宫颈癌患者组织和血清外泌体lncRNA DLX6-AS1的表达

目的探究宫颈癌患者组织和血清外泌体中长链非编码RNA DLX6-AS1(lncRNA DLX6-AS1)的表达及临床意义。方法纳入2022年4月至2023年4月在海南西部中心医院妇科收治的82例宫颈癌患者作为观察组,82例子宫肌瘤女性作为对照组,收集患者术后宫颈癌组织及血清外泌体。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织样本、血清外泌体中lncRNA DLX6-AS1的表达水平;通过受试者工作特征曲线(ROC)分析lncRNA DLX6-AS1对宫颈癌的临床诊断价值。结果观察组患者组织、血清外泌体中lncRNA DLX6-AS1相对表达量显著高于对照组患者(P<0.05)。不同FIGO分期及淋巴结转移情况的观察组患者宫颈癌组织、血清外泌体中lncRNA DLX6-AS1的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织、血清外泌体中lncRNA DLX6-AS1单独及联合诊断宫颈癌的曲线下面积分别为0.740、0.692和0.781。结论宫颈癌患者组织及血清外泌体中lncRNA DLX6-AS1表达水平较高,且与FIGO分期、淋巴结转移相关,可能作为预测宫颈癌及严重程度的重要生物学标志物。

lncRNA DLX6-AS1在恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNAs表达具备时间特异性和空间特异性。DLX6-AS1是lncRNAs家族中的一员,其表达水平在多种恶性肿瘤中发生显著改变,提示DLX6-AS1在肿瘤的发生、发展和预后中发挥作用。文章对近5年国内外关于DLX6-AS1在恶性肿瘤中的研究进行综述,以期为恶性肿瘤的诊断和潜在治疗靶点选择提供参考。

TNF-α和lncRNA DLX6-AS1在2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清中的表达及诊断价值

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和长链非编码RNA(lncRNA)同源盒转录因子6反义RNA 1(DLX6-AS1)在2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清中的表达水平及诊断价值。方法选取126例2型糖尿病患者为研究对象,根据骨密度(BMD)测定结果分为单纯2型糖尿病组(72例)和2型糖尿病合并骨质疏松症组(54例)。另选取同时期60例健康体检者作为对照组。酶联免疫法检测各组患者血清TNF-α表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血清lncRNA DLX6-AS1表达水平。Pearson相关性分析2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平与临床指标相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析TNF-α和lncRNA DLX6-AS1对2型糖尿病合并骨质疏松症的诊断价值,Logistic回归分析2型糖尿病合并骨质疏松症的影响因素。结果与健康对照组比较,单纯2型糖尿病组和2型糖尿病合并骨质疏松症组患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平均升高(P<0.05)。与单纯2型糖尿病组比较,2型糖尿病合并骨质疏松症组患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平均升高(P<0.05)。2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清TNF-α、lncRNA DLX6-AS1与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均呈正相关(P<0.05),与BMD呈负相关(P<0.05)。与TNF-α或lncRNA DLX6-AS1单独诊断比较,二者联合检测诊断2型糖尿病合并骨质疏松症的灵敏度、特异度及准确度升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,lncRNA DLX6-AS1是2型糖尿病合并骨质疏松症的独立影响因素(P<0.05)。结论TNF-α和lncRNA DLX6-AS1参与2型糖尿病合并骨质疏松症发生发展,可能成为该疾病的诊断指标。

LncRNA DLX6-AS1靶向miR-374a-3p调控糖尿病患者创面愈合的分子机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)DLX6-AS1靶向miR-374a-3p对糖尿病(DM)患者创面愈合的影响。方法将人微血管内皮细胞(HMECs)分为对照(NC)组、高糖(HG)组,小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)+HG组(转染si-NC后用HG处理)、si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染si-LncRNADLX6-ASI后用HG处理)、miR-NC+HG组(转染miR-NC后用HG处理)、miR-374a-3p+HG组(转染miR-374a3p后用HG处理)、anti-miR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染imR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1后用的HG处理)、anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG后用HG处理)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测DM患者(DM组)和正常人(对照组)创面组织中miR-374a-3p和LncRNADLX6-AS1表达水平。CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检细胞迁移和侵袭。LncRNADLX6-AS1和miR-374a-3p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验确定。结果与对照组相比,DM组创面组织中miR-374a-3p表达显著降低(P<0.05),LncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.05)。与NC组比较,HG组HMECs中LncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.05),miR-374a-3p表达、细胞增殖率、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。与si-NC+HG组比较,si-LncRNA DLX6-AS1+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著升高(P<0.05)。与miR-NC+HG组比较,miR-374a-3p+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著升高(P<0.05)。miR-374a-3p是LncRNA DLX6-AS1的靶基因。与anti-miR-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组比较,anti-miR-374a-3p+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。结论下调LncRNA DLX6-AS1通过促进miR-374a-3p表达可诱导HMECs增殖、迁移和侵袭,促进DM患者创面愈合。

