LncRNA ABHD11-AS1在Erastin诱导的胰腺癌细胞铁死亡中的作用及其机制

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)α/β-水解酶结构域蛋白11的反义链1(α/β-hydrolase domain containing protein 11-antisense strand 1,ABHD11-AS1)在Erastin诱导的胰腺癌细胞铁死亡中的作用及其潜在机制。方法:通过GEPIA平台分析ABHD11-AS1在胰腺癌中的表达和患者预后。采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测人胰腺癌PANC1、MIApaca-2和PaTu8988细胞中ABHD11-AS1表达,CCK8法计算Erastin半数抑制浓度(IC_(50))。在PANC1细胞中过表达ABHD11-AS1,分别转染pcDNA3.1、pcDNA3.1-ABHD11-AS1质粒;在PaTu8988细胞中干扰ABHD11-AS1表达,分别转染siControl、siRNA1、siRNA2,qRT-PCR检测转染效率,分别予以对照(0μmol/L Erastin)、Erastin(IC_(50)浓度)处理,CCK8法检测细胞活性,ELISA法检测丙二醛和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;另在pcDNA3.1-ABHD11-AS1和siRNA1组加入Erastin的同时加入铁死亡挽救剂Ferrostatin-1,坏死挽救剂Necrostatin-1或凋亡挽救剂Z-VAD-FMK,CCK8法检测细胞活性;免疫印迹法检测5组胰腺癌细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)以及磷酸化mTOR(p-mTOR)表达水平。结果:胰腺癌组织中ABHD11-AS1表达水平明显高于癌旁组织,高表达ABHD11-AS1组患者预后较差(P<0.05)。ABHD11-AS1相对表达量由低到高依次是人胰腺癌PANC1、MIApaca-2和PaTu8988细胞,Erasin IC_(50)趋势与ABHD11-AS1表达量相同,依次是2.245、11.760、17.120μmol/L。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-ABHD11-AS1组细胞活性及GSH含量明显增高,而丙二醛含量明显降低(P<0.05);与siControl组相比,siRNA1组和siRNA2组细胞活性及GSH含量明显降低,丙二醛含量明显增高(P均<0.05)。仅Ferrostatin-1可以挽救pcDNA3.1-ABHD11-AS1和siRNA1组细胞活性(P<0.05)。过表达ABHD11-AS1可促进mTOR活化,增强GPX4表达(P<0.05);而干扰ABHD11-AS1则相反。结论:LncRNA ABHD11-AS1可通过活化mTOR促进GPX4表达,从而促进胰腺癌细胞铁死亡抵抗。

lncRNA ABHD11-AS1通过调控STAT1/STAT3表达促进非小细胞肺癌细胞增殖与迁移

目的:探讨lncRNA ABHD11-AS1在非小细胞肺癌中的生物学功能和作用机制。方法:选取2016年7月至2018年12月在广东医科大学附属医院行非小细胞肺癌手术的248例患者,采用χ~2检验分析lncRNA ABHD11-AS1的表达与患者年龄、性别、临床病理分期、病理类型及吸烟状态的关系;采用Kaplan-Meier法分析ABHD11-AS1对非小细胞肺癌患者的预后意义;应用qRTPCR方法检测ABHD11-AS1在非小细胞肺癌组织和细胞系中的表达;通过体外功能测定评估敲低ABHD11-AS1对细胞增殖和转移的影响;通过Western blot实验探讨ABHD11-AS1在非小细胞肺癌中致癌作用的分子机制。结果:lncRNA ABHD11-AS1高表达组较低表达组吸烟患者较少(P=0.02),分期更晚(P<0.01);ABHD11-AS1高表达预示非小细胞肺癌患者预后不良;ABHD11-AS1在非小细胞肺癌组织和癌细胞株中高表达;敲低ABHD11-AS1的表达可抑制体外细胞增殖和迁移;敲低ABHD11-AS1表达抑制STAT1和STAT3癌蛋白的表达。结论:ABHD11-AS1可能通过促进STAT1和STAT3癌蛋白的表达,从而增加非小细胞肺癌细胞的增殖、集落形成以及迁移和侵袭能力。

