3次/周者较接种频率<3次/周的损耗系数小(OR=0.07,P<0.05);接种人员>2人者较接种人员≤2人的损耗系数小(OR=0.01,P<0.05);服务半径≤10km者较服务半径>10km的损耗系数小(OR=0.18,P<0.05)。多因素非条件logistic回归分析显示,接种人员>2人是损耗系数的保护因素(OR=0.01,P<0.05)。分层分析显示,无论服务半径或接种频次,乡镇接种门诊bOPV损耗都高于城区接种门诊。结论要提高bOPV使用率、降低损耗系数,需因地制宜针对城区和乡镇制定对策,合理设置接种门诊,科学安排接种服务周期。

脊髓灰质炎灭活疫苗与二价脊髓灰质炎减毒活疫苗两种序贯基础免疫程序的免疫原性比较

目的比较脊髓灰质炎(脊灰)灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)与I+III型二价脊灰减毒活疫苗(Bivalent oral poliovirus vaccine,bOPV)两种序贯基础免疫程序的免疫原性。方法在河北省肥乡区招募健康婴儿,随机分成两组,按2-3-4月龄基础免疫程序分别接种IPV-bOPV-bOPV和IPV-IPV-bOPV,检测基础免疫前和免疫后28-42d血清脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体,分析中和抗体阳性率、阳转率和几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)。结果IPV-bOPV-bOPV、IPV-IPV-bOPV程序组分别招募受试者69名、68名,两组婴儿基础免疫后脊灰病毒中和抗体阳性率分别为Ⅰ型100%、100%,Ⅱ型98.55%、100%,Ⅲ型100%、100%;阳转率分别为Ⅰ型100%、100%,Ⅱ型97.06%、100%(Fisher确切概率法,P>0.05),Ⅲ型100%、100%;GMT增长倍数分别为Ⅰ型758倍、810倍(Z=-0.62,P=0.535),Ⅱ型5倍、26倍(Z=-5.15,P<0.001),Ⅲ型379倍、634倍(Z=-3.34,P=0.001)。结论两种IPV与bOPV序贯基础免疫程序均具有良好的免疫原性;IPV-IPV-bOPV程序对Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒的免疫原性优于IPV-bOPV-bOPV程序。

二价脊髓灰质炎减毒活疫苗的损耗系数测算

目的估算二价脊髓灰质炎(脊灰)减毒活疫苗(bOPV)损耗系数。方法收集全国各省(自治区、直辖市)自2016年5月1日开始实施脊灰疫苗转换至2016年11月30日bOPV的下发、使用和接种情况。采用方便抽样,从各省分别选择5个预防接种单位,调查bOPV损耗系数和影响因素。结果全国bOPV的测算损耗系数为1.79,各省在1.34(重庆市)-4.57(青海省)之间。共调查接种单位182个,测算平均损耗系数为1.53。日、周/旬、月接种单位的损耗系数分别为1.70、2.16、2.87(F=11.52,P<0.05)。日平均接种量和损耗系数呈负相关(r=-3.01,P<0.05)。结论 bOPV损耗系数较大,且受多种因素影响,应根据各地实际情况使用损耗系数进行疫苗用量预测。

接种医生与家长对二价脊灰疫苗的知信行影响因素比较分析

目的了解河北省公众对二价脊髓灰质炎减毒活疫苗(Bivalent oral poliomyelitis live vaccine,b OPV)的知晓情况和接种意愿,为预防接种宣传沟通策略的制定提供依据。方法根据人口数量、地理条件、AEFI报告发生率等综合因素选取石家庄市等6市,随机抽取其接种单位医生和儿童家长进行自填式问卷调查。对调查结果进行描述性分析。结果在线收集1 142份调查问卷,有效问卷1 090份,其中儿童家长720份(占66.06%)。1 041人(占95.50%)知晓脊髓灰质炎,1 081人(占99.17%)了解脊灰疫苗可预防脊灰/小儿麻痹,接种医生对脊灰疫苗相关知识的知晓率、对国产疫苗安全性的信任度高于儿童父母,接种门诊/疾控中心/医院是公众获取脊灰疫苗相关知识的主要途径,也是公众最相信的途径;249人(占22.84%)会犹豫给孩子接种b OPV,主要原因(162人,占65.06%)是担心其安全性。84.31%知晓接种疫苗可能会发生异常反应,69.45%认为国产疫苗非常安全或安全。结论年龄、文化程度和职业在不同程度上均影响家长对脊灰疫苗的知信行,部分接种医生和家长存在接种犹豫现象,要求继续提高公众对脊灰疫苗的认识,消除对其安全性及有效性的疑虑。

