长链非编码RNA GC lnc1对胃癌MGC-803细胞增殖和迁移的作用

目的探讨长链非编码RNA GC lnc1对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移的作用,为临床治疗提供新的治疗靶点。方法利用慢病毒载体构建Lnc RNA GC lnc1慢病毒RNAi干扰载体,RT-qPCR检测凋亡因子Caspase-3和Caspase-9的表达量,CCK-8试剂盒检测肿瘤细胞的增殖,Transwell小室检测肿瘤细胞的迁移。结果 (1)以胃癌MGC-803细胞为种子细胞,慢病毒转染率为94%,转染率较高。(2)三组间凋亡基因Caspase-3、Caspase-9的表达水平差异有统计学意义(F=17.927,P<0.05和F=15.117,P<0.05)。同时,Caspase-3、Caspase-9两个指标,RNAi干扰载体组与空白对照组、与空白载体病毒组比较显著升高(P<0.05)。(3)Transwell实验结果显示,RNAi干扰载体组与空白对照组、与空白载体病毒组比较透过分子筛的细胞数显著降低(均P<0.05);CCK-8检测结果显示,RNAi干扰载体组与空白对照组、与空白载体病毒组比较细胞增值率显著降低(均P<0.05)。结论 Lnc RNA GC lnc1慢病毒RNAi可以抑制胃癌MGC-803细胞的增殖和迁移。

沉默长链非编码RNA ANO1-AS1对食管鳞癌细胞迁移、侵袭的影响

目的研究长链非编码(Lnc)RNA ANO1-AS1对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法食管癌细胞株(EC109、TE)转染ANO1-AS1敲减慢病毒,沉默ANO1-AS1表达为LV-sh-ANO1-AS1组,阴性肿瘤对照为LV-Con组,未进行转染为空白对照(Blank)组。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组食管癌细胞中ANO1-AS1和ANO1的相对表达量。通过划痕实验和Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力。通过Transwell侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力。通过Western印迹测定每组细胞中ANO1、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、上皮间质转化(EMT)相关蛋白及细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达。结果qRT-PCR结果显示,转染ANO1-AS1敲减慢病毒后,食管癌细胞EC109、TE中LV-sh-ANO1-AS1组LncRNA ANO1-AS1和ANO1 mRNA表达水平均显著低于LV-Con组和Blank组(P<0.05)。划痕实验结果表明,LV-sh-ANO1-AS1组细胞划痕愈合率显著低于LV-Con组和Blank组(P<0.05)。Transwell结果表明,LV-sh-ANO1-AS1组细胞迁移和侵袭能力显著低于LV-Con组和Blank组(P<0.05)。Western印迹结果显示,与LV-Con组和Blank组比较,LV-sh-ANO1-AS1组MMP2、MMP9、Vimentin、p-ERK及ANO1蛋白表达水平显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论LncRNA ANO1-AS1在食管鳞癌细胞EC109、TE中高表达,并可能通过影响ERK/MAPK信号通路促进食管癌细胞的迁移和侵袭。

巴戟天调控LncRNA LIFR-AS1对乳腺癌细胞T-47D增殖、凋亡及迁移的影响

目的 探讨巴戟天对乳腺癌细胞T-47D增殖、凋亡、迁移的影响及其对长链非编码(Lnc)RNA白血病抑制因子受体反义RNA-1(LIFR-AS1)的调控作用。方法 T-47D细胞培养于含不同浓度(100、200、400μg/ml)巴戟天水提取物的培养液内培养24 h,分别为巴戟天低、中、高剂量组。同时将正常培养的细胞作为对照组。将si-NC、si-LIFR-AS1分别转染至T-47D细胞后加入含400μg/ml巴戟天培养液培养24 h,分别为巴戟天高剂量+si-NC组、巴戟天高剂量+si-LIFR-AS1组。采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LIFR-AS1表达水平;采用平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;应用流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡率;采用划痕实验检测细胞迁移能力。结果 与对照组比较,巴戟天中、高剂量组LIFR-AS1表达水平及凋亡率明显升高,克隆形成数明显减少,G0-G1期细胞比例明显升高,S期细胞比例及划痕愈合率明显降低(P<0.05);与巴戟天高剂量+si-NC组比较,巴戟天高剂量+si-LIFR-AS1组克隆形成数明显增多,G0-G1期细胞比例及凋亡率明显降低,S期细胞比例及划痕愈合率明显升高(P<0.05)。结论 巴戟天可通过上调LIFR-AS1表达诱导细胞周期阻滞从而降低乳腺癌细胞增殖能力,并可诱导细胞凋亡及抑制细胞迁移。