丹参酮调控LncRNA DLX6-AS1对LPS诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的作用

目的探讨丹参酮对脂多糖(LPS)诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法采用LPS诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞建立急性肺损伤模型,随机分组:空白对照组、LPS组、LPS+丹参酮L组、LPS+丹参酮M组、LPS+丹参酮H组、LPS+si-NC组、LPS+si-DLX6-AS1组、LPS+丹参酮+pcDNA-DLX6-AS1组;MTT法、流式细胞术分别就检测细胞增殖及凋亡;ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;qRT-PCR法检测DLX6-AS1的表达量。结果与空白对照组比较,LPS组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),IL-6、IL-10、TNF-α的水平升高(P<0.05),DLX6-AS1的表达量升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+丹参酮H组、LPS+丹参酮L组、LPS+丹参酮M组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率降低(P<0.05),IL-6、IL-10、TNF-α的水平降低(P<0.05),DLX6-AS1的表达量降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;与LPS组、LPS+si-NC组比较,LPS+si-DLX6-AS1组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率降低(P<0.05),IL-6、IL-10、TNF-α的水平降低(P<0.05);与LPS+丹参酮组比较,LPS+丹参酮+pcDNA-DLX6-AS1组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),IL-6、IL-10、TNF-α的水平升高(P<0.05)。结论丹参酮可通过抑制DLX6-AS1的表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎症反应从而减轻LPS诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤。

血清lncRNA DLX6-AS1和miR-335-3p与糖尿病视网膜病变患者微血管损伤的关系

目的:探讨血清长链非编码RNA(lncRNA)无远端同源框6反义1(DLX6-AS1)、微小RNA-335-3p(miR-335-3p)与糖尿病视网膜病变(DR)患者微血管损伤的关系。方法:前瞻性研究。选取2019-02/2021-12我院2型糖尿病(T2DM)患者160例,根据DR分期标准,分为无DR(NDR)组69例、非增殖型DR(NPDR)组48例、增殖型DR(PDR)组43例。比较三组患者血清lncRNA DLX6-AS1、miR-335-3p、血管内皮生长因子(VEGF)以及内皮细胞(ECs)、内皮祖细胞(EPCs)水平。Pearson法进行各指标相关性分析。Logistic回归模型分析影响T2DM患者发生DR的因素。结果:NDR组、NPDR组、PDR组患者血清miR-335-3p表达水平及EPCs比例逐次减少,lncRNA DLX6-AS1、VEGF表达水平及ECs比例逐次增加(均P<0.05)。DR患者血清lncRNA DLX6-AS1与miR-335-3p负相关(r=-0.668,P<0.01)。NPDR组、PDR组血清lncRNA DLX6-AS1与miR-335-3p表达水平均呈负相关性(r=-0.647、-0.675,均P<0.01),lncRNA DLX6-AS1与VEGF均呈正相关(r=0.619、0.630,均P<0.01),VEGF与miR-335-3p均呈负相关(r=-0.625、-0.649,均P<0.01);PDR组lncRNA DLX6-AS1与ECs呈正相关,与EPCs呈负相关(r=0.528、-0.594,均P<0.01),miR-335-3p与ECs呈负相关,与EPCs均呈正相关(r=-0.554、0.586,均P<0.01)。多因素回归分析显示,lncRNA DLX6-AS1(OR=2.484,95%CI:1.366~4.516)、miR-335-3p(OR=2.171,95%CI:1.218~3.871、VEGF(OR=1.603,95%CI:1.115~2.304)是T2DM患者发生DR的危险因素(均P<0.05)。结论:DR患者血清中lncRNA DLX6-AS1表达上调,miR-335-3p表达下调,lncRNA DLX6-AS1与miR-335-3p呈负相关,二者异常表达均与DR患者微血管损伤有关。

