前列腺癌组织中凋亡抑制基因Livin的表达研究

目的：探讨前列腺癌组织中凋亡抑制基因Livin的表达及其与临床病理特征的关系。方法：应用RT-PCR和免疫组化（SP）法，检测Livin在62例PCa组织中的表达情况，其中高分化癌14例，中分化癌30例，低分化癌18例，正常前列腺组织10例。结果：62例PCa组织中Livin基因高表达，正常的前列腺组织中Livin均无明显表达。62例PCa组织中Livin蛋白阳性表达共有37例（59．7％），低分化组Livin蛋白阳性表达率（83．3％）明显高于高分化组（28．6％），其差异有统计学意义（P〈0．05），中、高分化组间及低、中分化组间Livin蛋白阳性表达率无统计学差异（P〉0．05）。Livin蛋白阳性表达与PCa的临床分期比较，T1-T2 65．0％，T3-T4 77．3％，亦有统计学意义（P〈0．05），临床分期愈晚，Livin蛋白阳性表达率愈高。结论：Livin与PCa的发生、发展有关，检测PCa组织中Livin表达可能对判断PCa预后有一定意义。

Livin基因修饰的骨髓间充质干细胞移植治疗对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

目的:探讨livin修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植改善急性心肌梗死大鼠心功能的作用及livin和促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7、caspase-9在感染后的表达情况。方法:通过全骨髓培养法分离培养骨髓间充质干细胞,感染携带livin基因的重组腺病毒后用流式检测其对MSCs凋亡的影响。通过Western blot法分别检测livin、caspase-3、caspase-7和caspase-9的蛋白表达情况。采用冠状动脉左前降支结扎法建立心肌梗死模型,然后实验分4组进行:无胎牛血清的DMEM组;单纯干细胞治疗组(MSCs组);空载腺病毒转染干细胞组(r Ad-control/MSCs)组;livin基因转染干细胞组(r Ad-livin/MSCs组)。1个月后采用生理仪记录各组大鼠左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))和左室内压最大下降速率(-dp/dt_(max))来评价大鼠心功能。结果:r Ad-livin/MSCs组凋亡率较MSCs组和r Ad-control/MSCs组显著降低(P<0.05);r Ad-livin/MSCs组抗凋亡蛋白livin明显上升(P<0.05),促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7及caspase-9表达显著下降(P<0.05);细胞移植后1个月,r Ad-livin/MSCs组心功能比MSCs组改善更明显(P<0.05)。结论:r Ad-livin感染MSCs后可促进抗凋亡蛋白livin的表达,同时降低促凋亡蛋白caspase-3、caspase-7和caspase-9的表达及细胞凋亡率。r Ad-livin/MSCs移植能进一步改善心肌梗死大鼠心功能。

慢病毒介导shRNA特异性沉默livin基因促进SPC-A1细胞凋亡

目的:建立慢病毒介导的livin基因沉默系统,探讨其对肺癌细胞凋亡的影响。方法:Livin shRNA慢病毒感染肺腺癌细胞株SPC-A1沉默livin基因表达。应用PI染色经荧光镜下观察SPC-A1细胞凋亡形态,流式细胞术检测SPC-A1细胞凋亡率及亚二倍体峰形成,Real-timePCR及Western blotting方法检测livin和caspase3表达的改变。结果:livin基因在肺腺癌细胞株SPC-A1中持续高表达。经慢病毒介导shRNA使livin基因表达沉默后,镜下可见肺腺癌细胞出现典型凋亡形态特征,流式细胞术检测出现亚二倍体峰,细胞凋亡率较空白对照及阴性病毒对照细胞明显增加(8.21%vs0.08%,0.13%;P<0.05),RT-PCR及Western blotting检测结果显示,caspase3mRNA表达无改变,但cleaved-caspase3蛋白表达上调。结论:慢病毒载体介导的shRNA能抑制肺腺癌细胞株SPC-A1中livin基因的表达,从而促进SPC-A1细胞凋亡。

