lncRNA ANCR调节骨质疏松大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制

目的探讨lncRNA ANCR调节骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制。方法将lncRNA ANCR siRNA慢病毒载体及慢病毒空载体分别转染至脂肪源性干细胞,分为siRNA组、空载体组、干细胞组。分别通过碱性磷酸酶染色观察ALP染色效果、Western blot法检测Wnt/β-catenin蛋白水平、茜素红染色实验检测成骨染色效果、免疫组化法检测Wnt/β-catenin信号阳性表达的差异性。结果与空载体组、干细胞组相比较,siRNA组细胞中ALP染色显著加深(P均<0.05),成骨染色更为显著(P均<0.05);与空载体组,干细胞组相比较,siRNA组细胞Wnt/β-catenin蛋白表达显著上升(P均<0.05),Wnt/β-catenin阳性数显著升高(P均<0.05);空载体组与干细胞组比较,细胞中Wnt/β-catenin蛋白、ALP表达水平、Wnt/β-catenin阳性数相近,无显著差异(P>0.05)。结论lncRNA ANCR的表达水平与骨质疏松大鼠体内脂肪源性干细胞的分化存在显著相关性,下调lncRNA ANCR能够促进脂肪源性干细胞向成骨细胞分化,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin的表达有关。

lncRNA ANCR调控miR-497-5p对胃癌细胞血管管腔形成及凋亡的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)ANCR调控miR-497-5p对胃癌细胞血管管腔形成、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法取MGC803胃癌细胞将其分为胃癌细胞(GC)组、胃癌细胞+lncRNA ANCR-NC(AN)组、胃癌细胞+lncRNA ANCR过表达质粒(AM)组、胃癌细胞+lncRNA ANCR siRNA(AI)组、胃癌细胞+miR-497-5p-NC(MN)组、胃癌细胞+miR-497-5p siRNA(MI)组、胃癌细胞+miR-497-5p mimics(MM)组、胃癌细胞+lncRNA ANCR siRNA+miR-497-5p mimics(IM)组,管腔形成实验观察细胞血管管腔形成,PI染色法检测细胞凋亡,免疫印迹法检测PI3K和AKT蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证lncRNA ANCR和miR-497-5p的相互作用。结果与AN组、MN组相比,AM组、MI组凋亡率明显降低(P<0.05),血管管腔形成数量、PI3K和AKT蛋白表达明显升高(P<0.05);与AM组、MI组相比,AI组、MM组凋亡率明显升高(P<0.05),血管管腔形成数量、PI3K和AKT蛋白表达明显降低(P<0.05);与AI组、MM组相比,IM组凋亡率明显升高(P<0.05),血管管腔形成数量、PI3K和AKT蛋白表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告结果显示,转染lncRNA ANCR后可显著降低miR-497-5p-3′-UTR-WT的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变基因无影响(P>0.05)。结论抑制lncRNA ANCR可有效抑制胃癌细胞血管管腔形成,促进细胞凋亡,并抑制PI3K和AKT信号通路表达,其作用机制可能与靶向激活miR-497-5p有关。

LncRNA-ANCR介导的组蛋白甲基化酶EZH2对结直肠癌侵袭与转移的调控

目的探讨lnc RNA-ANCR与组蛋白甲基转移酶EZH2的表达及其与结直肠癌细胞侵袭与转移的关系。方法培养结肠癌SW620细胞系,转染ANCR-siRNA至细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测ANCR和EZH2表达,Western blot检测EZH2蛋白表达水平,采用RNA pull-down和免疫共沉淀的方法检测ANCR与EZH2的相互作用关系,Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和转移能力。结果结肠癌SW620细胞中ANCR和EZH2的表达均显著高于正常结肠上皮细胞(P<0.05)。转染ANCR-siRNA的SW620细胞中ANCR的表达较转染阴性对照质粒的SW620细胞显著降低,且EZH2的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。RNA pull-down与免疫共沉淀的结果显示ANCR可与EZH2特异性结合。而Transwell实验和划痕实验显示转染ANCR-siRNA的SW620细胞的侵袭和迁移能力均显著低于转染阴性对照质粒的SW620细胞(P<0.05)。结论结直肠癌细胞中ANCR与EZH2的表达均上调,ANCR可能通过特异性结合EZH2调节结直肠癌细胞的侵袭和转移。