荞麦黄酮通过下调lncRNA DLX6-AS1抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症因子表达和纤维化

目的:探讨荞麦黄酮(BF)对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症因子和纤维化的影响及作用机制。方法:体外培养人肾小球系膜细胞(HMCs),分为对照组(Control组)、高糖组(HG组)、低剂量BF(L-BF组)、中剂量BF组(M-BF组)、高剂量BF组(H-BF组)、si-NC组、si-DLX6-AS1组、H-BF+pc DNA组和H-BF+pc DNA-DLX6-AS1组,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平,蛋白印迹(Western Blot)法检测细胞中内皮素-1(ET-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测细胞中DLX6-AS1表达水平。结果:与Control组比较,HG组IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05),ET-1、TGF-β1、FN和CTGF的蛋白表达水平升高(P<0.05),DLX6-AS1水平升高(P<0.05)。与HG组比较,L-BF组、M-BF组和H-BF组IL-6和TNF-α水平均降低(P<0.05),ET-1、TGF-β1、FN和CTGF的蛋白表达水平均降低(P<0.05),DLX6-AS1水平均降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-DLX6-AS1组IL-6和TNF-α水平降低(P<0.05),ET-1、TGF-β1、FN和CTGF的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与H-BF+pc DNA组比较,H-BF+pc DNA-DLX6-AS1组IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05),ET-1、TGF-β1、FN和CTGF的蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:荞麦黄酮可能通过下调DLX6-AS1表达抑制高糖诱导的HMCs炎症反应和纤维化。

LncRNA DLX6-AS1调控miR-497/HMGA2对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)无远端同源框6反义1(DLX6-AS1)调控miR-497/高迁移率族蛋白A2(HMGA2)分子轴对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:将骨肉瘤MG63细胞分为control组、si-DLX6-AS1组、si-NC组、pcDNA3.1-DLX6-AS1组、pcDNA3.1组、miR-497 mimics组、anti-miR-497组、miR-NC组、anti-miR-NC组、si-DLX6-AS1+anti-miR-497组和si-DLX6-AS1+HMGA2组。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测转染后细胞DLX6-AS1、miR-497和HMGA2表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase3表达。通过双荧光素酶报告实验验证miR-497与DLX6-AS1和HMGA2的靶向关系。结果:与control组比较,si-DLX6-AS1组DLX6-AS1表达和细胞增殖能力降低,细胞凋亡率、miR-497表达升高(P<0.05)。与si-NC组比较,si-DLX6-AS1组PCNA表达降低,cleaved caspase3表达升高(P<0.05)。DLX6-AS1可靶向miR-497并下调其表达,miR-497可负调控HMGA2表达。与si-DLX6-AS1组比较,si-DLX6-AS1+anti-miR-497组或si-DLX6-AS1+HMGA2组HMGA2、PCNA表达水平、细胞增殖能力升高,凋亡率、cleaved caspase3表达降低(P<0.05)。结论:DLX6-AS1可通过下调miR-497/HMGA2分子轴促进骨肉瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡,为骨肉瘤早期诊疗提供潜在分子靶点。

lncRNA DLX6-AS1在宫颈癌组织中的表达及对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的观察宫颈癌组织中长链非编码RNA无远端同源框6反义1(lncRNA DLX6-AS1)在宫颈癌组织中的表达及意义,并探讨DLX6-AS1对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响及机制。方法收集50例宫颈癌组织和30例正常宫颈组织,采用qRT-PCR法检测DLX6-AS1的表达,分析DLX6-AS1表达水平与患者临床病理特征的关系。取宫颈癌HeLa细胞,分为干扰对照组(si-NC组)和si-DLX6-AS1组,分别转染NC siRNA和DLX6-AS1 siRNA。分别采用MTS实验、Transwell实验观察两组细胞的增殖、迁移能力,Western blotting法检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin的表达。结果宫颈癌组织中DLX6-AS1表达高于正常宫颈组织(P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移患者宫颈癌组织中DLX6-AS1表达水平高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P均<0.05)。与si-NC组比较,si-DLX6-AS1组细胞增殖OD值降低,穿膜细胞数减少,细胞中β-catenin蛋白表达减少(P均<0.05)。结论DLX6-AS1在宫颈癌组织中的表达上调,其表达与宫颈癌恶性进展相关;干扰DLX6-AS1表达可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭。

