LncRNA ASB16-AS1调控前列腺癌细胞增殖转移的分子机制

目的探讨长链非编码RNA ASB16-AS1(LncRNA ASB16-AS1)对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法体外培养前列腺癌细胞株LNCaP,分别将si-NC、si-ASB16-AS1、miR-NC、miR-760 mimics、si-ASB16-AS1+anti-miR-NC、si-ASB16-AS1+anti-miR-760转染至LNCaP细胞。采用MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,双荧光素酶报告实验验证ASB16-AS1与miR-760的靶向关系,Western blotting法检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、p21蛋白水平。结果与转染si-NC、miR-NC相比,转染si-ASB16-AS1、miR-760 mimics后细胞增殖活力降低(P均<0.05),迁移、侵袭细胞数减少(P均<0.05)。双荧光素酶报告实验证实ASB16-AS1能够靶向结合miR-760。与si-ASB16-AS1+anti-miR-NC组相比,si-ASB16-AS1+anti-miR-760组细胞增殖活力升高(P<0.05),迁移、侵袭细胞数增多(P均<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P均<0.05),p21蛋白水平降低(P<0.05)。结论LncRNA ASB16-AS1通过靶向干扰miR-760表达从而促进前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。

lncRNA ASB16-AS1在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞增殖的影响

目的:探讨lncRNAASB16-AS1在结直肠癌(CRC)中的表达及其对CRC细胞增殖的影响。方法:采用逆转录定量PCR(qRT-PCR)检测26对CRC及其配对癌旁组织、4株CRC细胞(HT-29、SW-480、SW-620及LOVO)中lncRNAASB16-AS1的表达,选择2株lncRNAASB16-AS1表达最高的CRC转染ASB16-AS1干扰片段作为干扰组,实验设置对照组(不转染)及阴性对照组(转染阴性对照干扰片段),采用CCK-8法检测转染0、24、48、72及96h时细胞的增殖情况,qRT-PCR法检测转染48h时细胞miR-185-5p表达;将含有ASB16-AS1野生型序列或突变序列的质粒与miR-185-5pmimic或阴性对照mimic共转染至293T细胞,转染24h后采用双荧光素酶法检测各组细胞的荧光强度,观察lncRNAASB16-AS1对miR-185-5的调控作用。结果:qRT-PCR结果显示,lncRNAASB16-AS1在CRC组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),CRC细胞HT-29及LOVO中lncRNAASB16-AS1的表达水平显著高于SW-480及SW-620(P<0.01);与阴性对照组比较,转染ASB16-AS1干扰片段的HT-29和LOVO细胞中lncRNAASB16-AS1的表达水平显著降低(P<0.01);转染48h开始,干扰组HT-29和LOVO细胞的增殖水平显著低于阴性对照组(P<0.05);转染48h时,下调ASB16-AS1后细胞中miR-185-5p表达水平显著升高(P<0.05);双荧光素酶结果显示,野生型ASB16-AS1和miR-185-5pmimic共转染,显著降低293T细胞中双荧光素酶的活性(P<0.05)。结论:CRC的发生发展的机制与lncRNAASB16-AS1上调有关。

LncRNA ASB16-AS1促进胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移

目的探讨lncRNA ASB16-AS1在不同WHO分级胶质瘤标本中的表达量变化,以及在胶质瘤细胞系LN382U87MG中验证lncRNA ASB16-AS1对增殖、迁移、侵袭功能的影响。方法使用qRT-PCR技术检测lncRNA ASB16-AS1在临床肿瘤样本中表达量,分析lncRNA ASB16-AS1是否存在差异表达以及与肿瘤分期分级有无相关性。在LN382、U87MG细胞系上使用siRNA抑制lncRNA ASB16-AS1的表达,检验NC组(转染negative siRNA)和silence组(转染lncRNA ASB16-AS1siRNA)在实时细胞分析(Real-time cell analysis,RTCA)增殖实验、划痕试验和Transwell实验上有无肿瘤功能改变。结果肿瘤组织分期分级越高lncRNA ASB16-AS1表达量越高。在两个细胞系上进行的划痕试验结果显示,silence组愈合速度慢于NC组(P<0.01)。RTCA增殖曲线显示silence组增殖速度慢于NC组(P<0.01)。Transwell侵袭、迁移试验接种12h后穿透到底面的细胞silence组少于NC组(P <0.01)。结论肿瘤组织分期分级越高lncRNA ASB16-AS1表达量越高。lncRNA ASB16-AS1在胶质瘤中起到促进肿瘤增殖、侵袭、迁移作用。