lncRNA TP53TG1在结肠癌中的表达及通过mi R-18a/CDC42轴对癌细胞发展的影响

目的:探讨lncRNA TP53TG1通过miR-18a/CDC42轴对SW620细胞发展的影响。方法:分析结肠癌组织、癌旁组织、SW620、NCM460细胞中lncRNA TP53TG1、miR-18a和CDC42的表达。检测下调TP53TG1对细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。采用生物信息学miRanda分析LncRNA TP53TG1作用靶点,检测TP53TG1和miR-18a的相关性。检测下调miR-18a或上调LncRNATP53TG1通过miR-18a对细胞增殖、侵袭和EMT的影响。TargetScan分析miR-18a靶点,检测miR-18a和CDC42之间的关系。分析CDC42 siRNA对细胞增殖、侵袭和EMT的影响。结果:和癌旁正常组织相比,结肠癌组织中lncRNA TP53TG1和CDC42表达上调,miR-18a表达下调;和NCM460细胞相比,SW620细胞中lncRNA TP53TG1和CDC42表达上调,miR-18a表达下调。lncRNA TP53 TG1 siRNA或CDC42 siRNA抑制细胞增殖、侵袭与EMT;lncRNA TP53TG1靶向miR-18a,miR-18a靶向CDC42。miR-18a inhibitor促进细胞增殖、侵袭与EMT;上调LncRNATP53TG1通过miR-18a促进CDC42表达和细胞发展。结论:lncRNA TP53TG1在结肠癌中表达上调且通过miR-18a/CDC42轴促进SW620细胞增殖、侵袭及其EMT。

结肠癌患者组织中NCAPD2、Lnc RNA NR2F1-AS1、Nup107表达及其与预后的关系

目的探究结肠癌患者组织中染色体凝缩蛋白复合物I的亚基D2(NCAPD2)、Lnc RNA核受体亚家族2F组成员1-反义RNA1(Lnc RNA NR2F1-AS1)、核孔蛋白107(Nup107)的表达及其与患者预后的关系。方法选择2017年6月至2019年6月在广州中医药大学第一附属医院及暨南大学附属广州市红十字会医院进行根治性切除术的60例结肠癌患者作为研究对象,术中采集患者的结肠癌组织标本和距离结肠癌组织>2 cm的癌旁正常组织标本。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法测定结肠癌组织和癌旁组织的Lnc RNA NR2F1-AS1表达水平,采用免疫组化SP法测定结肠癌组织和癌旁组织的NCAPD2和Nup107表达情况。比较结肠癌组织和癌旁组织的Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2、Nup107表达情况,同时比较Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2、Nup107不同表达患者的临床资料。采用COX回归模型分析Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2、Nup107表达对结肠癌患者预后的影响,采用Kaplan-Meier法绘制结肠癌患者的生存曲线,分析Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2、Nup107表达情况与结肠癌患者预后的相关性。结果结肠癌组织的Lnc RNA NR2F1-AS1相对表达量为1.09±0.28,明显低于癌旁组织的0.69±0.09,结肠癌组织的Lnc RNA NR2F1-AS1高表达率、NCAPD2阳性率和Nup107高表达率分别为55.00%、61.67%和70.00%,明显高于癌旁组织的26.67%、30.00%和31.67%,差异均有统计学意义(P<0.05);Lnc RNA NR2F1-AS1高表达和低表达患者、NCAPD2阳性患者和阴性患者、Nup107高表达患者和低表达患者在肿瘤分化程度、浸润程度、淋巴结转移和远端转移方面比较,差异均有统计学意义(P<0.05);COX回归分析结果显示,Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2和Nup107表达均是结肠癌患者预后的影响因素(P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,Lnc RNA NR2F1-AS1高表达、NCAPD2阳性和Nup107高表达患者的中位生存期分别低于Lnc RNA NR2F1-AS1低表达、NCAPD2阴性和Nup107低表达患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2、Nup107的表达与结肠癌患者的肿瘤分化程度、浸润程度、淋巴结转移和远端转移等临床病理特征有关,三者可能共同参与了结肠癌的发生、发展,对患者的预后造成一定影响。