血清lncRNA DLX6-AS1 Actinin-4表达与宫颈癌术后复发及预后的关系

目的:研究宫颈癌患者血清长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)DLX6-AS1、辅肌动蛋白4(Actinin-4)表达与宫颈癌根治术后复发及预后的关系。方法:选取自2016年2月至2018年2月期间行宫颈癌根治术的120例宫颈癌患者为研究对象(宫颈癌组),以同期健康体检的50例健康人为对照组。宫颈癌组根据术后3年肿瘤复发进展情况,分为无复发组(101例)及复发组(19例)。采用荧光实时定量聚合酶链反应法检测血清lncRNA DLX6-AS1表达,采用酶联免疫吸附实验检测血清Actinin-4表达。分析血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达水平与宫颈癌患者临床病理特征的关系。随访3年,采用Kaplan-Meier生存分析分析血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达与宫颈癌患者术后预后差异。分析影响宫颈癌患者术后复发的因素。结果:与对照组相比,宫颈癌组血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达显著升高(P<0.05)。Pearson相关分析结果,宫颈癌组血清lncRNA DLX6-AS1与Actinin-4的表达呈显著正相关性(r=0.560、P=0.000)。不同FIGO分期、病理分级、间质浸润深度及淋巴结转移患者血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达差异具有统计学意义(P<0.05)。lncRNA DLX6-AS1高表达组、Actinin-4高表达组3年无进展生存率及无进展生存时间均低于低表达组(均P<0.05)。病理分级低分化、FIGO分期ⅡA期、lncRNA DLX6-AS1高表达、Actinin-4高表达是影响宫颈癌根治术术后复发的独立危险因素(均P<0.05)。结论:宫颈癌患者血清lncRNA DLX6-AS1、Actinin-4表达升高、两者的表达与宫颈癌术后复发有关、可能是新的预后判断的血清标志物。

抑制lncRNA DLX6-AS1通过靶向miR-200a减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DLX6反义RNA1(DLX6-AS1)对高糖诱导的足细胞损伤的影响和机制。方法将足细胞分为正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25.0 mmol/L葡萄糖)、si-NC组(转染si-NC+高糖)、si-DLX6-AS1组(转染si-DLX6-AS1+高糖)、miR-NC组(转染miR-NC+高糖)、miR-200a组(转染miR-200a mimics+高糖)、si-DLX6-AS1+miR-NC组(转染si-DLX6-AS1+miR-NC+高糖)、si-DLX6-AS1+miR-200a组(转染si-DLX6-AS1+miR-200a+高糖)。流式细胞术检测细胞凋亡。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测DLX6-AS1、肾病蛋白(nephrin)、结蛋白(desmin)、波形蛋白(vimentin)表达。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证DLX6-AS1与miR-200a的关系。结果与正常糖组比较,高糖诱导后足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达、DLX6-AS1表达升高,nephrin表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-DLX6-AS1组足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达降低,nephrin表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-200a组足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达降低,nephrin表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-DLX6-AS1+miR-NC组比较,si-DLX6-AS1+miR-200a组足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达降低,nephrin表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。DLX6-AS1靶向并负调控miR-200a表达。结论抑制DLX6-AS1通过靶向miR-200a可减轻高糖诱导的足细胞损伤,是糖尿病肾病的潜在治疗靶点。

