LPXTG基序蛋白lmo0159基因缺失株的构建及对单增李斯特菌环境适应能力的影响

单增李斯特菌(LM)是一种重要的食源性致病菌,能引发人和动物李氏杆菌病,其细胞壁表面LPXTG基序蛋白在LM致病过程中发挥重要作用。为了探讨LPXTG基序蛋白Lmo0159对LM环境适应能力的影响,本研究利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)及同源重组技术,运用穿梭质粒p KSV7载体,构建lmo0159基因缺失株LM90SB2-lmo0159。测定在不同温度、不同Na Cl浓度及3.5%乙醇环境下OD600,绘制生长曲线。结果显示:在4℃条件下,LM90SB2与LM90SB2-lmo0159生长无差异;在37和42℃条件下,LM90SB2-lmo0159的生长速度显著低于LM90SB2(P<0.05);在含2.5%Na Cl的BHI培养基中,LM90SB2-lmo0159的生长受到明显抑制,显著低于LM90SB2(P<0.05);在含4.5%Na Cl和3.5%乙醇的BHI培养基中,LM90SB2和LM90SB2-lmo0159生长均受到一定程度抑制,但在4.5%Na Cl条件下差异不显著(P>0.05),在3.5%乙醇条件下,LM90SB2-lmo0159的生长低于LM90SB2,差异显著(P<0.05)。本研究表明lmo0159基因对LM适应胁迫环境具有一定的影响,为进一步研究lmo0159基因的功能奠定了基础。

单核细胞增多性李斯特菌新疆分离株lmo0159基因克隆及生物信息学

采用PCR方法对lmo0159基因进行扩增、克隆及序列测定,通过应用在线EXPASTYProteomic、SOSUI、SMART、SignalP、TMHMM、SOPMA及ProtFun等程序,同时结合DNAMAN和DNAStar生物信息学软件,对LM90SB2菌株lmo0159基因进行序列分析,并对其编码蛋白质的空间结构和功能预测。结果表明,分离株LM90SB2的lmo0159基因序列全长为2070bp,包含1851bp开放阅读框,共编码617个氨基酸;序列同源比对显示,LM90SB2菌株lmo0159基因核苷酸和氨基酸序列与4b型参考菌株同源性均较高,分别为99.1%~100.0%和99.7%~100.0%。系统进化树显示,LM90SB2菌株lmo0159基因核苷酸序列与LM3、LM9、LM11、LM12、F2365、LM188、NSTN、H34、hs2008、LL195和2306等菌株聚为同一支,说明它们的亲缘关系比较近。lmo0159蛋白质是一种偏酸性、稳定、亲水性蛋白质,其二级结构是混合型,其中无规则卷曲最多,无跨膜区域,无信号肽区域,但含有1个胶原蛋白结合域和3个CnaB结构域。功能分析显示,lmo0159蛋白质在氨基酸生物合成、酶代谢、脂肪酸代谢、免疫应答和胁迫应答等方面的几率均较高。本研究成功克隆LM90SB2lmo0159基因,为进一步研究LM90SB2的lmo0159基因功能提供了帮助。