lncRNA DNAJC3-AS1/miR-3619-5p轴影响脑胶质瘤细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的分子机制研究

目的:探讨lncRNA DNAJC3-AS1对胶质瘤细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响及可能机制。方法:收集34例脑胶质瘤组织和34例因外伤行颅内减压术患者的正常脑组织,体外培养正常神经胶质细胞HEB及胶质瘤细胞系LN18、SW1088和Hs683。RT-qPCR检测组织及细胞中lncRNA DNAJC3-AS1与miR-3619-5p表达量。以胶质瘤LN18细胞为研究对象,分别转染lncRNA DNAJC3-AS1小干扰RNA、miR-3619-5p模拟物或共转染lncRNA DNAJC3-AS1小干扰RNA与miR-3619-5p抑制剂,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞中EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA DNAJC3-AS1与miR-3619-5p的调控关系。结果:脑胶质瘤组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达明显高于正常脑组织(P<0.05),而miR-3619-5p表达明显低于正常脑组织(P<0.05)。与HEB细胞相比,胶质瘤细胞系中lncRNA DNAJC3-AS1表达升高(P<0.05),miR-3619-5p表达降低(P<0.05)。下调lncRNA DNAJC3-AS1或上调miR-3619-5p后,LN18细胞迁移数、侵袭数及细胞中N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。lncRNA DNAJC3-AS1可靶向负调控miR-3619-5p,下调miR-3619-5p可逆转下调lncRNA DNAJC3-AS1对LN18细胞迁移、侵袭及EMT的影响。结论:lncRNA DNAJC3-AS1在胶质瘤组织及细胞系中呈高表达,下调其表达可能通过靶向上调miR-3619-5p阻碍胶质瘤细胞迁移、侵袭及EMT过程,其可能成为胶质瘤治疗的分子靶点。

miR-144和lncRNA DNAJC3-AS1在乳腺癌组织中的表达及其在在乳腺癌细胞MCF-7化疗耐药中的作用

目的:探讨miR-144及长链非编码RNA (long non-coding RNA, lncRNA)DNAJC3-AS1在乳腺癌(breat cancer, BC)组织中的表达及其对BC MCF-7细胞化疗耐药的影响。方法:选取2012年1月至2016年12月于三二〇一医院肿瘤内科收治的196例BC患者的肿瘤组织及其配对癌旁组织,采用q PCR法检测DNAJC3-AS1、DNAJC3及miR-144在BC组织中的相对表达量,分析其对患者生存期的影响;荧光素酶报告基因实验验证DNAJC3-AS1与miR-144的靶向结合关系;将DNAJC3-AS1过表达质粒及miR-144 mimics转染MCF-7细胞,采用q PCR验证转染效果。CCK-8实验检测过表达DNAJC3-AS1及过表达miR-144对MCF-7细胞增殖及顺铂敏感性的影响。结果:DNAJC3-AS1及其宿主基因DNAJC3在BC组织中均呈高表达(均P<0.01),且两者表达水平呈正相关(r=0.451,P<0.01),并且高表达DNAJC3-AS1和DNAJC3的患者生存期较短(均P<0.01);miR-144在BC组织中呈低表达(P<0.01),且与DNAJC3-AS1呈负相关(r=–0.524,P<0.01)。转染后细胞中DNAJC3-AS1过表达平均倍数为13.47倍(P<0.01),miR-144过表达平均倍数为20.27倍(P<0.01);生物信息学分析和荧光素酶报告实验证实DNAJC3-AS1能够与miR-144靶向结合。成功构建过表达DNAJC3-AS1和miR-14的MCF-7细胞,与对照组相比,DNAJC3-AS1过表达组细胞增殖能力显著增强(P<0.01)、对顺铂的敏感性显著降低(P<0.01),而miR-144过表达组细胞对顺铂的敏感性显著增加(P<0.01)。结论:miR-144和lncRNADNAJC3-AS1在BC组织中均高表达,miR-144可通过靶向DNAJC3-AS1从而提高BC MCF-7细胞对顺铂的敏感性。