lncRNA DLX6-AS1靶向miR-195-5p调控前列腺癌细胞增殖、侵袭

目的探讨长链非编码RNA(lnc RNA)DLX6-AS1对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用机制。方法qRT-聚合酶链反应(PCR)检测前列腺癌细胞PC3、正常前列腺上皮细胞RWPE-1中DLX6-AS1、miR-195-5p的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-DLX6-AS1组(转染si-DLX6-AS1)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-195-5p组(转染miR-195-5p mimics)、si-DLX6-AS1+anti-miR-NC组(共转染si-DLX6-AS1和anti-miR-NC)、si-DLX6-AS1+anti-miR-195-5p组(共转染si-DLX6-AS1+anti-miR-195-5p)用脂质体法转染至PC3细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光活性。结果与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,前列腺癌细胞PC3中DLX6-AS1的表达显著上调,miR-195-5p的表达显著下调(P<0.05);抑制DLX6-AS1、过表达miR-195-5p均可显著抑制PC3细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);miR-195-5p可显著抑制野生型DLX6-AS1细胞的荧光活性(P<0.05),且显著抑制miR-195-5p可逆转抑制DLX6-AS1对PC3细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论lncRNA RNADLX6-AS1可促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向miR-195-5p有关。

LncRNA DLX6-AS1靶向miR-103a-3p调控H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)生长停滞特异性蛋白6-反义RNA1(DLX6-AS1)靶向miR-103a-3p对H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法采用H_(2)O_(2)诱导H9C2细胞建立氧化损伤模型。将H9C2细胞随机分为正常对照(NC)组、H_(2)O_(2)组、si-NC+H_(2)O_(2)组、si-LncRNA DLX6-AS1+H_(2)O_(2)组、miR-NC+H_(2)O_(2)组、miR-103a-3p+H_(2)O_(2)组、anti-miR-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+H_(2)O_(2)组、anti-miR-103a-3p+si-LncRNA DLX6-AS1+H_(2)O_(2)组。采用RT-qPCR检测H9C2细胞中DLX6-AS1和miR-103a-3p表达量。流式细胞术分析细胞凋亡。商品试剂盒检测丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、乳酸盐脱氢酶(LDH)释放量以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6的水平。双荧光素酶报告实验验证了DLX6-AS1与miR-103a-3p的靶向关系。结果H_(2)O_(2)处理后H9C2细胞凋亡率、MDA水平、LDH释放量以及TNF-α、IL-1β和IL-6的水平升高,SOD活性降低,DLX6-AS1表达量升高,miR-103a-3p表达量降低(P<0.05)。下调DLX6-AS1表达或上调miR-103a-3p表达均可减轻H_(2)O_(2)诱导的细胞凋亡,降低MDA水平、LDH释放量以及TNF-α、IL-1β和IL-6水平,并增加SOD活性(P<0.05)。DLX6-AS1靶向miR-103a-3p并负调控其表达。下调miR-103a-3p表达可减弱DLX6-AS1下调对H_(2)O_(2)诱导的细胞凋亡、炎性反应和氧化损伤的保护作用(P<0.05)。结论下调LncRNA DLX6-AS1通过上调miR-103a-3p对H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞凋亡、炎性反应和氧化损伤具有保护作用。

