lnc-NONHSAT074080调控靶基因ARL6IP4参与RA-UIP发病的机制研究

目的 探讨lnc-NONHSAT074080在类风湿关节炎(RA)相关普通型间质性肺炎(UIP)发病中的作用及调控机制。方法 按是否合并UIP分为RA肺纤维化组4例及RA对照组4例。留全血,Affymetrix基因芯片筛选RA肺纤维化发病相关的长链非编码RNA(lncRNA)进行生物信息学分析,并对表达上调明显的10个lncRNA进行实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)验证。选择经qPCR验证,在RA肺纤维化组表达明显升高,且生物信息学分析与肺纤维化进程相关的lncRNA作为目标lncRNA。构建目标lncRNA的shRNA,荧光素酶基因报告验证目标lncRNA与靶基因的关系。以目标lncRNA shRNA转染转化生长因子(TGF)-β1诱导的人胚肺成纤维细胞系,CCK-8法检测细胞的增殖能力,细胞免疫荧光检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,qPCR检测细胞中目标lncRNA及靶基因的表达,酶联免疫吸附试验检测细胞中Ⅰ型胶原及纤连蛋白表达。结果 与RA对照组相比,RA肺纤维化组患者全血中存在192个表达明显上调的lncRNA,q PCR结果显示lnc-NONHSAT074080在RA肺纤维化组患者全血中的表达升高(P<0.05);生物信息学分析及荧光素酶基因报告表明lnc-NONHSAT074080与纤维化进程相关,作用的靶基因是ARL6IP4,可能通过分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、信号转导子和激活因子(STAT)等纤维化相关信号通路发挥作用;与空白对照组相比,TGF-β1组细胞增殖水平、α-SMA、lnc-NONHSAT074080、ARL6IP4、Ⅰ型胶原和纤连蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+NONHSAT074080 shRNA组上述变化趋势相反(P<0.05)。结论lnc-NONHSAT074080与RA-UIP的发病及纤维化进程相关,可能通过调控靶基因ARL6IP4参与纤维化进程。