LncRNA DDX11-AS1通过靶向miR-497-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究

背景:LncRNA在胃癌中表达上调或下调,其在胃癌发生、发展中的作用机制尚未完全阐明。目的:探讨LncRNA DDX11-AS1通过靶向miR-497-5p表达来调控胃癌细胞增殖、迁移、凋亡的机制。方法:采用qRT-PCR检测胃癌组织和细胞株中DDX11-AS1和miR-497-5p的表达,Pearson法分析胃癌组织中DDX11-AS1与miR-497-5p的相关性。将胃癌HGC-27细胞随机分为NC组、si-con组、si-DDX11-AS1组、miR-con组、miR-497-5p组、si-DDX11-AS1+anti-miR-con组、si-DDX11-AS1+anti-miR-497-5p组。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;双萤光素酶报告系统验证DDX11-AS1与miR-497-5p的靶向调节关系;蛋白质印迹法检测cyclin D1、cleaved caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:胃癌组织和细胞株中DDX11-AS1表达显著升高(P<0.05),而miR-497-5p表达显著降低(P<0.05),DDX11-AS1与miR-497-5p呈负相关(r=-0.754,P<0.05)。干扰DDX11-AS1表达或上调miR-497-5p表达可显著抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05),cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达显著降低(P<0.05),cleaved caspase-3表达显著升高(P<0.05)。双萤光素酶报告实验证明DDX11-AS1可负向调控miR-497-5p的表达和活性。抑制miR-497-5p表达可逆转干扰DDX11-AS1表达对胃癌细胞生物学行为的影响。结论:干扰LncRNA DDX11-AS1表达能通过靶向结合并上调miR-497-5p的表达而抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。

膀胱癌组织中LncRNA DDX11-AS1与LAMB3表达及临床意义

目的研究膀胱癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)DDX11-AS1及层黏连蛋白亚基B3(LAMB3)的表达,探讨其临床意义。方法回顾性分析我院2015年2月—2016年2月收治的84例膀胱癌患者的临床资料。检测所有患者的癌组织和癌旁组织中LncRNA DDX11-AS1、LAMB3 mRNA及LAMB3蛋白表达情况。分析癌组织中LncRNA DDX11-AS1与LAMB3表达的相关性及LncRNA DDX11-AS1和LAMB3表达与临床病理特点的关系。分析癌组织中不同LncRNA DDX11-AS1、LAMB3表达与患者生存预后的差异。结果与癌旁组织相比,膀胱癌组织中LncRNA DDX11-AS1及LAMB3的相对表达量明显增高(P<0.05)。与癌旁组织相比,膀胱癌组织中LAMB3表达阳性率明显增高(P<0.05)。癌组织中LncRNA DDX11-AS1与LAMB3表达呈显著正相关(r=0.564,P<0.01)。癌组织中LncRNA DDX11-AS1和LAMB3的表达与膀胱癌的肿瘤TNM分期及是否合并淋巴结转移相关(P<0.05)。LncRNA DDX11-AS1、LAMB3高表达的膀胱癌患者5年总体生存率显著低于低表达者(P<0.05)。结论膀胱癌组织中LncRNA DDX11-AS1及LAMB3表达表达上调,癌组织中两者的高表达可能参与了促进膀胱癌的发生发展,有望成为判断预后的新肿瘤标志物。

LncRNA PSMA3-AS1调节miR-140-3p/DDX5轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA人蛋白酶体α亚基3型的反义RNA1(PSMA3-AS1)调节miR-140-3p/DEAD box p68 RNA解旋酶(DDX5)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法qRT-PCR、Western blot、免疫组化法分别检测40例肺癌组织和细胞系中PSMA3-AS1、miR-140-3p、DDX5表达。将A549细胞分为:control组、si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+inhibitor-NC组、si-PSMA3-AS1+miR-140-3p inhibitor组,qRT-PCR检测转染效率;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及DDX5蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与PSMA3-AS1和DDX5的关系;构建肺癌裸鼠模型,分为si-NC、si-PSMA3-AS1组,测量肿瘤质量与体积,qRT-PCR检测移植瘤组织中miR-140-3p表达,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、DDX5蛋白表达。结果在肺癌组织/细胞系中,PSMA3-AS1 mRNA、DDX5蛋白表达升高,miR-140-3p mRNA表达水平降低(P<0.05);敲低PSMA3-AS1表达可显著抑制A549细胞增殖、迁移与侵袭,降低PCNA、MMP-2、vimentin、DDX蛋白表达,促进miR-140-3p、Bax、E-cadherin表达及细胞凋亡(P<0.05);下调miR-140-3p,可减弱敲低PSMA3-AS1对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-140-3p与PSMA3-AS1、miR-140-3p与DDX5存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制PSMA3-AS1表达可显著降低移植瘤质量和体积,降低Ki-67、DDX5表达水平,升高miR-140-3p表达(P<0.05)。结论敲低PSMA3-AS可能通过调节miR-140-3p/DDX5轴,抑制肺癌细胞的增殖和EMT,促进细胞凋亡。