长链非编码RNA DLX6-AS1调控喉癌细胞的机制研究

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)DLX6-AS1通过调节miR-144诱导喉癌巨噬细胞M2极化对喉癌细胞的影响。方法从健康志愿者中分离外周血单核细胞PBMCs,从喉癌患者中分离肿瘤相关巨噬细胞TAMs,qRT-PCR检测PBMCs和TAMs中白细胞介素10(IL-10)、精氨酸酶1(Arg-1)、lncRNA DLX6-AS1与miR-144的表达。用白细胞介素4(IL-4)诱导人单核细胞白血病细胞THP-1巨噬细胞M2极化,qRT-PCR检测lncRNA DLX6-AS1、IL-10和Arg-1与CD163表达。下调lncRNA DLX6-AS1在Hep-2细胞中的表达量后,Hep-2细胞与THP-1细胞(M2型巨噬细胞)共培养48 h,CCK-8实验检测Hep-2细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞侵袭数目,Western blot实验检测细胞上皮间质转化能力。生物信息学软件miRcode预测lncRNA DLX6-AS1与miR-144的结合位点,并进行双荧光素酶活性检测。过表达lncRNA DLX6-AS1与miR-144后,分别用CCK-8、Transwell和Western blot检测Hep-2细胞增殖、侵袭和上皮间质转化能力。结果与PBMCs相比,TAMs中IL-10和Arg-1的mRNA表达明显升高(P<0.01),lncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.01),miR-144表达显著降低(P<0.01)。与Control组相比,IL-4组THP-1巨噬细胞IL-10、Arg-1和CD163表达显著上调(P<0.01);与IL-4+si-NC组相比,IL-4+si-DLX6-AS1组THP-1巨噬细胞IL-10、Arg-1和CD163表达则显著下调(P<0.01)。与IL-4+si-NC组相比,IL-4+si-DLX6-AS1组Hep-2细胞活力显著下降(P<0.01),侵袭数目明显减少(P<0.01),N-cadherin表达显著下调(P<0.01),E-cadherin表达显著上调(P<0.01)。生物信息学分析发现,lncRNA DLX6-AS1与miR-144之间存在潜在的结合位点;双荧光素酶报告系统检测显示,lncRNA DLX6-AS1与miR-144之间存在直接相互作用。与pcDNA-3.1(+)+mimics NC组相比,pcDNA-DLX6-AS1+mimics NC组THP-1巨噬细胞内IL-10、Arg-1和CD163表达显著上调(P<0.01);与pcDNA-3.1(+)+miR-144 mimics组相比,pcDNA-DLX6-AS1+miR-144 mimics组THP-1巨噬细胞内IL-10、Arg-1和CD163表达显著上调(P<0.01)。与pcDNA-3.1(+)+miR-144 mimics组相比,pcDNA-DLX6-AS1+miR-144 mimics组Hep-2细胞活力及细胞侵袭数目显著增加(P<0.01),N-cadherin表达显著上调(P<0.01),E-cadherin表达显著下调(P<0.01)。结论lncRNA DLX6-AS1可通过调节miR-144诱导喉癌巨噬细胞M2极化,并促进喉癌细胞发展。

LncRNA DLX6-AS1和miR-200a-3p在肝细胞肝癌中的表达及预后研究

探讨长链非编码RNA(Long Non-coding RNA,lncRNA),生长停滞蛋特异性蛋白6-反义RNA1(DLX6-AS1)和微小RNA-200a-3p(miR-200a-3p)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及血清中的表达及其诊断和预后价值。方法 通过TCGA、miRDB、miRTarBase等数据库,筛选及预测DLX6-AS1和miR-200a-3p功能和潜在关系。选取2018年6月至2019年12月本院收治HCC患者42例为实验组,另外选择选42例体检健康者为对照组。检测实验受试者标本中DLX6-AS1和miR-200a-3p表达水平,并对HCC患者进行3年内随访;分析DLX6-AS1和miR-200a-3p与HCC患者预后及病理参数的关系以及和甲胎蛋白(AFP)对HCC的诊断效能。结果:DLX6-AS1和miR-200a-3p可能参与了溴结构域蛋白4(bromodomain protein 4,BRD4) 基因的ceRNA调控网络。基于对照组,HCC患者肝组织与血清中DLX6-AS1高表达(P<0.05),miR-200a-3p异常低表达(P<0.05),HCC患者DLX6-AS1和miR-200a-3p表达与组织分级、淋巴结侵犯及TNM分期相关。生存分析提示,DLX6-AS1高表达HCC患者3年生存率(28.5%)少于低表达组(55.4%),miR-200a-3p低表达组HCC患者3年生存率(30.4%)低于高表达组(45.5%)。结论 DLX6-AS1和miR-200a-3p可能参与HCC患者的预后,可能成为HCC早期诊断的血清学标志物。

lncRNA DLX6-AS1通过靶向miR-16-5p/NUCKS1调控皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖、迁移和侵袭