长链非编码RNA ABHD11-AS1促进胃癌细胞糖酵解并加速肿瘤恶性进展

目的探讨长链非编码RNA ABHD11-AS1对胃癌细胞糖酵解的影响及其作用的分子机制。方法分别将空载质粒pcDNA-Vector和过表达质粒pcDNA-ABHD11-AS1转染入ABHD11-AS1低表达的MKN45和MGC803胃癌细胞中,构建过表达组(pcDNA-ABHD11-AS1)和空载质粒对照组胃癌细胞株。运用CCK-8法检测细胞的增殖活性并绘制生长曲线,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell检测细胞迁移、侵袭能力,葡萄糖摄取实验及乳酸生成实验检测细胞糖酵解水平的变化;LncMAP数据库分析查找ABHD11-AS1可能调控的转录因子,查阅文献进行分析挑选候选转录因子,Western blot明确ABHD11-AS1是否影响候选转录因子的表达量。结果与对照组相比,转染pcDNA-ABHD11-AS1后,MGC803和MKN45胃癌细胞中ABHD11-AS1基因表达量明显上升(P<0.01),CCK8和成克隆实验表明细胞增殖加快(P<0.05),克隆形成能力增强,Tanswell实验结果证实细胞迁移(11±2 vs 27±3;17±4 vs 28±3,P<0.01)、侵袭(15±3 vs 26±2;10±1 vs 35±2,P<0.01)作用增强;上调ABHD11-AS1后,胃癌细胞葡萄糖摄取及乳酸生成增多(P<0.05)。分析数据库结果显示ABHD11-AS1可能调控经典糖酵解相关基因c-Myc,Western blot结果证实上调ABHD11-AS1后,c-Myc表达量随之升高。结论ABHD11-AS1通过上调c-Myc促进胃癌细胞内的糖酵解,并加速胃癌进展。

lncRNAs ABHD11-AS1靶向miR-133a上调EGFR表达促进卵巢癌细胞增殖

目的研究lncRNAs ABHD11-AS1在卵巢癌细胞和输卵管上皮细胞中的表达,探究其对卵巢癌细胞增殖的影响和作用机制。方法Real-time PCR检测细胞中lncRNAs ABHD11-AS1和miR-133a的表达,双荧光素酶实验明确二者之间的调控作用;用NC siRNA、ABHD11-AS1 siRNA以及NC mimic、miR-133a mimic和NC inhibitor、miR-133a inhibitor分别转染细胞,CCK-8检测细胞增殖;Real-time PCR以及Western Blot实验检测细胞中EGFR的表达。结果结果表明,lncRNAs ABHD11-AS1在TOV-112D和CaVO3卵巢癌细胞系中的表达水平明显高于TEC细胞,且下调lncRNAs ABHD11-AS1可明显抑制卵巢癌细胞的增殖;ABHD11-AS1与miR-133a的表达呈负相关。双荧光素酶结果显示,转染miR-133a mimic和野生型ABHD11-AS1片段的细胞中荧光素酶的活性显著降低;与输卵管上皮细胞相比,miR-133a在卵巢癌细胞系的表达水平更低。转染miR-133a mimic会显著上调上述两种细胞中miR-133a的表达同时还抑制其增殖和EGFR表达。此外,下调miR-133a可明显促进卵巢癌细胞的增殖以及增加EGFR表达。与此相反,下调lncRNAs ABHD11-AS1明显降低EGFR表达。结论lncRNAs ABHD11-AS1通过调控miR-133a,上调其下游靶基因EGFR的表达从而促进卵巢癌的发生发展。

LncRNA DDX11-AS1通过靶向miR-497-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究