恶性肿瘤细胞及组织中凋亡抑制蛋白livin的表达及其临床意义

目的:探讨凋亡抑制蛋白livin的两种异构体livinα、和livinβ在多种肿瘤细胞系及肿瘤组织中的表达及其与各类肿瘤临床病理的关系。方法:采用RT-PCR法检测HeLa、SBC-2等12种肿瘤细胞和50例不同肿瘤组织及20例癌旁组织中livinα和livinβ的mRNA的表达水平。结果:12个细胞系中8个细胞系的livin mRNA表达为阳性,分别为HeLa、SPCA-1、SBC-2、PC14、MKN45、LOVO、HHCC、A549,其中A549为弱表达,且livinα的表达强于livinβ;HL-7702、Hep-2、7721、K562四种细胞中livin表达为阴性;50例肿瘤组织中livin mRNA表达阳性率为64.0%,而在癌旁组织中为2%。Livin mRNA的表达与肿瘤患者的肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期均无明显相关性。结论:Livin在肿瘤细胞系及肿瘤组织中表达的研究,为进一步研究livin与肿瘤的发生、发展的关系,及其以livin为靶位的肿瘤基因治疗研究提供了有力依据。

Livin在乳腺癌中的表达及其与Caspase-3,Ki67表达的关系

目的:探讨Livin在乳腺癌中的表达和临床意义及其与Caspase-3蛋白表达和细胞增殖的相互关系。方法:采用免疫组化S-P法检测Livin在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌组织中Livin蛋白和Caspase-3蛋白表达以及Ki67在乳腺癌组织中的表达。结果:Livin蛋白在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌组织中阳性率为7.1%,29.8%,65.0%,73.1%;Caspase-3蛋白分别为92.9%,71.4%,45.0%,34.6%,两者差异均有统计学意义(P<0.01)。Livin表达与临床分期、淋巴结转移和年龄有关(P<0.05),与肿瘤大小和组织学分级无关。Livin蛋白与Caspase-3蛋白在乳腺浸润性癌表达呈负相关(P<0.01)。在乳腺非浸润性癌中两者相当,无相关性(P>0.05)。Livin蛋白表达阳性的乳腺癌Ki67的标记细胞增殖指数(47.32±22.34)明显高于Livin蛋白表达阴性的乳腺癌细胞Ki67的标记细胞增殖指数(18.01±23.34)(P<0.01)。结论:Livin蛋白在乳腺癌中表达上调,可作为判断乳腺癌预后新的分子标记物,成为乳腺癌诱导凋亡治疗的新靶点。Livin不仅参与细胞凋亡的调控,还促进了细胞增殖及肿瘤发生、发展。

乳腺癌中Livin基因及蛋白表达与细胞凋亡、增殖的关系

目的探讨Livin在乳腺癌表达及其与caspase-3蛋白表达和细胞增殖的相互关系。方法采用SP法免疫组化和原位杂交技术检测Livin在正常乳腺组织(14例)、乳腺增生性病变(14例)、乳腺非浸润性癌(20例)和乳腺浸润性癌组织(52例)中Livin mRNA和其蛋白的表达以及caspase-3、Ki-67在乳腺癌组织中的表达。结果Livin蛋白和mRNA在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌组织中阳性率分别为(7.1%、7.1%)、(28.6%、28.6%)、(65.0%、70.0%)、(73.1%、75.0%),差异有统计学意义(P<0.01)。Livin蛋白与mRNA表达之间差异无统计学意义(P>0.05)。Livin表达与临床分期、淋巴结转移和年龄有关(P<0.05),与肿瘤大小和组织学分级无关。Livin蛋白与caspase-3的在乳腺癌表达呈负相关(P<0.01)。Livin蛋白表达阳性的乳腺癌Ki-67增殖指数(47.32%±22.34%)明显高于Livin蛋白表达阴性的乳腺癌Ki-67增殖指数(18.01%±23.34%)(P<0.01)。结论Livin基因及蛋白在乳腺癌中表达上调,提示在乳腺癌发生、发展中起重要作用,可作为乳腺癌新的分子标记物,可能成为乳腺癌诱导凋亡治疗的新靶点。Livin蛋白通过与执行型caspase-3结合,抑制其活性,从而阻止细胞凋亡。Livin不仅参与细胞凋亡的调控,还促进了细胞增殖及肿瘤的发生、发展。