目的研究长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1(lncRNA DLX6-AS1)对皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖、迁移和侵袭的影响及潜在机制。方法以双荧光素酶报告系统实验验证lncRNA DLX6-AS1与miR-16-5p、miR-16-5p与核酪蛋白激酶和细胞周期蛋白依赖性激酶底物1(NUCKS1)mRNA的靶向结合。通过单独或联合转染lncRNA DLX6-AS1抑制物(si-DLX6-AS1)、miR-16-5p抑制物(anti-miR-16-5p)、NUCKS1抑制物(si-NUCKS1)和相应对照(DLX6-AS1-NC、anti-miR-NC、NUCKS1-NC)调控A431细胞目的基因的表达,采用qRT-PCR检测A431细胞lncRNA DLX6-AS1、miR-16-5p、NUCKS1 mRNA的表达;Western印迹检测NUCKS1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)抗体、基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP9蛋白水平;CCK8实验检测细胞存活率;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。两组间比较采用独立样本t检验。结果双荧光素酶报告系统实验显示,lncRNA DLX6-AS1靶向结合miR-16-5p,miR-16-5p靶向结合NUCKS1。si-DLX6-AS1组A431细胞miR-16-5p表达水平(3.01±0.31)高于DLX6-AS1-NC组(1.02±0.10,t=18.33,P<0.001);NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于DLX6-AS1-NC组(均P<0.05),细胞存活率、迁移和侵袭细胞数亦低于DLX6-AS1-NC组(均P<0.05)。si-NUCKS1组A431细胞NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于NUCKS1-NC组(均P<0.05),细胞存活率、迁移和侵袭细胞数亦低于NUCKS1-NC组(均P<0.05)。低表达lncRNA DLX6-AS1后,anti-miR-16-5p组A431细胞miR-16-5p表达(0.34±0.04)低于anti-miR-NC组(1.00±0.12,t=15.65,P<0.05),Cyclin D1、MMP2和MMP9相对表达水平均高于anti-miR-NC组(均P<0.05),细胞存活率、迁移和侵袭细胞数均高于anti-miR-NC组(均P<0.05)。低表达lncRNA DLX6-AS1、敲减miR-16-5p后,si-NUCKS1组A431细胞NUCKS1、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白相对水平均低于NUCKS1-NC组(P<0.05),细胞存活率、迁移和侵袭细胞数均低于NUCKS1-NC组(P<0.05)。结论lncRNA DLX6-AS1可通过靶向miR-16-5p/NUCKS1调控A431细胞增殖、迁移和侵袭,lncRNA DLX6-AS1可能是治疗皮肤鳞状细胞癌的潜在分子靶点。

Expression and function of long non-coding RNA DLX6-AS1 in endometrial cancer

Background:LncRNA DLX6-AS1 has been uncovered to exert effects on various cancers.Nevertheless,the impacts of DLX6-AS1 on endometrial cancer(EC)development remained obscure.The study explored the influence of DLX6-AS1 on EC progression via the microRNA(miR)-374a-3p/zinc-finger protein(ZFX)axis.Methods:EC cell lines were collected and DLX6-AS1,miR-374a-3p,and ZFX levels in EC cell lines were detected.The EC cells were transfected with DLX6-AS1,miR-374a-3p,and ZFX constructs to examine the biological functions of EC cells.The xenograft model was established for detecting tumor growth.Rescue experiments were conducted to verify the interaction of DLX6-AS1,miR-374a-3p,and ZFX in EC cells.Results:DLX6-AS1 and ZFX levels were elevated,while miR-374a-3p exhibited a reduced level in EC cells.Silencing DLX6-AS1 and elevated miR-374a-3p expressions repressed the biological activities of EC cells.Reduced DLX6-AS1 repressed tumor development.MiR-374a-3p silencing reversed the impacts of DLX6-AS1 silencing,while ZFX overexpression abrogated the impacts of miR-374a-3p elevation on EC cell growth.Mechanically,DLX6-AS1 was found to bind to miR-374a-3p,and miR-374a-3p targeted ZFX.Conclusion:DLX6-AS1 depletion restricts the malignant phenotype of EC cells.The study might provide novel therapeutic biomarkers for EC treatment.

lncRNA CERS6-AS1通过调控miR-138-2-3p抑制人胶质瘤细胞系增殖

目的探讨lncRNA CERS6-AS1对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其可能作用机制.方法qRT-PCR法检测胶质瘤组织、癌旁组织中CERS6-AS1和miR-138-2-3p的表达量;Pearson法分析胶质瘤组织中CERS6-AS1与miR-138-2-3p表达量的相关性;体外培养人胶质瘤细胞T98G,将si-NC、si-CERS6-AS1、miR-NC、miR-138-2-3p mimics、si-CERS6-AS1与anti-miR-NC、si-CERS6-AS1与anti-miR-138-2-3p分别转染至T98G细胞;CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测CERS6-AS1和miR-138-2-3p的靶向关系.结果与癌旁组织比较,胶质瘤组织中CERS6-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-138-2-3p的表达量降低(P<0.05);CERS6-AS1与miR-138-2-3p呈负相关(r=-0.8899,P<0.001);si-CERS6-AS1组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均低于si-NC组(P<0.05);CERS6-AS1可靶向调节miR-138-2-3p的表达;miR-138-2-3p组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均少于miR-NC组(P<0.05);si-CERS6-AS1+anti-miR-138-2-3p组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均比si-CERS6-AS1+anti-miR-NC组增多(P<0.05).结论干扰CERS6-AS1表达可通过调控miR-138-2-3p而抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭.