背景:LncRNA在胃癌中表达上调或下调,其在胃癌发生、发展中的作用机制尚未完全阐明。目的:探讨LncRNA DDX11-AS1通过靶向miR-497-5p表达来调控胃癌细胞增殖、迁移、凋亡的机制。方法:采用qRT-PCR检测胃癌组织和细胞株中DDX11-AS1和miR-497-5p的表达,Pearson法分析胃癌组织中DDX11-AS1与miR-497-5p的相关性。将胃癌HGC-27细胞随机分为NC组、si-con组、si-DDX11-AS1组、miR-con组、miR-497-5p组、si-DDX11-AS1+anti-miR-con组、si-DDX11-AS1+anti-miR-497-5p组。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;双萤光素酶报告系统验证DDX11-AS1与miR-497-5p的靶向调节关系;蛋白质印迹法检测cyclin D1、cleaved caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:胃癌组织和细胞株中DDX11-AS1表达显著升高(P<0.05),而miR-497-5p表达显著降低(P<0.05),DDX11-AS1与miR-497-5p呈负相关(r=-0.754,P<0.05)。干扰DDX11-AS1表达或上调miR-497-5p表达可显著抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05),cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达显著降低(P<0.05),cleaved caspase-3表达显著升高(P<0.05)。双萤光素酶报告实验证明DDX11-AS1可负向调控miR-497-5p的表达和活性。抑制miR-497-5p表达可逆转干扰DDX11-AS1表达对胃癌细胞生物学行为的影响。结论:干扰LncRNA DDX11-AS1表达能通过靶向结合并上调miR-497-5p的表达而抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。

叶黄素抑制ABHD11-AS1对胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨叶黄素对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及可能机制。方法:采用低、中、高剂量的叶黄素干预胶质瘤细胞48 h,细胞计数试剂盒和Transwell法检测细胞活力和侵袭,流式细胞术检测周期分布和凋亡,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测含α/β水解酶结构域蛋白11反义RNA1 (ABHD11-AS1)表达。将ABHD11-AS1小干扰RNA转染胶质瘤细胞U251,检测干扰ABHD11-AS1表达对U251细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。结果:低剂量叶黄素对U251细胞存活、周期分布、侵袭、凋亡、ABHD11-AS1表达无显著影响。中、高浓度的叶黄素处理后,U251细胞存活率、侵袭数、S期细胞比例、ABHD11-AS1表达显著降低,凋亡率和G0-G1细胞比例显著升高(P<0.05)。干扰ABHD11-AS1表达后U251细胞存活率、侵袭数、S期细胞比例显著降低,凋亡率和G0-G1细胞比例显著升高(P<0.05)。过表达ABHD11-AS1后,叶黄素处理的U251细胞存活率、侵袭数、S期细胞比例显著升高,凋亡率和G0-G1细胞比例显著降低(P<0.05)。结论:一定剂量的叶黄素可降低胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制与抑制ABHD11-AS1表达有关。

膀胱癌组织中LncRNA DDX11-AS1与LAMB3表达及临床意义

目的研究膀胱癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)DDX11-AS1及层黏连蛋白亚基B3(LAMB3)的表达,探讨其临床意义。方法回顾性分析我院2015年2月—2016年2月收治的84例膀胱癌患者的临床资料。检测所有患者的癌组织和癌旁组织中LncRNA DDX11-AS1、LAMB3 mRNA及LAMB3蛋白表达情况。分析癌组织中LncRNA DDX11-AS1与LAMB3表达的相关性及LncRNA DDX11-AS1和LAMB3表达与临床病理特点的关系。分析癌组织中不同LncRNA DDX11-AS1、LAMB3表达与患者生存预后的差异。结果与癌旁组织相比,膀胱癌组织中LncRNA DDX11-AS1及LAMB3的相对表达量明显增高(P<0.05)。与癌旁组织相比,膀胱癌组织中LAMB3表达阳性率明显增高(P<0.05)。癌组织中LncRNA DDX11-AS1与LAMB3表达呈显著正相关(r=0.564,P<0.01)。癌组织中LncRNA DDX11-AS1和LAMB3的表达与膀胱癌的肿瘤TNM分期及是否合并淋巴结转移相关(P<0.05)。LncRNA DDX11-AS1、LAMB3高表达的膀胱癌患者5年总体生存率显著低于低表达者(P<0.05)。结论膀胱癌组织中LncRNA DDX11-AS1及LAMB3表达表达上调,癌组织中两者的高表达可能参与了促进膀胱癌的发生发展,有望成为判断预后的新肿瘤标志物。