lncRNA DDX11-AS1靶向miR-299-3p调控宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)DDX11反义RNA1(DDX11 antisense 1,DDX11-AS1)靶向miR-299-3p对宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测宫颈癌组织、癌旁组织中DDX11-AS1和miR-299-3p表达水平。将小干扰RNA阴性对照(si-NC组)、DDX11-AS1小干扰RNA组(si-DDX11-AS1组)、miR-299-3p模拟物组(miR-299-3p组)、miRNA模拟物阴性对照组(miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miRNA抑制物阴性对照组(si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miR-299-3p抑制物组(si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组)分别转染HeLa细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、transwell实验分别检测细胞活力、迁移侵袭能力。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证DDX11-AS1对miR-299-3p的靶向调控作用。结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中DDX11-AS1表达显著升高,miR-299-3p表达显著降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-DDX11-AS1组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组比较,si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05)。miR-299-3p是DDX11-AS1的靶基因,DDX11-AS1负调控miR-299-3p表达。结论宫颈癌中DDX11-AS1呈高表达。沉默DDX11-AS1通过上调miR-299-3p能够降低宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭能力。

长链非编码RNA SATB2-AS1抑制肺腺癌进展的机制研究

目的长链非编码RNA(lncRNA)SATB2的反义转录物(SATB2-AS1)对肺腺癌细胞生物学功能的影响和机制研究。方法收集25例肺腺癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,检测SATB2-AS1表达水平。用lncRNA SATB2-AS1的过表达载体(pcDNA-SATB2-AS1)和shRNA或IGF2BP2的shRNA(sh-SATB2-AS1;sh-IGF2BP2)和/或SLC7A11的shRNA(sh-SLC7A11)转染肺腺癌细胞A549。RIP分析评估IGF2BP2蛋白分别与SATB2-AS1或SLC7A11 mRNA的结合;CCK-8和Transwell实验分别用于检测肺腺癌细胞的增殖和侵袭能力;RT-qPCR和Western blot分别检测基因和蛋白表达。结果与癌旁组织和人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B相比,SATB2-AS1在肺腺癌患者的肿瘤组织和肺腺癌细胞系中的表达显著下调(P<0.01)。过表达SATB2-AS1抑制A549细胞增殖和侵袭,沉默SATB2-AS1促进细胞增殖和侵袭(P<0.05)。过表达SATB2-AS1后A549细胞中的Fe2+浓度、活性氧(ROS)水平以及丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.01),还原性谷胱甘肽(GSH)含量及铁死亡关键蛋白SLC7A11、GPX4的表达显著升高(P<0.01)。SATB2-AS1通过与IGF2BP2蛋白结合显著促进IGF2BP2蛋白与SLC7A11 mRNA结合,降低SLC7A11 mRNA的稳定性(P<0.01)。沉默SLC7A11显著逆转了SATB2-AS1沉默对A549细胞的影响。结论lncRNA SATB2-AS1通过招募IGF2BP2蛋白破坏SLC7A11mRNA稳定性,诱导肺腺癌细胞铁死亡,抑制细胞增殖和侵袭,从而抑制肺腺癌进展。

贲门腺癌中DDX11-AS1的异常表达及其作用

目的探讨长链非编码RNA DDX11-AS1在贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中的表达及其作用。方法应用qRT-PCR法检测GCA中DDX11-AS1的表达;应用MTS、Transwell侵袭实验检测DDX11-AS1异常表达对胃癌BGC823细胞增殖、侵袭能力的影响。结果DDX11-AS1在GCA组织中表达明显上调,DDX11-AS1高表达与GCA患者淋巴结转移、浸润深度、TNM分期有关(P均<0.01),并与生存期密切相关(P<0.01),且可作为GCA患者独立的预后因素(P<0.01)。DDX11-AS1在胃癌细胞中高表达,敲低DDX11-AS1表达明显抑制胃癌细胞BGC823的增殖及侵袭能力(P<0.01)。结论DDX11-AS1在GCA中可能作为癌基因发挥作用,其高表达促进了GCA的发生、发展,并有望成为GCA患者预后评估的候选分子标志物。