Livin基因及其蛋白在人口腔鳞癌中的表达

目的:探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族的新成员Livinα和Livinβ及其基因在人口腔鳞癌组织中的表达及意义。方法:采用反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测20例口腔鳞癌组织、15例口腔软组织囊肿和10例癌旁正常口腔黏膜组织中LivinαmRNA和LivinβmRNA的表达,并用Western印迹检测2种Livin蛋白在3种组织中的表达情况,应用SPSS10.0软件包对结果进行统计学分析。结果:19例口腔鳞癌组织中均有Livinα和LivinβmRNA的表达,14例口腔软组织囊肿和10例癌旁正常口腔黏膜组织中均可见Livinα或LivinβmRNA的表达,3者表达率无统计学差异,但Livinα和LivinβmRNA在口腔鳞癌组织中的表达显著高于口腔软组织囊肿和癌旁正常口腔黏膜组织(P<0.01),Western印迹检测结果和RT-PCR结果一致。结论:Livin可能在人口腔鳞癌的发生、发展中起着重要作用。

siRNA沉默人乳腺癌细胞株Livin基因的实验研究

目的探讨Livin-siRNA对人乳腺癌细胞株MCF-7和ZR-75-30中Livin基因及蛋白表达的下调作用,以及对其增殖能力的影响。方法构建3个靶向Livin的siRNA真核表达载体,分别转染乳腺癌细胞后,通过实时定量PCR、Western blot技术检测人乳腺癌细胞MCF-7,ZR-75-30的Livin在mRNA、蛋白水平的表达。采用MTT法检测si-Livin2对乳腺癌细胞增殖的抑制作用。结果成功构建了针对Livin基因的3个特异性siRNA表达载体。它们不同程度地抑制了乳腺癌细胞Livin基因的表达,以si-Livin2抑制效率最高。si-Livin2作用于人乳腺癌细胞株MCF-7和ZR-75-30后能明显抑制其Livin基因的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05),并且能有效抑制细胞的增殖。结论Livin-siRNA能特异性抑制乳腺癌细胞的Livin mRNA及其蛋白的表达,抑制细胞增殖,为进一步研究沉默Livin基因对人乳腺癌细胞生物学功能的影响奠定了基础。

siRNA沉默Livin基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响

目的:观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默Livin基因在胃癌BGC-823细胞中的表达,并探讨Livin基因对胃癌细胞生长、凋亡的影响.方法:自行设计两条针对Livin基因的siRNA:Livin-sh-1和Livin-sh-2,以此构建相应的表达载体并分别转染至对数生长期胃癌BGC-823细胞,经G418筛选后分别采用半定量RT-PCR检测不同siRNA实验分组细胞BGC-823mRNA水平变化,四氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖、流式细胞仪检测胃癌细胞的凋亡.结果:siRNA对照组与空siRNA载体组Livinα/βmRNA表达差别无显著性;但转染siRNA组Livinα/βmRNA表达显著低于空白对照组和空siRNA载体组(Livinα:0.11±0.07vs0.37±0.10,0.34±0.08;Livinβ:0.13±0.04vs0.43±0.09,0.45±0.11,均P<0.05).空白对照组与空siRNA载体组相比,24、48、96h和1wk时细胞生长未受影响;而siRNA组在转染后24h和48h细胞生长未受影响,但在96h和1wk时则被明显抑制(P<0.01).转染siRNA组的细胞的凋亡率与空白对照组和转染空siRNA载体组相比显著增加(14.85%±1.35%vs4.51%±0.36%,6.13%±0.71%,均P<0.05).结论:siRNA沉默Livin基因能抑制胃癌细胞的生长,促进胃癌细胞的凋亡,Livin基因有可能成为胃癌治疗的新靶点.