m6A修饰的LncRNA SLC7A11-AS1调控YAP1参与口腔鳞癌细胞侵袭迁移

目的探讨N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)修饰的LncRNA SLC7A11-AS1调控YAP1参与口腔鳞癌(OSCC)细胞侵袭与迁移的作用机制。方法生物信息学工具预测METTL3/LncRNA SLC7A11-AS1/YAP1轴的作用关系,并借助RNA pull-down实验与RIP实验进行验证。检测细胞中m6A、METTL3、LncRNA SLC7A11-AS1、YAP1的表达水平。将细胞分为si-NC、si-SLC7A11-AS1、si-SLC7A11-AS1+pcDNA、si-SLC7A11-AS1+pcDNAYAP1组。借助划痕愈合实验与Transwell实验评估细胞迁移与侵袭能力。结果 OSCC细胞中LncRNA SLC7A11-AS1表达上调(P<0.05);敲减LncRNA SLC7A11-AS1抑制了OSCC细胞的迁移与侵袭(均P<0.05);LncRNA SLC7A11-AS1正向调控YAP1,过表达YAP1部分抵消si-LncRNA SLC7A11-AS1对细胞迁移与侵袭的作用(均P<0.05);m6A相关蛋白METTL3可促进LncRNA SLC7A11-AS1在OSCC中的表达。结论 m6A修饰的LncRNA SLC7A11-AS1在OSCC中过表达,并且通过上调YAP1促进OSCC细胞的迁移与侵袭。

长链非编码RNA DDX11-AS1对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响及其机制

目的观察长链非编码RNA DEAD/DEAH盒解旋酶11反义RNA1(DDX11-AS1)对肝细胞癌(HCC)细胞增殖和侵袭能力的影响,并探讨可能机制。方法采用qRT-PCR法检测HCC细胞HepG2、Huh-7、SK-hep-1及正常肝细胞LO2中的DDX11-AS1,选择DDX11-AS1表达最高的HCC细胞进行后续实验。将HCC细胞分为对照组和实验组,分别转染NC siRNA和DDX11-AS1 siRNA,采用MTS法测算细胞增殖率,平板克隆实验测算克隆形成率,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白。将HCC细胞分为NC组、si-DDX11-AS1组和SC79组,NC组转染NC siRNA,si-DDX11-AS1组和SC79组转染DDX11-AS1 siRNA,SC79组细胞加入PI3K/AKT信号通路激活剂SC79,NC组和si-DDX11-AS1组加入DMSO,采用MTS法测算细胞增殖率,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果HepG2、Huh-7、SK-hep-1细胞中DDX11-AS1表达高于LO2细胞,其中HepG2细胞DDX11-AS1表达量最高(P均<0.05)。实验组细胞增殖率、克隆形成率、穿膜细胞数及pPI3K、pAKT蛋白表达均低于对照组(P均<0.05)。SC79组、si-DDX11-AS1组细胞增殖率和穿膜细胞数低于NC组,SC79组细胞增殖率和穿膜细胞数高于si-DDX11-AS1组(P均<0.05)。结论HCC细胞中DDX11-AS1表达上调;干扰DDX11-AS1表达可抑制HCC细胞的增殖和侵袭能力,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

lncRNA F11-AS1 在肿瘤中的研究进展

lncRNA 是一类长度超过 200 个核苷酸的非编码 RNA,通过竞争性结合 microRNA,成为抑制 microRNA 的“分子海绵”(ceRNA),从而参与肿瘤的进程。最新的研究发现,lncRNA F11-AS1 是一个重要的抑癌因子,在多种肿瘤中表达下调,参与肿瘤的增殖、侵袭、转移等生物学过程的调节,同时与肿瘤的预后密切相关,可能成为预测肿瘤预后的一个生物标志物。本文就 lncRNA F11-AS1 在肿瘤中的研究进展进行综述。