lncRNA DNAJC3-AS1靶向miR-4319调控皮肤鳞状细胞癌增殖、迁移和侵袭

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)DNAJC3-AS1靶向miR-4319对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法RT-qPCR检测39例CSCC患者癌组织及癌旁组织中DNAJC3-AS1和miR-4319表达。将CSCC细胞A431分为si-NC组、si-DNAJC3-AS1组、miR-NC组、miR-4319组、pcDNA组、pcDNA-DNAJC3-AS1组、si-DNAJC3-AS1+anti-miR-NC组、si-DNAJC3-AS1+anti-miR-4319组。CCK-8法、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell实验分别用于检测A431细胞活力、克隆形成、迁移和侵袭能力。双荧光素报告实验分析DNAJC3-AS1和miR-4319的靶向关系。结果CSCC组织中DNAJC3-AS1表达上调,miR-4319表达下调。与si-NC组比较,si-DNAJC3-AS1组A431细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数显著降低(P<0.05),miR-4319表达水平显著升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-4319组A431细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。DNAJC3-AS1与miR-4319直接特异性结合。pcDNA-DNAJC3-AS1组A431细胞miR-4319表达水平显著低于pcDNA组(P<0.05)。与si-DNAJC3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-DNAJC3-AS1+anti-miR-4319组A431细胞活力、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数显著升高(P<0.05)。结论CSCC中DNAJC3-AS1呈高表达,miR-4319呈低表达。抑制DNAJC3-AS1通过靶向上调miR-4319可降低CSCC细胞增殖、迁移和侵袭。因此,抑制DNAJC3-AS1/miR-4319轴可能成为潜在的CSCC治疗策略。

lncRNA PSMA3-AS1调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响

目的:探讨lncRNA PSMA3-AS1通过调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响及其机制。方法:选择2019年3月至2022年7月期间在本院确诊的53例卵巢癌患者作为研究对象,收集患者卵巢癌组织及癌旁组织。体外培养人正常卵巢细胞HOSEpiC和卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3、A2780、COV362,RT-qPCR检测卵巢癌细胞中lncRNA PSMA3-AS1表达,筛选最佳干预细胞系。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PSMA3-AS1、HMGA2与miR-142-3p的靶向关系;将SKOV3细胞分为si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-NC组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-142-3p组、miR-NC组、miR-142-3p mimics组、miR-142-3p mimics+pcDNA组、miR-142-3p mimics+HMGA2组,检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭;Western blot检测Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、cleaved caspase 3、HMGA2蛋白表达;小鼠移植瘤实验验证lncRNA PSMA3-AS1对卵巢癌肿瘤生长的影响。结果:与癌旁组织比较,卵巢癌组织中lncRNA PSMA3-AS1和HMGA2表达升高,miR-142-3p表达降低(P<0.05);lncRNA PSMA3-AS1和HMGA2在SKOV3细胞中表达水平最高,miR-142-3p在SKOV3细胞中表达水平最低;下拉实验和双荧光素酶报告显示,lncRNA PSMA3-AS1、HMGA2与miR-142-3p存在靶向关系;敲低lncRNA PSMA3-AS1或过表达miR-142-3p后,细胞OD值、细胞克隆数、划痕愈合率、细胞侵袭数及Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、HMGA2表达显著降低,细胞凋亡率、cleaved caspase 3表达显著增加(P<0.05);抑制miR-142-3p表达或过表达HMGA2可逆转敲低lncRNA PSMA3-AS1或过表达miR-142-3p对卵巢癌细胞恶性行为的抑制作用;体内实验表明,敲低lncRNA PSMA3-AS1表达可抑制小鼠肿瘤生长。结论:lncRNA PSMA3-AS1在卵巢癌中高表达,敲低lncRNA PSMA3-AS1可调节miR-142-3p/HMGA2轴抑制卵巢癌恶性发展。

