lncRNA-AK093407通过EMT促进结直肠癌细胞增殖和转移

目的研究AK093407对结直肠癌HCT-15细胞的影响及相关机制。方法Lv5慢病毒感染过表达AK093047,转染siRNA沉默AK093407;qRT-PCR鉴定AK093407的表达;MTT和平板克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;划痕修复实验和Transwell检测细胞侵袭和迁移;qRT-PCR和蛋白印记检测EMT相关因子。结果Lv5慢病毒感染后,AK093407表达升高。过表达AK093407结直肠癌细胞增殖活性升高,促进细胞周期演进,凋亡降低,迁移和侵袭能力增强。qRT-PCR和蛋白印记结果显示,occludin和E-cadherin的转录和翻译水平降低(P<0.05);β-catenin、vimentin和fibronectin的转录和翻译水平升高(P<0.05)。AK093407沉默后,与上述结果相反。结论AK093407通过EMT促进结直肠癌细胞增殖、细胞周期、侵袭和迁移并抑制细胞凋亡。

LncRNA AK093407在结直肠癌中的生物学作用研究

目的:观察LncRNA AK093407在人结直肠癌中的生物学作用。方法:qRT-PCR检测LncRNA AK093407在人结直肠癌组织及结直肠癌细胞HCT-116中的表达水平;siRNA沉默LncRNA AK093407在结直肠癌细胞中的表达:MTT实验检测细胞增殖;AnnexinV/PI染色法检测细胞凋亡;PI染色法检测细胞周期;western blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase9、Caspase10、Bax、Bcl-2,细胞周期相关蛋白P21、P27,及p-STAT3的表达。结果:LncRNA AK093407在人结直肠癌组织中的表达量高于癌旁组织;LncRNA AK093407在人结直肠癌细胞HCT-116中的表达量高于正常结直肠上皮细胞NM460;沉默LncRNA AK093407后,HCT-116细胞增殖活性降低,细胞凋亡增强,细胞周期阻滞于G1/S期;细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase9、Caspase10、Bax表达增多,Bcl-2表达降低,细胞周期相关蛋白P21、P27表达增加,p-STAT3表达降低。结论:LncRNA AK093407在结直肠癌组织及HCT-116细胞中高表达,沉默LncRNA AK093407后可抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞。

Lnc-AK077216基于OPG/RANKL/RANK通路对破骨细胞分化成熟的调控作用

目的基于骨保护蛋白(OPG)/细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/细胞核因子κB受体活化因子(RANK)通路探究Lnc-AK077216对破骨细胞(OC)分化成熟的调控作用。方法取对数生长期RAW264.7小鼠单核巨噬细胞,采用脂质体转染法将Lnc-AK077216-shRNA、Control-shRNA转染至RAW264.7细胞,分别设为转染组、空载组。另取未作处理细胞设为对照组。采用荧光显微镜观察转染率,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定转染后Lnc-AK077216 mRNA相对表达量;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测诱导分化7 d后的OC数及阳性染色面积;采用qRT-PCR检测诱导分化培养3 d后各组OPG、RANKL、RANK mRNA相对表达量;采用Western blotting检测诱导分化培养3 d后各组OPG、RANKL、RANK蛋白相对表达量。结果转染48 h后,荧光显微镜显示转染效率>70%;转染48 h后转染组Lnc-AK077216 mRNA相对表达量低于对照组和空载组(P<0.05);诱导分化前RAW264.7细胞多呈圆形且形态规则,诱导分化7 d后经TRAP染色,可观察到呈阳性的多核巨细胞,细胞有伪足、突起,且体积较大,表明生成OC;转染组OC数少于对照组和空载组(P<0.05),阳性染色面积小于对照组和空载组(P<0.05);转染组OPG mRNA和蛋白相对表达量高于对照组和空载组(P<0.05),RANKL、RANK mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组和空载组(P<0.05)。结论敲低Lnc-AK077216可抑制RAW264.7细胞向OC分化,其调控机制可能与上调OPG mRNA和蛋白表达,下调RANKL、RANK mRNA和蛋白表达有关。