lncRNA CCHE1与肺腺癌临床特征及预后的关系研究

目的:探究长链非编码RNA(lnc RNA)CCHE1表达与肺腺癌临床特征及预后的关系。方法:选取2015年12月至2016年12月行手术切除的肺腺癌患者83例,收集其肺癌组织和癌旁正常组织蜡块,采用qRT-PCR法检测lnc RNA CCHE1的表达,分析其表达与患者临床病理特征的关系;随访患者预后情况,分析lnc RNA CCHE1表达在患者预后判断中的价值。结果:肺腺癌组织中lnc RNA CCHE1的表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);高TNM分期、存在淋巴结转移及低分化程度的患者lnc RNA CCHE1表达明显高于低TNM分期、无淋巴结转移及高分化程度者,差异有统计学意义(P<0.05);lnc RNA CCHE1诊断为肺腺癌的AUC为0.925(95%CI:0.876~0.974),当lnc RNA CCHE1≥29.18时,敏感度为94.0%,特异度为89.2%;入组病例死亡22例,存活61例,死亡者lnc RNA CCHE1表达为(73.15±8.45),明显高于存活者(P<0.05)。lnc RNA CCHE1高表达患者术后3年无进展生存率为32.84%(22/67),总生存率为68.66%(46/67),分别明显低于lnc RNA CCHE1低表达者(P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、分化程度及lnc RNA CCHE1水平是肺腺癌患者术后3年PFS和OS的独立影响因素(P<0.05)。结论:lnc RNA CCHE1在肺腺癌组织中表达升高,其表达与患者临床病理特征及预后有关,可作为肺腺癌潜在的分子标志物。

Lnc RNA PCGEM1通过TGF β2/Smad2信号通路调控食管癌细胞侵袭和转移研究

目的: 探讨长链非编码RNA PCGEM1(long-chain noncoding RNA PCGEM1,Lnc RNA PCGEM1)通过TGF β2/Smad2信号通路调控食管癌(esophageal cancer,EC)细胞侵袭和转移。 方法: 收集62例EC患者癌组织及正常的癌旁组织,qRT-PCR检测Lnc RNA PCGEM1在EC及相应的癌旁组织、不同细胞中的表达情况;构建Lnc RNA PCGEM1沉默细胞系,细胞分为Eca-109-siPCGEM1组、阴性对照Eca-109-siNC组,并以Eca-109作为空白对照组,并构建Eca-109-siPCGEM1细胞的miR-148a沉默细胞系,分为siPCGEM1+simiR-148a组及siPCGEM1+siNC组;平板克隆实验检测Eca-109细胞增殖能力;划痕实验检测Eca-109细胞迁移能力的影响;使用生物信息学网站StarBase预测PCGEM1可互补结合的微小RNA(microRNA,miRNA),再根据Targetscan网站预测相应miRNA可靶向结合的基因;免疫印迹(Western Blot)检测TGF β2/Smad2信号通路蛋白表达情况。 结果: qRT-PCR结果显示,EC组织和食管癌细胞系中 Lnc RNA PCGEM1的表达水平高于癌旁组织(P<0.05),与其他细胞株相比, Lnc RNA PCGEM1在Eca-109细胞中表达量最高(P<0.05);与空白对照组相比,Eca-109-siPCGEM1组细胞克隆数和迁移数量明显减少,miR-148a表达量明显增加(P<0.05),空白对照组与Eca-109-siNC组相比差异无统计学意义(P>0.05);与siPCGEM1+NC组相比,siPCGEM1+simiR-148a组细胞克隆数、迁移数量明显增多(P<0.05);StarBase网站预测结果显示,Lnc RNA PCGEM1可与miR-148a互补结合,再经Targetscan网站预测分析显示,miR-148a与TGFβ2存在靶向结合位点;Western blot检测结果显示Eca-109-siPCGEM1组中TGF β2及Smad 2的表达明显低于空白对照组与Eca-109-siNC组(P<0.05),空白对照组和Eca-109-siNC组中上述指标的表达量无统计学意义(P>0.05)。 结论: Lnc RNA PCGEM1在食管癌中高表达,高表达Lnc RNA PCGEM1可能通过下调miR-148a水平,强化TGF β2/Smad2信号通路,从而促进EC的进展。