LncRNA ANCR在胃癌患者肿瘤组织中表达的临床意义及其生物学效应研究

目的探究LncRNA抗分化非编码RNA(anti-differetiation non-coding RNA,ANCR)在胃癌患者肿瘤组织中表达的临床意义及其对细胞的生物学效应。方法收集宁波医疗中心李惠利医院东部院区2016年9月至2018年6月胃癌组织及相应癌旁组织标本各72例,同时培养胃癌细胞HGC-27,慢病毒转染ANCR cDNA全长载体于HGC-27细胞中作为实验组,并转染空白载体作为对照组;实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测组织或细胞中ANCR、转录因子Oct4及Sox2 mRNA的表达水平,免疫印迹实验(western blot)检测细胞中Oct4及Sox2蛋白表达水平,CCK-8实验检测两组细胞增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞转移能力。结果胃癌组织及癌旁组织中ANCR表达分别为0.013(0.006,0.025)及0.041(0.011,0.136),胃癌组织中ANCR表达显著高于癌旁组织(P<0.01),且高表达ANCR的患者TNM分期更高及细胞分化程度更低(χ^(2)=7.414、8.236,P<0.05)。对照组及实验组细胞ANCR mRNA表达分别为(1.000±0.064)、(6.250±0.889),Oct4 mRNA表达分别为(1.000±0.208)、(2.815±0.349),Sox2 mRNA表达分别为(1.000±0.173)、(2.526±0.390),Oct4蛋白表达分别为(1.000±0.148)、(3.396±0.105),Sox2蛋白表达分别为(1.000±0.119)、(2.916±0.130),实验组细胞ANCR、Oct4、Sox2 mRNA表达显著高于对照组(P<0.01),实验组细胞Oct4、Sox2蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01)。对照组及实验组细胞72h的相对增殖能力分别为(7.164±0.426)、(9.627±0.605);96h的相对增殖能力分别为(13.750±1.089)、(19.166±1.649),实验组细胞72 h、96 h的增殖能力显著高于对照组(P<0.01)。对照组及实验组每视野平均侵袭细胞数分别为(17.26±5.48)个、(39.43±5.21)个;迁移细胞数分别为(30.49±7.74)、(62.20±7.51)个,实验组迁移及侵袭细胞数显著多于对照组(P<0.01)。结论LncRNA ANCR在胃癌患者肿瘤组织中表达显著增高,且与患者病情进展及细胞恶性程度密切相关,体外可促进胃癌干细胞标志物的表达,并增强细胞增殖及转移能力。

LncRNA-ANCR对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的:探讨骨肉瘤细胞中LncRNA-ANCR的表达情况以及LncRNA-ANCR对骨肉瘤细胞生物学的影响。方法:采用荧光定量PCR检测实验各组细胞中LncRNA-ANCR的表达水平,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖率,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Transwell小室法检测细胞的侵袭、迁移能力。结果:MG-63和UMR-106骨肉瘤细胞LncRNA-ANCR的表达水平最高,选择其进行后续实验研究;与WT组相比较,Mock组、NC组细胞中LncRNA-ANCR的表达水平、转染后细胞的增殖率、细胞凋亡率、侵袭细胞和迁移数均无明显变化(P>0.05);与WT组相比较,siRNA组细胞中LncRNA-ANCR的表达水平、转染后增殖率、细胞的侵袭和迁移数显著下降(P<0.05),细胞的凋亡率明显上升(P<0.05)。结论:LncRNA-ANCR可促进MG-63和UMR-106骨肉瘤细胞的增殖、侵袭以及转移,抑制细胞的凋亡。

LncRNA-ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖迁移的作用机制

目的探讨LncRNA-ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法选取人胃癌细胞株,随机分为胃癌组(GC组)、ANCR-siRNA组(siRNA组)、LncRNA-ANCR组(ANCR组)3组,同时选取正常胃粘膜上皮细胞设为正常胃细胞组。GC组:单纯胃癌细胞株;siRNA组:将ANCR-siRNA转染到胃癌细胞中;ANCR组:将LncRNA-ANCR转染到胃癌细胞中。通过TUNEL法、Transwell、cck-8法、Westernblot法、RT-PCR法分析3组胃癌细胞增殖情况,PI3K、AKT蛋白表达量,细胞凋亡情况,细胞侵袭能力,PI3K、AKTmRNA的表达量的差异性来探究LncRNA-ANCR介导PI3K及AKT蛋白对人胃癌细胞增殖迁移的作用机制。结果GC组LncRNA-ANCR蛋白含量最高,正常胃细胞组LncRNA-ANCR蛋白含量最低(P<0.05);ANCR组胃癌细胞侵袭能力强,显微镜下细胞数量多,siRNA组胃癌细胞显微镜下细胞数量少,侵袭能力弱(P<0.05),GC组与siRNA组相比较胃癌细胞数量明显增多,整体侵袭能力明显增强(P<0.05);GC组和siRNA组、ANCR组OD值相比较,差异均有统计学意义(P<0.05);ANCR组胃癌细胞的增殖情况明显高于GC组,而GC组明显高于siRNA组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经TUNEL染色,siRNA组胃癌细胞凋亡数量最多,ANCR组胃癌细胞凋亡较少(P<0.05),ANCR组和GC组与siRNA组相比较凋亡率明显下降(P<0.05)。蛋白免疫印迹法分析显示,siRNA组的PI3K、AKT蛋白含量及表达量最低,ANCR组的PI3K、AKT蛋白含量及表达量最高,3组相比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA-ANCR能激活PI3K及AKT蛋白的表达,升高细胞的侵袭和增殖能力,促进胃癌细胞生长,加快病情的发展。

长链非编码RNA DEANR1等在肺癌中的表达

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DEANR1、INXS、ANCR、FENDRR等在肺癌中的表达。方法选取2018年1~6月昆明医科大学第三附属医院收治的54例肺癌患者,其中鳞癌、腺癌、肺小细胞癌分别为28、22、4例。经手术获取癌组织、癌旁正常组织、肺癌淋巴结转移组织,提取总RNA,并采用SYBR Green实时荧光定量PCR检测基因的RNA表达量。结果 DEANR1、INXS、ANCR在癌组织中的相对表达量均高于癌旁正常组织(P <0.05)。淋巴结组织中ANCR、INXS的相对表达量与ki-67呈正相关(r=0.757,P=0.049;r=0.802,P=0.030)。结论 DEANR1、INXS、ANCR在癌组织中的相对表达量均升高,可能在肺癌的发生发展中起到促进作用,ANCR、INXS在淋巴结中的表达与ki-67呈正相关,可能与肺癌淋巴结转移及不良预后有关。