长链非编码RNA ABHD11-AS1通过调节miR-542-3p/MAP3K11对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA ABHD11-AS1(long non-coding RNA ABHD11-antisense RNA1,LncRNA ABHD11-AS1)通过调节miR-542-3p/MAP3K11对胃癌(gastric cancer,GC)细胞侵袭和迁移的影响。方法胃癌细胞BGC-823常规培养后依次分为si-NC组、si-LncRNA ABHD11-AS1组、si-LncRNA ABHD11-AS1+miR-NC inhibitor组、si-LncRNA ABHD11-AS1+miR-542-3p inhibitor组、si-LncRNA ABHD11-AS1+miR-542-3p inhibitor+si-con组和ABHD11-AS1+miR-542-3p inhibitor+si-MAP3K11组。预测并验证LncRNA ABHD11-AS1/miR-542-3p/MAP3K11之间的相互作用关系。qRT-PCR检测胃癌细胞中LncRNA ABHD11-AS1、miR-542-3p、MAP3K11 mRNA水平,Transwell法检测胃癌细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测胃癌细胞中MAP3K11、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结果LncRNA ABHD11-AS1和miR-542-3p、miR-542-3p和MAP3K11靶向关系被验证。与si-NC组[(184.09±17.32)和(87.64±7.54)]比较,si-LncRNA ABHD11-AS1胃癌细胞的迁移和侵袭能力明显降低[(68.35±6.21)和(28.23±3.05)(P均<0.05)];与si-LncRNA ABHD11-AS1+miR-NC inhibitor组[(75.39±7.08)和(31.26±3.15)]比较,si-LncRNA ABHD11-AS1+miR-542-3p inhibitor组胃癌细胞迁移和侵袭能力升高[(138.24±12.58)和(61.23±5.86)(P均<0.05)];与si-LncRNA ABHD11-AS1+miR-542-3p inhibitor+si-con组[(145.33±13.09)和(65.45±6.08)]比较,si-LncRNA ABHD11-AS1+miR-542-3p inhibitor+si-MAP3K11组胃癌细胞的迁移和侵袭能力明显降低[(108.36±9.87)和(145.33±13.09)(P均<0.05)]。结论下调LncRNA ABHD11-AS1调控miR-542-3p/MAP3K11轴可抑制胃癌细胞迁移和侵袭。

长链非编码RNA SATB2-AS1抑制肺腺癌进展的机制研究

目的长链非编码RNA(lncRNA)SATB2的反义转录物(SATB2-AS1)对肺腺癌细胞生物学功能的影响和机制研究。方法收集25例肺腺癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,检测SATB2-AS1表达水平。用lncRNA SATB2-AS1的过表达载体(pcDNA-SATB2-AS1)和shRNA或IGF2BP2的shRNA(sh-SATB2-AS1;sh-IGF2BP2)和/或SLC7A11的shRNA(sh-SLC7A11)转染肺腺癌细胞A549。RIP分析评估IGF2BP2蛋白分别与SATB2-AS1或SLC7A11 mRNA的结合;CCK-8和Transwell实验分别用于检测肺腺癌细胞的增殖和侵袭能力;RT-qPCR和Western blot分别检测基因和蛋白表达。结果与癌旁组织和人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B相比,SATB2-AS1在肺腺癌患者的肿瘤组织和肺腺癌细胞系中的表达显著下调(P<0.01)。过表达SATB2-AS1抑制A549细胞增殖和侵袭,沉默SATB2-AS1促进细胞增殖和侵袭(P<0.05)。过表达SATB2-AS1后A549细胞中的Fe2+浓度、活性氧(ROS)水平以及丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.01),还原性谷胱甘肽(GSH)含量及铁死亡关键蛋白SLC7A11、GPX4的表达显著升高(P<0.01)。SATB2-AS1通过与IGF2BP2蛋白结合显著促进IGF2BP2蛋白与SLC7A11 mRNA结合,降低SLC7A11 mRNA的稳定性(P<0.01)。沉默SLC7A11显著逆转了SATB2-AS1沉默对A549细胞的影响。结论lncRNA SATB2-AS1通过招募IGF2BP2蛋白破坏SLC7A11mRNA稳定性,诱导肺腺癌细胞铁死亡,抑制细胞增殖和侵袭,从而抑制肺腺癌进展。

ABHD11-AS1在肿瘤中表达及调控作用研究

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度>200 nt且不具备编码蛋白质能力的非编码RNA。大量研究表明lncRNA在恶性肿瘤发生发展中起着重要作用。ABHD11-AS1作为一种lncRNA在诸多人类肿瘤中呈现异常表达,并能够调控肿瘤增殖和侵袭、迁移等恶性生物学行为。全文对ABHD11-AS1在肿瘤中的表达及调控作用进行综述。