Lnc RNA PCGEM1对鼻咽癌细胞SUNE-1辐射敏感性的影响

目的探讨长链非编码RNA PCGEM1(Lnc RNA PCGEM1)对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响。方法收集60例经放射治疗失败的鼻咽癌患者癌组织及距离癌组织超过2cm处的正常组织,qRT-PCR检测Lnc RNA PCGEM1在鼻咽癌及正常组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征的相关性;构建Lnc RNA PCGEM1沉默细胞系SUNE-1-siPCGEM1及阴性对照SUNE-1-NC,并以SUNE-1作为空白对照;电离辐射后,采用MTT及平板克隆实验、Transwell、划痕实验、免疫荧光标记检测Lnc RNA PCGEM1对SUNE-1细胞辐射敏感性、侵袭能力、迁移能力及DNA损伤修复的影响;使用生物信息学网站starBase预测PCGEM1可互补结合的微小RNA(microRNA,miRNA),双荧光素酶报告基因实验进一步检测两者的相互作用,qRT-PCR测定SUNE-1细胞中miR148a的表达。结果鼻咽癌组织中Lnc RNA PCGEM1的表达水平高于癌旁正常组织,且差异有统计学意义(P<0.05);分化程度越低,临床分期越晚,淋巴结发生转移的患者lnc RNA PCGEM1表达水平越高,差异具有统计学意义(P<0.05);与空白对照组和SUNE-1-NC组相比,SUNE-1-siPCGEM1组细胞辐射后细胞增殖、侵袭和迁移能力明显下降,γH2AX荧光强度明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05),空白对照组与SUNE-1-NC组相比,差异无统计学意义(P>0.05);starBase网站预测结果显示,Lnc RNA PCGEM1可与miR-148a互补结合,双荧光素酶报告证实Lnc RNA PCGEM1与miR-148a存在靶向作用关系;qRT-PCR结果显示SUNE-1-siPCGEM1组中miR148a表达明显低于空白对照组与SUNE-1-NC组(P<0.05)。结论 Lnc RNA PCGEM1在鼻咽癌中呈高表达,沉默Lnc RNA PCGEM1表达可能通过上调miR-148a水平增加鼻咽癌细胞辐射敏感性。

LncRNA NEAT1调控miR-331表达对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响

目的探讨长链非编码(Lnc)RNA NEAT1通过靶向调控miR-331对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响。方法选取2018年1月至2019年1月手术切除鼻咽癌组织及对应的癌旁组织的患者48例样本,qRT-PCR检测Lnc RNA NEAT1在鼻咽癌及相应的癌旁组织、不同的鼻咽癌细胞系中的表达情况;构建Lnc RNA NEAT1沉默细胞系SUNE-1-siNEAT1及阴性对照SUNE-1-siNC,并以SUNE-1作为空白对照;电离辐射后,采用MTT实验、Transwell、免疫荧光标记检测Lnc RNA NEAT1对SUNE-1细胞辐射敏感性、侵袭能力及DNA损伤修复的影响;使用生物信息学网站starBase预测NEAT1可互补结合的微小RNA(microRNA,miRNA),再经双荧光基因报告验证Lnc RNA NEAT1与miR-331的靶向关系。结果qRT-PCR结果显示,鼻咽癌组织中Lnc RNA NEAT1的表达水平高于癌旁正常组织,且差异有统计学意义(P<0.05),Lnc RNA NEAT1在SUNE-1细胞中表达量最高,与其他细胞株相比差异均具有统计学意义(P<0.05);成功构建Lnc RNA NEAT1沉默细胞系后,与SUNE-1组和SUNE-1-siNC组相比,SUNE-1-siNEAT1组细胞辐射后OD492nm值明显下降,细胞侵袭数量明显减少,γH2AX荧光强度明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05),SUNE-1组与SUNE-1-siNC组相比,差异无统计学意义(P>0.05);starBase网站预测结果显示,Lnc RNA NEAT1与miR-331存在互补结合位点,双荧光基因报告结果显示Lnc RNA NEAT1与miR-331可靶向结合。qRT-PCR证实LncRNA NEAT1负向调控miR-331的表达。结论lnc RNA NEAT1在鼻咽癌中呈高表达,沉默Lnc RNA NEAT1表达可能通过上调miR-331水平抑制鼻咽癌细胞增殖、侵袭能力,增加鼻咽癌细胞辐射敏感性。

Lnc RNACCAT1通过调控miR-335-3p对人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响

目的探讨长链非编码RNA(Lnc RNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖、凋亡和成骨分化的影响及可能机制。方法以成骨诱导液诱导hBMSCs,分别于诱导后0 d和1、3、7、14 d采用RT-qPCR检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)、CCAT1和miR-335-3p基因表达水平。转染CCAT1小干扰RNA或miR-335-3p模拟物(mimics)至hBMSCs,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测hBMSCs存活率、流式细胞术检测细胞凋亡率、RT-qPCR检测细胞中ALP、RUNX2和OCN基因表达,蛋白印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-335-3p与CCAT1调控关系。以健康体检者为对照,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测OP患者血清中CCAT1和miR-335-3p表达水平。结果随着诱导时间的增加,hBMSCs中ALP、RUNX2、OCN及CCAT1基因表达水平逐渐升高(P<0.05),miR-335-3p表达水平逐渐降低(P<0.05)。低表达CCAT1或高表达miR-335-3p后,hBMSCs存活率和CyclinD1蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P<0.05),ALP、RUNX2和OCN水平降低(P<0.05)。CCAT1在hBMSCs细胞中靶向负调控miR-335-3p表达。低表达miR-335-3p逆转了低表达CCAT1对hBMSCs增殖、凋亡和分化的影响。与对照组比较,OP患者血清CCAT1表达水平降低(P<0.05),miR-335-3p表达水平升高(P<0.05)。结论OP患者血清中CCAT1表达降低,miR-335-3p表达升高。低表达CCAT1可能通过靶向上调miR-335-3p抑制hBMSCs增殖和分化,并促进其凋亡。