长链非编码RNA DDX11-AS1对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响及其机制

目的观察长链非编码RNA DEAD/DEAH盒解旋酶11反义RNA1(DDX11-AS1)对肝细胞癌(HCC)细胞增殖和侵袭能力的影响,并探讨可能机制。方法采用qRT-PCR法检测HCC细胞HepG2、Huh-7、SK-hep-1及正常肝细胞LO2中的DDX11-AS1,选择DDX11-AS1表达最高的HCC细胞进行后续实验。将HCC细胞分为对照组和实验组,分别转染NC siRNA和DDX11-AS1 siRNA,采用MTS法测算细胞增殖率,平板克隆实验测算克隆形成率,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白。将HCC细胞分为NC组、si-DDX11-AS1组和SC79组,NC组转染NC siRNA,si-DDX11-AS1组和SC79组转染DDX11-AS1 siRNA,SC79组细胞加入PI3K/AKT信号通路激活剂SC79,NC组和si-DDX11-AS1组加入DMSO,采用MTS法测算细胞增殖率,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果HepG2、Huh-7、SK-hep-1细胞中DDX11-AS1表达高于LO2细胞,其中HepG2细胞DDX11-AS1表达量最高(P均<0.05)。实验组细胞增殖率、克隆形成率、穿膜细胞数及pPI3K、pAKT蛋白表达均低于对照组(P均<0.05)。SC79组、si-DDX11-AS1组细胞增殖率和穿膜细胞数低于NC组,SC79组细胞增殖率和穿膜细胞数高于si-DDX11-AS1组(P均<0.05)。结论HCC细胞中DDX11-AS1表达上调;干扰DDX11-AS1表达可抑制HCC细胞的增殖和侵袭能力,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

lncRNA ABHD11-AS1通过调控STAT1/STAT3表达促进非小细胞肺癌细胞增殖与迁移

目的:探讨lncRNA ABHD11-AS1在非小细胞肺癌中的生物学功能和作用机制。方法:选取2016年7月至2018年12月在广东医科大学附属医院行非小细胞肺癌手术的248例患者,采用χ~2检验分析lncRNA ABHD11-AS1的表达与患者年龄、性别、临床病理分期、病理类型及吸烟状态的关系;采用Kaplan-Meier法分析ABHD11-AS1对非小细胞肺癌患者的预后意义;应用qRTPCR方法检测ABHD11-AS1在非小细胞肺癌组织和细胞系中的表达;通过体外功能测定评估敲低ABHD11-AS1对细胞增殖和转移的影响;通过Western blot实验探讨ABHD11-AS1在非小细胞肺癌中致癌作用的分子机制。结果:lncRNA ABHD11-AS1高表达组较低表达组吸烟患者较少(P=0.02),分期更晚(P<0.01);ABHD11-AS1高表达预示非小细胞肺癌患者预后不良;ABHD11-AS1在非小细胞肺癌组织和癌细胞株中高表达;敲低ABHD11-AS1的表达可抑制体外细胞增殖和迁移;敲低ABHD11-AS1表达抑制STAT1和STAT3癌蛋白的表达。结论:ABHD11-AS1可能通过促进STAT1和STAT3癌蛋白的表达,从而增加非小细胞肺癌细胞的增殖、集落形成以及迁移和侵袭能力。

lncRNAs ABHD11-AS1靶向miR-133a上调EGFR表达促进卵巢癌细胞增殖

目的研究lncRNAs ABHD11-AS1在卵巢癌细胞和输卵管上皮细胞中的表达,探究其对卵巢癌细胞增殖的影响和作用机制。方法Real-time PCR检测细胞中lncRNAs ABHD11-AS1和miR-133a的表达,双荧光素酶实验明确二者之间的调控作用;用NC siRNA、ABHD11-AS1 siRNA以及NC mimic、miR-133a mimic和NC inhibitor、miR-133a inhibitor分别转染细胞,CCK-8检测细胞增殖;Real-time PCR以及Western Blot实验检测细胞中EGFR的表达。结果结果表明,lncRNAs ABHD11-AS1在TOV-112D和CaVO3卵巢癌细胞系中的表达水平明显高于TEC细胞,且下调lncRNAs ABHD11-AS1可明显抑制卵巢癌细胞的增殖;ABHD11-AS1与miR-133a的表达呈负相关。双荧光素酶结果显示,转染miR-133a mimic和野生型ABHD11-AS1片段的细胞中荧光素酶的活性显著降低;与输卵管上皮细胞相比,miR-133a在卵巢癌细胞系的表达水平更低。转染miR-133a mimic会显著上调上述两种细胞中miR-133a的表达同时还抑制其增殖和EGFR表达。此外,下调miR-133a可明显促进卵巢癌细胞的增殖以及增加EGFR表达。与此相反,下调lncRNAs ABHD11-AS1明显降低EGFR表达。结论lncRNAs ABHD11-AS1通过调控miR-133a,上调其下游靶基因EGFR的表达从而促进卵巢癌的发生发展。