下调LncRNA DLX6-AS1通过miR-144调控FBXW7表达影响食管癌Eca-109细胞的增殖、侵袭和EMT进程

目的:评估长非编码RNA远端少同源盒6反义1(lncRNA DLX6-AS1)在食管癌发生发展中的作用及其潜在的机制。方法:采用qRT-PCR检测lncRNA DLX6-AS1和miR-144、FBXW7在食管癌组织及癌旁正常组织中的mRNA表达。分别敲低lncRNA DLX6-AS1和miR-144、FBXW7在Eca-109细胞中的表达后,采用CCK-8法检测细胞生长活性,细胞克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭,Western blot检测E-cadherin、Vimentin和GAPDH的表达。采用miRanda、TargetScan和双荧光素酶报告基因检测验证lncRNA DLX6-AS1和miR-144、miR-144和FBXW7之间的靶向关系。结果:食管癌组织中lncRNA DLX6-AS1和FBXW7表达显著高于癌旁正常组织,miR-144表达与癌旁组织对比明显下调。lncRNA DLX6-AS1、FBXW7表达下降后,Eca-109细胞增殖、侵袭与EMT能力也明显下调;LncRNA DLX6-AS1与miR-144、miR-144与FBXW7呈靶向负调控关系;miR-144表达下降后,Eca-109细胞增殖、侵袭与EMT能力显著上调;上调LncRNA DLX6-AS1靶向miR-144促进Eca-109细胞增殖、侵袭与EMT。结论:Lnc RNA DLX6-AS1在食管癌中表达上调且通过miR-144/FBXW7轴促进Eca-109细胞增殖、侵袭和EMT。

长链非编码RNA DLX6-AS1与微小RNA-346在糖尿病足72例血清中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DLX6-AS1与微小RNA(miR)-346在糖尿病足病人血清中的表达及其临床意义。方法收集2017年5月至2018年12月南阳市中心医院收治的72例糖尿病足病人为糖尿病足组,选取同期该院收治的60例2型糖尿病无糖尿病足病人为糖尿病组,取同期于该院进行健康体检的健康志愿者55例作为对照组。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组受检者血清中DLX6-AS1、miR-346的表达水平;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、成纤维细胞生长因子2(FGF2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用电化学发光法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)水平;采用Pearson相关性分析检验糖尿病足病人血清DLX6-AS1、miR-346的表达水平与炎性因子的相关性;采用logistic回归分析研究影响糖尿病足发生的相关因素。结果糖尿病组、糖尿病足组病人VCAM-1、FGF2、TNF-α、IL-6水平高于对照组(P<0.05),糖尿病组与糖尿病足组比较差异有统计学意义(P<0.05);对照组DLX6-AS1的表达量是1.01±0.13,低于糖尿病组、糖尿病足组DLX6-AS1的表达量2.16±0.25、3.20±1.03(P<0.05);对照组miR-346的表达水平是1.00±0.16,高于糖尿病组、糖尿病足组miR-346的表达水平0.73±0.11、0.41±0.08(P<0.05),糖尿病组与糖尿病足组相比差异有统计学意义(P<0.05);随着糖尿病足病人Wagner分级增加DLX6-AS1的表达水平显著升高(P<0.05),miR-346的表达水平显著降低(P<0.05);DLX6-AS1的表达与FGF2、TNF-α、IL-6呈正相关(P<0.05),而miR-346与之呈负相关(P<0.05);DLX6-AS1与miR-346表达量是影响糖尿病足发生的危险因素(P<0.05)。结论糖尿病足病人血清中DLX6-AS1表达量升高,而miR-346表达量降低,二者可能参与糖尿病足发生及发展过程,并可能作为临床诊断的分子标志物。