血清miR-499a、lnc RNA MALAT1在系统性红斑狼疮中表达及其与预后的关系

目的 检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清微RNA(miRNA)-499a、长链非编码RNA(lnc RNA)肺癌转移相关转录本1(MALAT1)表达情况,并分析其与患者临床预后的关系。方法 选取2018年1月至2020年1月北大荒集团总医院收治的SLE患者152例作为SLE组进行回顾性研究,另选取同期无自身免疫性疾病的健康体检者155名作为对照组。根据SLE疾病活动指数评分(SLEDAI),将SLE患者分为静止期组(SLEDAI 0~4分,n=43)、轻度活动期组(SLEDAI 5~9分,n=41)、中度活动期组(SLEDAI 10~15分,n=38)、重度活动期组(SLEDAI>15分,n=30);根据是否发生肾损伤,将SLE患者分为非肾损伤组(n=71)与肾损伤组(n=81);以SLE患者血清miR-499a、lnc RNA MALAT1均值为标准,将SLE患者分为miR-499a高表达组(n=77)和miR-499a低表达组(n=75),lnc RNA MALAT1高表达组(n=79)和lnc RNA MALAT1低表达组(n=73);根据预后情况分为预后良好组(n=115)与预后不良组(n=37)。比较SLE组与对照组、SLE患者不同分组(静止期组、轻度活动期组、中度活动期组、重度活动期组;非肾损伤与肾损伤组;预后良好与预后不良组;miR-499a高表达组和miR-499a低表达组;lnc RNA MALAT1高表达组和lnc RNA MALAT1低表达组)组间血清miR-499a、lnc RNA MALAT1表达差异;分析SLE患者血清miR-499a、lnc RNA MALAT1水平与临床病理特征的相关性;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a、lnc RNA MALAT1对SLE患者预后不良的预测价值。结果 SLE组患者血清miR-499a水平为0.24±0.07,低于对照组(1.01±0.18),lnc RNA MALAT1水平为3.75±0.82,高于对照组(1.02±0.19),差异均有统计学意义(P<0.05)。血清miR-499a水平在静止期组(0.52±0.11)、轻度活动期组(0.22±0.08)、中度活动期组(0.10±0.04)、重度活动期组(0.05±0.01)依次降低,lnc RNA MALAT1水平在静止期组(2.35±0.71)、轻度活动期组(3.72±0.83)、中度活动期组(4.44±0.85)、重度活动期组(4.95±0.95)依次升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组SLE患者血清miR-499a水平为0.11±0.02,低于预后良好组(0.29±0.09),lnc RNA MALAT1水平为5.20±0.85,高于预后良好组(3.28±0.79),差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-499a高表达组抗dsDNA阳性、抗ANA阳性SLE患者占比均低于miR-499a低表达组,SLEDAI评分低于miR-499a低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05);lnc RNA MALAT1高表达组抗dsDNA阳性、抗ANA阳性SLE患者中占比均高于lnc RNA MALAT1低表达组,SLEDAI评分高于lnc RNA MALAT1低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。SLE患者血清miR-499a、lnc RNA MALAT1呈负相关(r=-0.836,P<0.05);血清miR-499a水平预测SLE患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.815(灵敏度为86.5%,特异度为66.1%),血清lnc RNA MALAT1水平预测SLE患者预后不良的AUC为0.871(灵敏度为83.8%,特异度为74.8%)。结论 SLE患者血清miR-499a降低、lnc RNA MALAT1水平升高,二者可能共同参与SLE的进展,有望作为SLE预后不良的生物学标志物。

基于一道多选题探究求和型不等式的处理策略

基于一道多选题,探讨数列和型不等式S_(n)<g(n)或S_(n)≥g(n)的常用求解策略(其中S_(n)是数列(an)的前n项和,a_(n)已知),注重题目的“想”的过程,旨在展现思维过程,打通条件与待求之间的连接通道.