鸡滑液囊支原体活疫苗(MS-H株)同时免疫对新支二联活疫苗免疫效力影响的调查

为了解新支二联活疫苗和鸡滑液囊支原体活疫苗之间有无相互影响,选用70只1日龄SPF鸡随机分为4组进行比对试验,其中:G1组20只,联合免疫新支二联苗活疫苗和鸡滑液囊支原体活疫苗(MS-H株);G2组20只,为新支二联活疫苗单独免疫组;G3组20只,为传染性支气管炎病毒(IBV)攻毒组;G4组10只,为空白对照组。免疫后21 d时采血,血凝抑制(HI)试验进行新城疫(ND)血清抗体检测,同时G1、G2和G3组IBV强毒点眼攻毒,并于攻毒后第5天剖检,进行气囊评分。所有试验鸡剖检时,采集气管进行IBV再分离及病理观察。结果:G1和G2组的NDV抗体阳性率分别为94.74%和100%,其平均效价分别为4.26和4.35,剩余2组阳性率均为0;气管IBV再分离结果显示G1和G2组新支二联苗的保护率分别为88.24%和89.47%;气管病理学观察显示G3组出现了典型的传染性支气管炎(IB)病理变化,而G1组和G2组未出现明显IB病理变化。研究表明,同时免疫MS-H活疫苗并未对新支二联活疫苗的免疫效力产生影响。

浙江省二价脊灰疫苗预防接种安全性监测分析

目的分析浙江省接种二价的Ⅰ型、Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗(bOPV)报告疑似预防接种异常反应(AEFI)发生情况,评价bOPV预防接种的安全性。方法通过全国AEFI监测信息管理系统,收集2016年5月-2018年10月浙江省bOPV的AEFI监测数据进行描述性分析。结果浙江省2016年5月-2018年10月共报告bOPV引起的AEFI病例378例,报告发生率为7.96/10万剂,其中一般反应278例(73.54%)、报告发生率为5.86/10万剂,异常反应81例(21.43%)、报告发生率为1.71/10万剂,偶合症17例(4.50%)、待定2例(0.53%);1岁以内和4岁组分别报告260例(68.78%)和104例(27.51%),与接种程序相应年龄的接种剂次相关;接种1天及以内发生的AEFI占92.33%;报告严重异常反应血小板减少性紫癜2例、血管性水肿1例,偶合死亡2例(分别偶合窒息和急性肠坏死致中毒性休克)。结论提示浙江省bOPV预防接种安全性总体良好,但仍需关注罕见的严重异常反应病例的发生。

脊髓灰质炎病毒受体转基因小鼠接种Ⅰ+Ⅲ型二价脊髓灰质炎减毒活疫苗后的排毒规律

目的通过脊髓灰质炎(简称脊灰)病毒受体转基因小鼠动物模型,探讨接种Ⅰ+Ⅲ型二价脊髓灰质炎减毒活疫苗(bivalent oral poliovirus vaccine,bOPV)后的排毒规律。方法以灌胃方式给脊灰受体转基因小鼠接种3剂bOPV,间隔28 d。每剂bOPV接种后第1、3、5、7天采集当天小鼠粪便样本,实时定量PCR检测每剂bOPV接种后的排毒量,ELISA法检测脊灰特异的肠道黏膜免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)抗体水平,分析排毒与接种剂次、黏膜IgA水平的关系。将接种了bOPV后检测到排毒量高和排毒量低的两组小鼠分别与洁净小鼠共居,观察洁净小鼠接触后的排毒反应。结果随着接种bOPV剂次的增加,疫苗所引发的排毒量逐渐减少。第1剂bOPV接种后排毒量较高的个体在接种下一剂bOPV后的排毒量显著低于首剂排毒量低的个体(P<0.05)。第1剂bOPV接种后IgA呈阳性的个体在第1剂接种后的排毒量高于IgA呈阴性组,但第2剂接种后排毒量低于IgA呈阴性组。与高排毒组小鼠共居后,洁净小鼠发生排毒的机率显著高于与低排毒的小鼠共居的洁净小鼠(P<0.05),且Ⅲ型脊灰疫苗株比Ⅰ型引起洁净小鼠的排毒反应持续性更长。结论在脊灰消灭的最后阶段,预防脊灰流行的一个关键仍在于激发人群对抗脊灰病毒复制的黏膜免疫,减少排毒。增加bOPV接种剂次可减少后续个体接触脊灰病毒后的排毒概率。在b OPV接种后,需加强排毒检测和个人卫生管理,特别是首剂bOPV接种后。