LncRNA ASB16-AS1调节miR-185-5p/TRAM2轴对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

该文旨在探讨长链非编码RNA ASB16-AS1(LncRNA ASB16-AS1)靶向微小RNA-185-5p(miR-185-5p)/易位相关膜蛋白2(TRAM2)轴对口腔鳞状细胞癌(又称口腔鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。体外培养人口腔鳞癌细胞SCC-9,将其分为对照组、sh-NC组、sh-ASB16-AS1组、sh-ASB16-AS1+inhibitor NC组、sh-ASB16-AS1+miR-185-5p inhibitor组。用qRT-PCR法检测各组细胞LncRNA ASB16-AS1、miR-185-5p、TRAM2 mRNA表达水平;用CCK-8试剂盒检测SCC-9细胞增殖情况;用流式细胞术检测SCC-9细胞凋亡情况;用划痕实验检测SCC-9细胞迁移情况;用Transwell法检测SCC-9细胞侵袭情况;Western blot检测TRAM2蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证LncRNA ASB16-AS1与miR-185-5p及miR-185-5p与TRAM2之间的靶向关系。与对照组和sh-NC组相比,sh-ASB16-AS1组中Lnc RNA ASB16-AS1、TRAM2 mRNA、TRAM2蛋白表达水平以及D值、划痕愈合率、细胞侵袭数降低,mi R-185-5p水平、细胞凋亡率升高(P<0.05);与sh-ASB16-AS1+inhibitor NC组相比,sh-ASB16-AS1+miR-185-5p inhibitor组中mi R-185-5p水平、细胞凋亡率降低,TRAM2 m RNA表达水平、TRAM2蛋白表达水平、D值、划痕愈合率、细胞侵袭数升高(P<0.05),而Lnc RNA ASB16-AS1水平无显著变化(P>0.05);生物学信息网站预测显示mi R-185-5p与Lnc RNA ASB16-AS1和TRAM2均存在靶向结合位点,且双荧光素酶报告基因实验证实LncRNA ASB16-AS1与miR-185-5p,以及miR-185-5p与TRAM2之间均存在靶向关系(P<0.05)。在口腔鳞癌细胞中Lnc RNA ASB16-AS1表达上调,抑制Lnc RNA ASB16-AS1的表达可靶向上调mi R-185-5p的表达,抑制TRAM2的表达,进而促进口腔鳞癌细胞凋亡,抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭。

LncRNA SLC16A1-AS1靶向调控miR-182对乳腺癌BT549细胞增殖能力的影响

目的探讨LncRNA SLC16A1-AS1对miR-182的靶向调控作用及对乳腺癌BT549细胞增殖能力的影响。方法使用GEPIA2工具分析TCGA数据库中LncRNA SLC16A1-AS1在三阴型乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的差异性表达,应用Kaplan-MeieRPlotter数据库进行生存分析。利用RegRNA2和miRanda数据库预测LncRNA SLC16A1-AS1的潜在靶标miRNAs。用qRT-PCR检测LncRNA SLC16A1-AS1在TNBC组织及细胞系(BT549、BT20、MDA-MB-231及MDA-MB-468)中的表达。利用双荧光素酶活性测定及RNA免疫沉淀实验验证LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182的结合力。用CCK-8及集落形成实验检测不同处理组BT549细胞增殖能力的变化。结果生物信息学分析结果显示,TNBC组织中LncRNA SLC16A1-AS1的表达水平显著低于正常组织(P<0.001),与预后良好相关(P<0.001),LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182之间存在结合位点。LncRNA SLC16A1-AS1在63例TNBC组织中的表达水平显著低于瘤旁组织(7.94%vs 63.49%,P<0.001),在TNBC细胞系中的表达水平亦显著低于正常乳腺上皮细胞系(P<0.01)。在BT549细胞中过表达miR-182可显著降低LncRNA SLC16A1-AS1-WT载体的荧光酶素活性,RNA免疫沉淀实验显示,AGO2同时富集LncRNA SLC16A1-AS1及miR-182(P<0.01)。与对照组相比,过表达LncRNA SLC16A1-AS1显著降低BT549细胞的增殖活性并减少集落形成数量,共表达LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182可恢复BT549细胞的增殖能力(P<0.01)。结论LncRNA SLC16A1-AS1在TNBC中低表达,且通过靶向调控miR-182在体外抑制TNBC细胞的增殖能力,LncRNA SLC16A1-AS1/miR-182轴有望成为TNBC治疗的潜在靶点。

