lncRNA C5orf66-AS1促进宫颈癌细胞增殖和迁移及其机制探讨

目的:探讨lncRNA C5orf66-AS1对宫颈癌细胞增殖及迁移的影响及其作用机制。方法:通过TCGA筛选宫颈癌和癌旁组织中差异表达的lncRNA并采用qRT-PCR对候选lncRNA进行验证。采用qRT-PCR检测miR-149-5p和RING1在宫颈癌组织和细胞中的表达水平。使用CCK-8、克隆形成、Transwell和流式细胞术检测C5orf66-AS1对细胞增殖、迁移和凋亡的影响。通过双荧光素酶测定和Western blot评估C5orf66-AS1对miR-149-5p和RING1表达的调控作用。进一步构建裸鼠成瘤模型通过肿瘤重量和体积验证C5orf66-AS1对肿瘤生长的影响。结果:lncRNA C5orf66-AS1在宫颈癌组织和细胞中显著上调(P<0.05)。与NC组比较,C5orf66-AS1组能够促进宫颈癌细胞增殖和迁移(P<0.05)。RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)和双荧光素酶报告实验结果显示C5orf66-AS1与miR-149-5p靶向结合。过表达miR-149-5p和RING1能够逆转C5orf66-AS1介导的宫颈癌细胞增殖和迁移能力。最后裸鼠体内实验显示,与NC组比较,C5orf66-AS1组的肿瘤显著生长(P<0.05)。结论:lncRNA C5orf66-AS1作为一种竞争性内源性RNA,通过吸附miR-149-5p调节RING1对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。

lncRNA C5orf66-AS1通过调节CYC1表达对胃癌细胞增殖和转移的影响

目的:探讨长链非编码RNA C5orf66反义链1(lncRNA C5orf66-AS1)对胃癌细胞增殖和转移的影响。方法:以2019年6月—2021年6月收集的63例胃癌患者的癌组织与癌旁组织、人胃黏膜细胞GES-1及胃癌细胞BGC823、SGC7901、AGS、MKN28为研究对象,分别检测组织和细胞中C5orf66-AS1和细胞色素c1(CYC1z)蛋白表达情况。将AGS细胞分为7组,分别检测各组细胞增殖、迁移、侵袭以及细胞中C5orf66-AS1表达水平和CYC1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达情况。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中C5orf66-AS1表达降低,CYC1蛋白表达升高(P<0.05)。与人胃黏膜细胞GES-1比较,胃癌细胞BGC823、SGC7901、AGS、MKN28中C5orf66-AS1表达降低,CYC1蛋白表达升高(P<0.05),且AGS细胞中C5orf66-AS1表达最低,CYC1蛋白表达水平最高。沉默C5orf66-AS1促进AGS细胞增殖、迁移、侵袭及CYC1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达;过表达C5orf66-AS1抑制AGS细胞增殖、迁移、侵袭及CYC1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达;过表达CYC1可逆转C5orf66-AS1对AGS细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:过表达C5orf66-AS1可能通过下调CYC1抑制AGS细胞增殖、迁移和侵袭。

长链非编码RNA C5orf66-AS1通过靶向miR-637对胃癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA C5orf66-AS1通过靶向miR-637对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡的影响,为GC临床治疗提供依据。方法:收集32例GC病人的癌组织及其癌旁组织并体外培养人胃腺癌细胞系MKN28、MKN451、BGC823、MGC803、AGS及正常胃上皮细胞系GES-1,qRT-PCR实验检测其C5orf66-AS1和miR-637表达。将对数生长期的AGS细胞利用脂质体转染试剂进行转染并分为对照组、GV144组、GV144-C5orf66-AS1组、miR-NC组、miR-637 mimics组、GV144-C5orf66-AS1+miR-NC组、GV144-C5orf66-AS1+miR-637 mimics组。CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western blotting实验测定细胞周期蛋白CyclinD1、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及其同源蛋白Bax相对表达水平;RNA免疫共沉淀实验验证C5orf66-AS1和miR-637的作用关系。结果:与癌旁组织或正常胃上皮细胞系GES-1相比,C5orf66-AS1和miR-637在GC组织和细胞系MKN28、MKN451、BGC823、MGC803、AGS中的表达水平均降低(P<0.05),选择C5orf66-AS1表达水平最低的AGS细胞进行转染实验。转染GV144-C5orf66-AS1后,AGS细胞中C5orf66-AS1、miR-637表达水平、凋亡率及Bax蛋白表达升高,细胞活性(48、72、96 h)及CyclinD1、Bcl-2蛋白降低(P<0.05)。C5orf66-AS1和miR-637存在相互作用关系。miR-637过表达可使C5orf66-AS1过表达对AGS细胞增殖的抑制作用和凋亡的促进作用更明显(P<0.05)。结论:C5orf66-AS1和miR-637在GC组织和细胞中低表达,过表达C5orf66-AS1和上调miR-637,可协同抑制GC细胞的增殖,促进凋亡。

C5orf66-AS1对直肠癌细胞增殖、侵袭及Wnt/β-catenin通路的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)C5orf66-AS1基因对直肠癌细胞增殖、侵袭及Wnt/β-catenin通路的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测C5orf66-AS1在人正常直肠粘膜上皮细胞及直肠癌细胞株SW837、SW1463、HR-8348、COLO741的表达水平。设计并合成C5orf66-AS1的siRNA和阴性对照si-NC,实验分组为:NC组、si-NC组、si-C5orf66-AS1-1组、si-C5orf66-AS1-2组、si-C5orf66-AS1-3组,qRT-PCR分析C5orf66-AS1的沉默效率;CCK-8、Annexin V-FITC/PI双染及Transwell小室检测沉默C5orf66-AS1对直肠癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响;Western blot检测沉默C5orf66-AS1对细胞中β-catenin、PCNA、Caspase-3和Vimentin蛋白表达的影响。结果C5orf66-AS1在直肠癌细胞株SW837、SW1463、HR-8348、COLO741的表达水平显著高于人正常直肠粘膜上皮细胞,且在SW837细胞表达水平最高(P<0.05)。si-C5orf66-AS1-1组、si-C5orf66-AS1-2组、si-C5orf66-AS1-3组C5orf66-AS1表达水平显著低于NC组和si-NC组(P<0.05),且si-C5orf66-AS1-3组C5orf66-AS1的沉默效率最高。沉默C5orf66-AS1可显著下调SW837细胞增殖活性、侵袭能力以及β-catenin、PCNA和Vimentin蛋白表达,可显著上调SW837细胞凋亡率及Caspase-3的表达(P<0.05)。结论C5orf66-AS1在直肠癌细胞中高表达,下调C5orf66-AS1的表达可能通过抑制Wnt/β-catenin通路的激活进而抑制直肠癌细胞的增殖、侵袭,并促进其凋亡。