抗凋亡基因livin在急性非淋巴细胞白血病细胞中的表达及临床意义

为了探讨急性非淋巴细胞白血病(ANLL)原代细胞livin基因表达及临床意义,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测46例急性非淋巴细胞白血病患者livin基因mRNA表达水平,以10名健康人为正常对照,以HL-60细胞株为阳性对照。结果表明,livin mRNA在初治ANLL患者中的表达较正常对照组明显升高(p<0.05);治疗缓解后表达明显下降(p<0.05);复发后其表达又升高。在初治ANLL患者中,livin mRNA表达阳性的患者完全缓解率(CR)低于表达阴性的患者(p<0.05)。结论:livin基因过度表达和ANLL的发病呈正相关;livin基因高表达的患者完全缓解率低,预后不良;livin可作为急性非淋巴细胞白血病的发病、复发及预后判断的指标之一。

凋亡抑制基因livin在食管癌中的表达

目的:探讨凋亡抑制蛋白livin在食管癌组织中的表达及其与食管癌临床病理的相关性。方法:采用RT-PCR结合银染技术检测食管癌组织中livin-α mRNA和livin-β mRNA的表达。结果:36例食管癌组织中livin表达阳性率为50%,其表达与癌组织浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.05),而与癌组织分化程度无关(P>0.05)。18例癌旁正常食管组织中livin低表达,阳性率为5.6%,与食管癌组织比较差异十分显著(P<0.01)。结论:livin在食管癌组织中异常表达,有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点。

livin在肺癌组织中的表达及与caspase-3的相关性初步探讨

背景与目的livin是新的凋亡抑制蛋白家族成员之一,本研究目的在于探索livin两种异构体在肺癌组织中的表达及其与肺癌病理类型、化疗的关系和livin表达与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的相关性。方法采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测肺癌组织及对照组中livinα、livinβ及caspase-3的表达。结果27例肺癌组织中livinα表达阳性率为44.44%,livinβ为70.30%,显著高于对照组(P值均<0.01),其中在腺癌组织中分别为50.00%和64.28%,在鳞癌(含大细胞癌)组织中分别为33.33%和75.00%,1例小细胞癌两异构体均阳性。应用凝胶成像仪测量各指标灰度值后显示,肺癌组织两异构体表达水平明显高于对照组(P值均<0.05);livinα在腺癌中表达明显高于鳞癌(P<0.05),而livinβ在腺癌、鳞癌中表达无明显差异(P>0.05);caspase-3在肺癌组织中的表达明显低于对照组(P<0.01),livin各异构体表达水平、两异构体水平总和皆与caspase-3表达水平呈负相关(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。livin两异构体在术前化疗的肺癌组织中表达似乎较未化疗者高,但差异无统计学意义(P>0.05),而且其表达与肺癌是否发生淋巴结转移亦无明显相关性(P>0.05)。结论livin两异构体在不同病理类型肺癌组织中表达不一致,可能与不同病理类型肺癌发生有关;livin表达与caspase-3表达呈负相关,可能与livin具抗凋亡作用有关;livin高表达似乎与化疗诱导有关,而与肺癌是否转移无明显相关。