长链非编码RNA ASB16-AS1调控miR-670-3p/ATXN7L3轴影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

背景多种长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNAs)在胃癌(gastric cancer,GC)进展中被证实发挥抑癌或促癌作用.但lncRNAs数量众多,仍有多种lncRNAs在GC进展中的作用并不明确.因此,筛选具有影响GC细胞增殖、迁移和侵袭的lncRNAs对GC防治十分必要.目的探讨LncRNA ASB16-AS1调控miR-670-3p/ATXN7L3轴对GC细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RTqPCR)和western blot检测人胃黏膜细胞GES-1、GC细胞HGC-27、AGS、NUGC-4中ASB16-AS1、miR-670-3p和ATXN7L3的表达水平.将HGC-27细胞分为si-NC、si-ASB16-AS1、miR-NC、miR-670-3p、si-ATXN7L3、si-ASB16-AS1+anti-miR-NC、si-ASB16-AS1+anti-miR-670-3p、si-ASB16-AS1+pcDNA-NC、si-ASB16-AS1+pcDNA-ATXN7L3组.采用细胞计数试剂盒、transwell实验分别测定细胞活力、迁移侵袭能力;双荧光素酶报告实验、RT-qPCR、western blot确定ASB16-AS1与miR-670-3p、miR-670-3p与ATXN7L3之间的相互作用.结果GC细胞中ASB16-AS1、ATXN7L3呈高表达,miR-670-3p呈低表达(P<0.05).抑制ASB16-AS1表达,或过表达miR-670-3p,或抑制ATXN7L3表达后,HGC-27细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著降低(P<0.05).ASB16-AS1靶向负调控miR-670-3p表达.miR-670-3p靶向负调控ATXN7L3表达.抑制miR-670-3p表达部分逆转抑制ASB16-AS1对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05).过表达ATXN7L3部分逆转抑制ASB16-AS1对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05).结论抑制ASB16-AS1通过调控miR-670-3p/ATXN7L3轴抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭.

lncRNA DLX6-AS1通过靶向miR-16-5p/NUCKS1调控皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖、迁移和侵袭

目的研究长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1(lncRNA DLX6-AS1)对皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖、迁移和侵袭的影响及潜在机制。方法以双荧光素酶报告系统实验验证lncRNA DLX6-AS1与miR-16-5p、miR-16-5p与核酪蛋白激酶和细胞周期蛋白依赖性激酶底物1(NUCKS1)mRNA的靶向结合。通过单独或联合转染lncRNA DLX6-AS1抑制物(si-DLX6-AS1)、miR-16-5p抑制物(anti-miR-16-5p)、NUCKS1抑制物(si-NUCKS1)和相应对照(DLX6-AS1-NC、anti-miR-NC、NUCKS1-NC)调控A431细胞目的基因的表达,采用qRT-PCR检测A431细胞lncRNA DLX6-AS1、miR-16-5p、NUCKS1 mRNA的表达;Western印迹检测NUCKS1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)抗体、基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP9蛋白水平;CCK8实验检测细胞存活率;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。两组间比较采用独立样本t检验。结果双荧光素酶报告系统实验显示,lncRNA DLX6-AS1靶向结合miR-16-5p,miR-16-5p靶向结合NUCKS1。si-DLX6-AS1组A431细胞miR-16-5p表达水平(3.01±0.31)高于DLX6-AS1-NC组(1.02±0.10,t=18.33,P<0.001);NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于DLX6-AS1-NC组(均P<0.05),细胞存活率、迁移和侵袭细胞数亦低于DLX6-AS1-NC组(均P<0.05)。si-NUCKS1组A431细胞NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于NUCKS1-NC组(均P<0.05),细胞存活率、迁移和侵袭细胞数亦低于NUCKS1-NC组(均P<0.05)。低表达lncRNA DLX6-AS1后,anti-miR-16-5p组A431细胞miR-16-5p表达(0.34±0.04)低于anti-miR-NC组(1.00±0.12,t=15.65,P<0.05),Cyclin D1、MMP2和MMP9相对表达水平均高于anti-miR-NC组(均P<0.05),细胞存活率、迁移和侵袭细胞数均高于anti-miR-NC组(均P<0.05)。低表达lncRNA DLX6-AS1、敲减miR-16-5p后,si-NUCKS1组A431细胞NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于NUCKS1-NC组(P<0.05),细胞存活率、迁移和侵袭细胞数均低于NUCKS1-NC组(P<0.05)。结论lncRNA DLX6-AS1可通过靶向miR-16-5p/NUCKS1调控A431细胞增殖、迁移和侵袭,lncRNA DLX6-AS1可能是治疗皮肤鳞状细胞癌的潜在分子靶点。

