lncRNA CASC19靶向miR-490-3p调控骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的探讨lncRNA CASC19对骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及潜在的作用机制。方法实验设置si-con组、si-CASC19组、pcDNA组、pcDNA-CASC19组、miR-con组、miR-490-3p组、si-CASC19+anti-miR-con组、si-CASC19+anti-miR-490-3p组;qRT-PCR检测miR-490-3p和CASC19的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果骨肉瘤细胞MG63、U2-OS、OS187中miR-490-3p低表达,CASC19高表达(P<0.05);过表达miR-490-3p或干扰CASC19表达可抑制骨肉瘤细胞MG63增殖、迁移和侵袭。CASC19靶向调控miR-490-3p的表达,抑制miR-490-3p表达能逆转干扰CASC19对骨肉瘤细胞MG63增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论lncRNA CASC19可抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控miR-490-3p有关,将可为骨肉瘤的预防和治疗提供新靶点。

lncRNA CASC19通过miR-152-3p上调HMGA2影响骨肉瘤发生发展的机制研究

目的探讨长链非编码RNA癌症易感基因19(lncRNA CASC19)通过miR-152-3p/高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对骨肉瘤发生发展的影响。方法实验设置si-NC组、si-CASC19组、pcDNA-NC组、pcDNA-CASC19组、miR-NC组、miR-152-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-152-3p组、si-CASC19+anti-miR-NC组、si-CASC19+anti-miR-152-3p组、si-CASC19+anti-miR-152-3p+si-NC组、si-CASC19+anti-miR-152-3p+si-HMGA2组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA CASC19、miR-152-3p、HMGA2 mRNA表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测HMGA2、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证CASC19和miR-152-3p以及miR-152-3p和HMGA2的靶向关系。结果骨肉瘤细胞Saos2、U2OS、HOS中lncRNA CASC19高表达,miR-152-3p低表达,HMGA2高表达(P<0.05)。相较于si-NC组,si-CASC19组骨肉瘤细胞Saos2中lncRNA CASC19表达水平降低,HMGA2表达水平降低,CyclinD1表达水平降低,Cleaved-caspase-3表达水平升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高差异均有统计学意义(P<0.05)。相较于miR-NC组,miR-152-3p组骨肉瘤细胞Saos2中miR-152-3p表达水平升高,HMGA2表达水平降低,CyclinD1表达水平降低,Cleaved-caspase-3表达水平升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高差异均有统计学意义(P<0.05)。通过Starbase软件预测显示CASC19可直接靶向结合miR-152-3p,miR-152-3p可直接靶向结合HMGA2。双荧光素酶报告基因验证结果显示,共转染miR-152-3p和野生型CASC19和HMGA2的载体时,荧光素酶活性显著下降(P<0.05),而共转染miR-152-3p和靶向突变的CASC19和HMGA2的载体时,miR-152-3p对荧光素酶活性的抑制作用丧失。抑制CASC19表达后miR-152-3p表达水平升高(P<0.05),过表达CASC19后miR-152-3p表达水平下降(P<0.05);过表达miR-152-3p,HMGA2表达水平下降(P<0.05),抑制miR-152-3p表达,HMGA2表达水平升高(P<0.05)。相较于si-CASC19+anti-miR-NC组,si-CASC19+anti-miR-152-3p组Saos2细胞中miR-152-3p表达水平降低,CyclinD1表达水平升高,Cleaved-caspase-3表达水平降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低差异均有统计学意义(P<0.05)。与si-CASC19+anti-miR-152-3p+si-NC组相比,si-CASC19+anti-miR-152-3p+si-HMGA2组HMGA2表达水平降低,CyclinD1表达水平降低,Cleaved-caspase-3表达水平升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制lncRNA CASC19通过上调miR-152-3p进而下调HMGA2的表达抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。