m6A修饰的LncRNA SLC7A11-AS1调控YAP1参与口腔鳞癌细胞侵袭迁移

目的探讨N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)修饰的LncRNA SLC7A11-AS1调控YAP1参与口腔鳞癌(OSCC)细胞侵袭与迁移的作用机制。方法生物信息学工具预测METTL3/LncRNA SLC7A11-AS1/YAP1轴的作用关系,并借助RNA pull-down实验与RIP实验进行验证。检测细胞中m6A、METTL3、LncRNA SLC7A11-AS1、YAP1的表达水平。将细胞分为si-NC、si-SLC7A11-AS1、si-SLC7A11-AS1+pcDNA、si-SLC7A11-AS1+pcDNAYAP1组。借助划痕愈合实验与Transwell实验评估细胞迁移与侵袭能力。结果 OSCC细胞中LncRNA SLC7A11-AS1表达上调(P<0.05);敲减LncRNA SLC7A11-AS1抑制了OSCC细胞的迁移与侵袭(均P<0.05);LncRNA SLC7A11-AS1正向调控YAP1,过表达YAP1部分抵消si-LncRNA SLC7A11-AS1对细胞迁移与侵袭的作用(均P<0.05);m6A相关蛋白METTL3可促进LncRNA SLC7A11-AS1在OSCC中的表达。结论 m6A修饰的LncRNA SLC7A11-AS1在OSCC中过表达,并且通过上调YAP1促进OSCC细胞的迁移与侵袭。

lncRNA F11-AS1 在肿瘤中的研究进展

lncRNA 是一类长度超过 200 个核苷酸的非编码 RNA,通过竞争性结合 microRNA,成为抑制 microRNA 的“分子海绵”(ceRNA),从而参与肿瘤的进程。最新的研究发现,lncRNA F11-AS1 是一个重要的抑癌因子,在多种肿瘤中表达下调,参与肿瘤的增殖、侵袭、转移等生物学过程的调节,同时与肿瘤的预后密切相关,可能成为预测肿瘤预后的一个生物标志物。本文就 lncRNA F11-AS1 在肿瘤中的研究进展进行综述。

DDX11-AS1在食管癌细胞对紫杉醇耐药中的作用及机制研究

目的探究长链非编码RNA DDX11-AS1与食管癌对紫杉醇耐药的关系。方法收集汕头大学医学院附属肿瘤医院2017年5月~2018年10月间食管癌连续性手术切除标本40例。(1)耐药株R-EC109敲减拓扑异构酶IIα(TOP2A),亲本细胞EC109中过表达TOP2A,检测两种细胞对紫杉醇敏感性变化。(2)双荧光素酶试验检测DDX11-AS1和转录因子TAF1对TOP2A启动子活性的影响。(3)荧光原位杂交试验定位DDX11-AS1,CHIP和RIP试验检测TOP2A启动子与TAF1以及DDX11-AS1与TAF1之间的联系。(4)PCR和免疫组化检测癌及癌旁组织中DDX11-AS1、TOP2A和TAF1的差异,分析DDX11-AS1与TOP2A的相关性。结果(1)R-EC109中TOP2A高表达,敲减TOP2A可提高R-EC109对紫杉醇的敏感性。(2)双荧光素酶报告基因试验表明,DDX11-AS1和TAF1提高TOP2A启动子转录活性。(3)DDX11-AS1主要定位于核内,TOP2A启动子和TAF1以及DDX11-AS1和TAF1存在相互作用。(4)DDX11-AS1、TOP2A和TAF1高表达,DDX11-AS1与TOP2A的表达量呈正相关。结论DDX11-AS1通过TAF1促进TOP2A的转录,增强食管癌细胞对紫杉醇耐药。