Livin基因在儿童急性白血病中的表达及其意义

目的观察Livin基因在急性白血病患儿白血病细胞中的表达及其意义。方法采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测31例ALL及22例AML患儿白血病细胞Livin mRNA的表达水平,并以12例非白血病患儿为对照组。结果急性白血病(AL)患儿白血病细胞Livin mRNA阳性表达率为60.3%。ALL组和AML组Livin mRNA阳性表达率分别为61.3%和59.1%,两者比较差异无统计学意义,但均高于非白血病对照组(8.3%),并且Livin mRNA阳性患儿的缓解率明显低于阴性患儿的缓解率。结论 Livin基因的过度表达与AL的发病具有相关性,可作为AL的诊断、复发及预后判断的指标之一。

SiRNA沉默livin基因表达促进胃癌细胞凋亡

目的:研究livin特异性小分子干扰RNA (siRNA)沉默胃癌SGC-7901细livin基因及对促胃癌细胞凋亡的影响。方法:设计针对人源livin基因的两条SiRNA:si-livin1和si-livin2,分别转染至对数生长期的胃癌SGC-7901细胞:逆转录酶链式反应(RT- PCR)检测转染前后胃癌SGC-7901细胞livin基因表达的变化,MTT法检测转染前后该细胞对5-FU、顺铂的半数抑制浓度(IC50)的变化以及检测转染前后细胞增殖能力的变化,PI染色后流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡的变化。结果:livin特异性siRNA转染胃癌SGC-7901细胞48h后,si-livin1组livinαmRNA(灰度值表示)表达较空白对照组和阴性对照组显著减少(livinα:0.167±0.013 vs 0.403±0.036,0.389±0.053;livinβ:0.181±0.028 vs 0.413±0.041,0.404±0.029,均尸<0.01),而si-livin2组livin mRNA表达相比于空白对照组和阴性对照无显著差异;转染siRNA后,si-livin1组胃癌细胞生长缓慢,生长曲线较对照组平缓;si-livin1组细胞对5-FU和顺铂半数抑制浓度IC50较空白对照组和阴性对照组显著降低(5-FU:34.07±2.98 vs 74.39±4.91,69.85±4.57;顺铂:4.56±0.35 vs 9.07±0.44,7.96±0.64,均P<0.01);转染siRNA后,si-livin1组胃癌细胞自发凋亡率较空白对照组和阴性对照组增加(11.07±1.36 vs 3.54±2.89,6.72±1.77,P<0.01,P<0.05).5-FU和顺铂作用后,si-livin1组胃癌细胞凋亡率较空白对照组和阴性对照组显著增加(5-FU:34.90±1.76 vs 11.54±O.83,13.54±2.55;顺铂:48.14±2.70 vs 14.51±0.35,15.71±0_34,均P<0.01).结论:RNA干扰可有效沉,livin基因表达从而抑制胃癌SGC-7901细胞生长及增加该细胞凋亡敏感性,livin可能成为胃癌凋亡治疗途径的一个分子靶点。

RNA干扰Livin基因表达增强骨肉瘤MG-63耐药细胞对多柔比星的化疗敏感性

目的:研究凋亡抑制蛋白基因Livin在逆转骨肉瘤耐药中的作用。方法:应用多柔比星逐步诱导法诱导人骨肉瘤MG-63细胞建立耐药细胞株,MTT实验检测耐药细胞株的耐药指数,Western blotting法检测MG-63细胞和耐药细胞中Livin蛋白表达的差异。构建Livin shRNA真核表达载体,应用LipofectmineTM2000转染至耐药骨肉瘤细胞中,Real-time PCR和Western blotting分别检测Livin shRNA转染前后MG-63耐药细胞中Livin基因和蛋白表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,MTT法检测对多柔比星化疗敏感性的变化。结果:成功构建重组质粒p Silencer3.1-H1 neo-Livin si。诱导的耐药细胞MG-63/R对多柔比星的耐药指数为81.32±5.33。Livin shRNA可抑制MG-63细胞中Livin基因和蛋白表达,明显低于空白对照组和非特异性转染组(分别下调72%和69%,P<0.05)。特异性转染Livin shRNA组MG-63/R细胞的凋亡率显著高于未转染组和非特异性转染组[(22.4±3.2)%vs(4.2±1.1)%、(4.7±0.6)%,P<0.05]。3组细胞在加入多柔比星后增殖均受到不同程度的抑制,且呈明显的时间-效应关系,但特异性转染组细胞的存活率均显著低于其他两组(P<0.05)。结论:应用RNA干扰技术下调Livin的基因表达可有效促进耐药MG-63骨肉瘤细胞的凋亡,从而增加其对化疗药物的敏感性。