河北省二价脊髓灰质炎减毒活疫苗预防接种安全性监测分析

目的评价河北省二价脊髓灰质炎减毒活疫苗（bOPV）预防接种的安全性。方法通过全国疑似预防接种异常反应（AEFI）监测信息管理系统收集河北省2017年bOPV的AEFI报告数据,进行描述性分析。结果河北省2017年共报告bOPV的AEFI 590例,报告发生率为22.02/10万剂,其中一般反应、异常反应分别占95.25%（562例,20.98/10万剂）、3.39%（20例,0.75/10万剂）;≤1岁占70.34%;发生在接种疫苗后≤1d内占87.63%。结论河北省bOPV预防接种安全性良好。

北京市丰台区二价脊髓灰质炎减毒活疫苗损耗系数分析

目的通过分析北京市丰台区二价脊髓灰质炎减毒活疫苗(bOPV)损耗系数,了解其损耗程度,为科学制定疫苗使用计划,规范疫苗管理提供依据。方法根据统一设计的《丰台区二价脊灰疫苗接种情况日报表》,收集丰台区所有接种单位2016年5月9-27日bOPV接种情况和使用情况。结果丰台区共67家儿童预防接种门诊开展b OPV接种。5月9-27日,b OPV损耗系数为2.10。村属社区站/部队属门诊(2.27)、行业门诊(2.22)和卫生和计划生育委员会直属门诊(1.98)损耗系数之间的差异有统计学意义。达标门诊(2.24)与规范化门诊(2.04)损耗系数之间差异有统计学意义。日均接种量<10人次损耗系数(2.39)高于10~20人次(2.12)和>20人次损耗系数(1.75),差异有统计学意义。损耗系数在每人一个滴管与无污染的情况下不更换滴管之间差异有统计学意义。损耗系数在冷藏保存30 min废弃和当日持续使用之间差异有统计学意义。结论丰台区bOPV损耗率高。为降低损耗,各接种单位应规范使用滴管和剩余疫苗,安排集中接种,减少疫苗开启数量。

一例首剂接种二价脊灰减毒活疫苗后引发的高危急性弛缓性麻痹病例的调查

目的对广州市2017年3月发生的1例高危急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例进行调查,探讨引起该案例的原因,为防控及调查处置类似事件提供经验与借鉴。方法对病例及密切接触者进行流行病学调查,采集血液标本检测脊灰中和抗体,采集粪便标本进行病毒分离与测序;对增城市区级以上医院进行AFP病例主动搜索;对病例所在镇7岁以下儿童开展脊灰疫苗接种率调查及查漏补种。结果患儿在出生5个月时首剂接种二价脊灰减毒活疫苗后发生急性弛缓性麻痹,对患儿连续6次采集粪便标本,前2次均检测出Ⅰ型脊灰疫苗病毒,变异数分别为2,3个碱基;一名密切接触者便标本检出Ⅲ型脊灰疫苗类似株;在患儿、一名密切接触者及患儿母亲血液标本中分别检测到脊灰抗体阳性。未发现医院漏报15岁以下儿童AFP病例。结论该病例属于"高危AFP病例"。省AFP病例分类专家诊断小组将其分类为"脊灰排除病例",但不能排除疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎病例(Vaccine-Associated Paralytic Poliomyelitis,VAPP)。提示在实施脊灰疫苗IPV/OPV国际序贯免疫程序转换策略之后,接种单位应优先保障适龄儿童首剂及时接种IPV疫苗,以减少VAPP发生的风险。