lncRNA ITGA9-AS1、miR-670-3p在肝细胞癌组织中表达及与患者预后的关系

目的探究长链非编码RNA(lncRNA ITGA9-AS1)和miR-670-3p在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及预后评估价值。方法以2016年6月至2018年6月邯郸市中心医院收治的76例肝细胞癌患者为研究对象,取其癌组织和相应癌旁组织,分别为HCC组和癌旁组。lncRNA ITGA9-AS1和miR-670-3p水平检测采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR);Pearson相关性分析lncRNA ITGA9-AS1和miR-670-3p的关系;Kaplan-Meier法分析生存曲线;COX回归分析影响因素。结果HCC组lncRNA ITGA9-AS1水平低表达,miR-670-3p水平高表达(P<0.05)。lncRAN ITGA9-AS1与miR-670-3p呈负相关关系(r=-0.310,P=0.006)。lncRNA ITGA9-AS1、miR-670-3p表达水平与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤分化、肿瘤大小、肿瘤数目有关(P<0.05)。随访3年发现lncRNA ITGA9-AS1高表达组患者累积生存率高于低表达组;miR-670-3p高表达组患者累积生存率低于低表达组(P<0.05)。多因素COX回归分析表明肿瘤分化(HR=1.842)、淋巴结转移(HR=3.882)、miR-670-3p(HR=3.786)、lncRNA ITGA9-AS1(HR=3.366)是影响HCC患者预后的因素(P<0.05)。结论HCC组织中lncRNA ITGA9-AS1呈低表达,miR-670-3p呈高表达,二者表达水平与临床病理特征存在密切关系,且对HCC患者预后有一定的评估价值。

lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌中的临床意义及生物学功能分析

目的探讨lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达意义和其参与HCC发生发展的潜在作用机制。方法收集37例HCC组织及其配对癌旁组织,以及HCC细胞RNA,利用qRT-PCR检测lncRNA SLC9A3-AS1在组织和细胞中的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。绘制lncRNA SLC9A3-AS1的受试者工作特征(ROC)曲线,分析其对HCC的诊断效能。通过生物信息学方法筛选与lncRNA SLC9A3-AS1结合的RNA结合蛋白,并绘制韦恩图,分析lncRNA SLC9A3-AS1与结合蛋白表达的相关性,以及蛋白表达与HCC病理分期和患者生存预后的关系。结果lncRNA SLC9A3-AS1在HCC组织和细胞中表达下调,其表达水平与患者血清甲胎蛋白(AFP)水平明显相关(P<0.05)。lncRNA SLC9A3-AS1的ROC曲线下面积(AUC)为0.849(95%CI:0.796~0.886)。韦恩图显示5个与lncRNA SLC9A3-AS1潜在结合的蛋白:hnRNPA1、YTHDC1、RBM4、NONO和RBMx,其表达与lncRNA SLC9A3-AS1表达呈明显正相关(P<0.05)。随着HCC分期的进展,不同分期的RNA结合蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);RBM4、NONO和RBMx低表达患者总体生存期明显长于高表达患者(P<0.05)。结论lncRNA SLC9A3-AS1在HCC中下调,有望作为HCC诊断的生物标志物,并且可能通过与RNA结合蛋白互作调控HCC进展。

lncRNA SNAI3-AS1调节miR-367-3p/SOX4轴对前列腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNAI3-AS1调节微RNA(miR)-367-3p/高迁移率族盒蛋白4(SOX4)轴对前列腺癌(PC)细胞恶性生物学行为的影响。方法实时PCR检测人PCa细胞系DU145、LNCap、PC-3、正常前列腺上皮细胞系RWPE-1以及PC组织、癌旁组织中SNAI3-AS1、miR-367-3p、SOX4 mRNA表达。选取对数生长期的LNCap,设置空白组、阴性对照(vector)组、SNAI3-AS1过表达(vector SNAI3-AS1)组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)组、si-SNAI3-AS1组、si-SNAI3-AS1+抑制剂阴性对照(NC inhibitor)组和si-SNAI3-AS1+miR-367-3p inhibitor组。用克隆形成实验、Transwell实验、Hoechst33258染色分别检测细胞克隆形成能力、迁移、侵袭及凋亡;实时PCR检测LNCap中SNAI3-AS1、miR-367-3p、SOX4 mRNA表达;Western blotting检测LNCap中SOX4蛋白表达;报告基因实验验证miR-367-3p与SNAI3-AS1、SOX4的靶向关系。结果SNAI3-AS1、SOX4 mRNA表达在DU145、LNCap、PC-3及PC组织中显著增加,miR-367-3p表达显著降低(P<0.05)。与空白组、vector组相比,vector SNAI3-AS1组SNAI3-AS1、SOX4 mRNA及蛋白表达、克隆数、侵袭与迁移显著增加,miR-367-3p表达、凋亡显著降低(P<0.05);与空白组、si-NC组相比,si-SNAI3-AS1组SNAI3-AS1、SOX4 mRNA及蛋白表达、克隆数、侵袭与迁移显著降低,miR-367-3p表达、凋亡显著增加(P<0.05);与si-SNAI3-AS1+NC inhibitor组相比,si-SNAI3-AS1+miR-367-3p inhibitor组SOX4 mRNA及蛋白表达、克隆数、侵袭与迁移显著增加,miR-367-3p表达、凋亡显著降低(P<0.05),SNAI3-AS1表达无统计学差异(P>0.05)。miR-367-3p与SNAI3-AS1、SOX4存在靶向关系。结论lncRNA SNAI3-AS1通过上调miR-367-3p/SOX4轴抑制PC细胞恶性生物学行为的发展。