Livin异构体特异性基因沉默诱导肺腺癌SPC-A1细胞凋亡

目的:利用基因转染和RNA干涉(RNAi)技术,在SPC-A1细胞中建立Livin异构体α和β特异的基因沉默体系,探讨其在诱导SPC-A1细胞凋亡效应中的不同作用及价值。方法:在肺腺癌SPC-A1细胞中稳定表达Livinα+β、Livinα和Livinβ特异性小干涉RNA(siRNA),观察SPC-A1细胞形态、增殖等生物学行为的改变,TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:Livinα+β、Livinα和Livinβ基因沉默后,SPC-A1细胞克隆形成能力较对照组显著下降(P<0.05);转染后SPC-A1细胞发生凋亡,TUNEL法显示细胞凋亡指数分别为(9.20±1.90)%、(6.75±1.20)%和(4.82±1.20)%,(流式细胞仪检测)细胞凋亡率分别为(7.48±1.30)%、(5.50±0.90)%和(4.16±0.70)%。结论:Livinα和β两种异构体均能作为诱导肺癌细胞凋亡的分子靶点,Livin基因沉默靶向诱导肺癌细胞凋亡可能作为手术、化疗、放疗等传统治疗的辅助手段。

Livin基因为靶向的RNA干扰技术对宫颈癌SiHa细胞的化疗增敏作用

目的:研究凋亡抑制基因Livin为靶向的RNA干扰技术(RNAi)对增加人宫颈癌细胞系SiHa化疗敏感性的作用及价值。方法:用已经构建好的针对Livin基因的短发夹RNA真核表达载体(shLivin),转染宫颈癌SiHa细胞,分为空白对照组(SiHa组)、SiHa-shLivin组和转染空载体的SiHa-shVector组。选用顺铂、紫杉醇、多柔比星作为化疗药物,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测加药后3组细胞的增殖情况,得出半数抑制浓度(IC50)值,用流式细胞术检测3组细胞在shLivinIC50的凋亡率进行比较。结果:shLivin重组质粒稳定转染SiHa细胞后,SiHa-shLivin组对顺铂、紫杉醇、多柔比星的IC50值明显低于SiHa组和SiHa-shVector组,差异有高度统计学意义(P<0.001),SiHa组与SiHa-shVector组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。用shLivinIC50药物浓度处理细胞,SiHa-shLivin组凋亡率明显高于SiHa-shVector组和SiHa组,差异有高度统计学意义(P<0.001),Si-Ha组与SiHa-shVector组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:以Livin基因为靶向的RNA干扰技术可增加化疗药物的敏感性,作为宫颈癌细胞化疗增敏的分子靶点,其基因沉默有望成为宫颈癌基因治疗新手段。