长链非编码RNA ASB16-AS1靶向miR-1258调控食管癌细胞增殖迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA ASB16-AS1靶向miR-1258对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集2016年5月至2017年7月于新乡市中心医院接受手术治疗的40例食管癌患者的食管癌及癌旁正常组织(距离癌组织>3 cm)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测食管癌及癌旁正常组织中ASB16-AS1和miR-1258基因的表达水平。采用脂质体法将si-NC(si-NC组)、si-ASB16-AS1(si-ASB16-AS1组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-1258模拟物(miR-1258组)、si-ASB16-AS1+anti-miR-NC(si-ASB16-AS1+anti-miR-NC组)、si-ASB16-AS1+anti-miR-1258(si-ASB16-AS1+anti-miR-1258组)分别转染至Eca109细胞。采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告实验和qRT-PCR检测ASB16-AS1与miR-1258之间的相互作用。结果食管癌组织中ASB16-AS1、miR-1258的表达水平分别为2.95±0.27和0.62±0.06,与癌旁正常组织(分别为1.00±0.06和1.00±0.07)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养48、72 h后,si-NC组细胞吸光度(A)值分别为0.81±0.07和1.15±0.11,均高于si-ASB16-AS1组[分别为0.46±0.04和0.62±0.06,均P<0.05]。si-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(86.32±8.24)个和(71.29±7.15)个,均高于si-ASB16-AS1组[分别为(43.22±4.31)个和(32.36±3.58)个,均P<0.05]。培养48、72 h后,miR-NC组细胞的A值分别为0.84±0.08和1.18±0.12,均高于miR-1258组(分别为0.55±0.05和0.71±0.07,均P<0.05);miR-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(83.15±8.31)个和(75.33±7.51)个,均高于miR-1258组[分别为(49.58±4.23)个和(38.42±3.84)个,均P<0.05];si-ASB16-AS1+anti-miR-NC组细胞的A值分别为0.45±0.04和0.61±0.06,均低于si-ASB16-AS1+anti-miR-1258组(分别为0.72±0.07和0.98±0.08,均P<0.05);si-ASB16-AS1+anti-miR-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(44.36±4.41)个和(31.69±3.85)个,均低于si-ASB16-AS1+anti-miR-1258组[分别为(72.65±7.27)个和(61.22±6.14)个,均P<0.05]。ASB16-AS1靶向负调控miR-1258的表达。结论食管癌中ASB16-AS1呈高表达,ASB16-AS1通过靶向miR-1258可促进食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

长链非编码RNA ASB16-AS1与垂体腺瘤患者预后的关系

目的 探讨垂体腺瘤患者肿瘤组织中长链非编码RNA(lncRNA)ASB16-AS1表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法 选取2015年8月-2017年8月于河南大学附属郑州颐和医院住院治疗的114例垂体腺瘤患者肿瘤组织作为垂体腺瘤组,选取各垂体腺瘤患者正常垂体组织作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测垂体腺瘤患者肿瘤组织及正常垂体组织lncRNA ASB16-AS1表达水平;分析垂体腺瘤患者肿瘤组织lncRNA ASB16-AS1表达水平与预后的关系以及影响垂体腺瘤患者预后的因素。结果 垂体腺瘤组lncRNA ASB16-AS1表达水平(2.39±0.41)高于对照组(1.01±0.24),差异有统计学意义(t=27.998,P<0.05)。有功能肿瘤、肿瘤最大径>2 cm、有侵袭性、病理分级Ⅲ~Ⅳ级垂体腺瘤患者lncRNA ASB16-AS1高表达比例高于无功能肿瘤、肿瘤最大径≤2 cm、无侵袭性、病理分级Ⅰ~Ⅱ级患者,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA ASB16-AS1高表达组垂体腺瘤患者3年生存率(44.83%)低于lncRNA ASB16-AS1低表达组(85.71%),差异有统计学意义(χ^(2)=20.912,P<0.05)。lncRNA ASB16-AS1、病理分级是影响垂体腺瘤患者预后死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论 垂体腺瘤患者肿瘤组织中lncRNA ASB16-AS1表达水平升高,lncRNA ASB16-AS1在垂体腺瘤的发生、发展及不良预后中可能起促进作用。