Livin蛋白在支气管肺癌中的表达及与Bcl-2的关系

目的:探讨Livin蛋白在原发性支气管肺癌组织的表达及其与Bcl-2蛋白之间的关系。方法:采用免疫组化SP法检测Livin与Bcl-2在支气管肺癌组织和癌旁5cm以上正常肺组织中蛋白的表达情况。结果:肺癌组的Livin蛋白和Bcl-2蛋白阳性表达率均高于对照组(均P<0.05)。男性肺癌患者Livin蛋白的表达阳性率为62.96%,女性为40.00%,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结转移的肺组织中Livin蛋白和Bcl-2蛋白的阳性表达率较高(78.95%vs 36.36%,68.42%vs 27.27%,均P<0.05)。肺鳞癌组织Bcl-2基因蛋白的阳性表达率为58.82%,显著高于肺腺癌组织中Bcl-2基因蛋白表达(20.45%),差异有统计学意义(P<0.05)。吸烟指数≥400的肺癌患者Livin蛋白及Bcl-2蛋白表达阳性率均高于吸烟指数<400的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。支气管肺癌的组织分化程度、临床分期对Livin蛋白和Bcl-2蛋白的阳性表达率的影响均无统计学差异。Livin蛋白与Bcl-2蛋白的表达呈正相关。结论:Livin蛋白与Bcl-2蛋白在支气管肺癌的异常表达,有望成为肿瘤诊断及基因治疗的新靶点。Livin蛋白与凋亡相关蛋白Bcl-2的异常表达在支气管肺癌癌变中有协调作用。

Livin在乳腺癌中的表达及与c-erbB-2和激素受体的关系

目的探讨Livin基因在乳腺癌中的表达及与c-erbB-2基因和激素受体之间的表达关系。方法采用免疫组化S-P法及原位杂交技术检测Livin mRNA和其蛋白在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌中表达及ER/PR和c-erbB-2的表达。结果Livin蛋白和mRNA在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌的表达阳性率之间差异显著(P<0.01),Livin蛋白与mRNA表达之间差异不显著(P>0.05)。Livin表达与临床分期、淋巴结转移和患者年龄有关(P<0.05),与肿瘤大小和组织学分级无关;Livin蛋白与c-erbB-2基因在乳腺癌中的表达无相关性(P>0.05)。Livin表达阳性的乳腺癌ER标记指数(32.25±34.90)%明显低于Livin表达阴性的乳腺癌(59.29±34.04)%(P<0.01),而PR的标记指数在两者之间差异不显著(P>0.05)。结论Livin基因及蛋白在乳腺癌中表达上调,提示在乳腺癌的发生、发展中起重要作用,有望成为一种有效、敏感的肿瘤标记物,可作为判断乳腺癌预后的新分子标记物和乳腺癌诱导凋亡治疗的新靶点。

siRNA沉默Livin基因对乳腺癌MCF-7细胞化学治疗增敏作用的研究

目的观察小干扰RNA(siRNA)沉默Livin基因对人乳腺癌细胞MCF-7细胞生物学影响及siRNA沉默MCF-7细胞Livin基因对4种化学治疗药物的增敏作用。方法 Lipofectamine 2000脂质体转染法转染MCF-7。分组:空白组(无转染)、脂质体组、反义组、错义组、联合组。MTT法测定氟尿嘧啶(5-FU)、表柔比星(EPI)、多西紫杉醇(DXT)、吉西他滨(GEM)单药(单药组)对乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用。免疫组织化学检测Livin蛋白在MCF-7细胞中的表达及转染联合化学治疗药物对Livin蛋白的表达变化。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测转染Livin siRNA后乳腺癌MCF-7细胞的Livin基因表达变化。同时利用Annexin-V检测乳腺癌细胞的凋亡及siRNA Livin联合5-FU、EPI、DXT、GEM诱导乳腺癌细胞凋亡的影响。结果 Livin在MCF-7细胞中高表达,4种化学治疗药物对Livin表达无明显影响,转染Livin基因48、72h后联合4种药物后能明显下调Livin蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。5-FU、EPI、DXT、GEM治疗乳腺癌MCF-7细胞48、72h均能明显的引起细胞的凋亡,且呈剂量依赖性。转染Livin基因48h联合4种药物后乳腺癌MCF-7细胞的凋亡率明显高于单药处理的细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 siRNA沉默Livin基因能促进由化学治疗药物5-FU、EPI、DXT、GEM引起的细胞凋亡,具有化学治疗增敏作用。