肝细胞肝癌中LncRNA OSER1-AS1靶向调控miR-433-3p的作用

目的研究肝细胞肝癌(HCC)中长链非编码RNA(LncRNA)氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA1(OSER1-AS1)靶向调控微小RNA(miR)-433-3p的作用及生物学意义。方法选择唐山市第九医院手术切除的HCC组织和癌旁组织,培养HCC细胞株SMMC-7721、HepG2、MHCC97H及正常肝细胞株HL-7702。检测LncRNA OSER1-AS1、miR-433-3p的表达水平,比较HCC组织与癌旁组织、HCC细胞株与正常肝细胞株中LncRNA OSER1-AS1、miR-433-3p表达水平的差异。对转染MHCC97H细胞进行分组,转染阴性对照(NC)-siRNA为si-NC组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA为si-OSER1-AS1组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA及NC miR为si-OSER1-AS1+miR-NC组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA及miR-433-3p抑制物为si-OSER1-AS1+miR-433-3p抑制物组。检测细胞增殖活力、凋亡率、增殖细胞核抗原(PCNA)及裂解型caspase-3(cleaved caspase-3)的表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA OSER1-AS1靶向miR-433-3p。结果HCC组织中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于癌旁组织(1.77±0.34 vs1.00±0.21)、miR-433-3p的表达水平低于癌旁组织(0.65±0.09 vs 1.00±0.28)(P<0.05)且LncRNA OSER1-AS1与miR-433-3p呈负相关(r=-0.351,P<0.05);HCC细胞株中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于HL-7702细胞、miR-433-3p的表达水平低于HL-7702细胞(P<0.05)且MHCC97H细胞中上述变化最显著。si-OSER1-AS1组MHCC97H细胞中LncRNA OSER1-AS1、PCNA的表达水平及增殖活力低于si-NC组(0.37±0.05 vs 1.00±0.11,0.33±0.05 vs 0.92±0.12,0.51±0.09 vs 1.03±0.12),miR-433-3p、cleaved caspase-3的表达水平及凋亡率高于si-NC组(1.88±0.25 vs 1.00±0.09,0.96±0.11 vs 0.44±0.06,9.39%±1.15%vs 3.82%±0.55%)(P<0.05);si-OSER1-AS1+miR-433-3p抑制物组MHCC97H细胞中cleaved caspase-3表达水平及凋亡率低于si-OSER1-AS1+miR-NC组(0.27±0.05 vs 0.91±0.10,6.04%±0.77%vs 11.32%±1.32%),PCNA的表达水平及增殖活力高于si-OSER1-AS1+miR-NC组(0.94±0.12 vs 0.48±0.06,0.95±0.11 vs 0.34±0.05)(P<0.05)。结论LncRNA OSER1-AS1靶向miR-433-3p调控HCC细胞的增殖和凋亡。

长链非编码RNA DNAJC3-AS1、微RNA-214-3p在结肠癌组织、结肠腺瘤性息肉中的表达水平及临床意义

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)DNAJC3-AS1、微RNA-214-3p(miR-214-3p)在结肠癌组织、结肠腺瘤性息肉中的表达水平及临床意义。方法 lnCAR数据库检索结肠癌组织、正常结肠组织中LncRNA DNAJC3-AS1表达情况;选取2016年5月至2019年1月北京市丰台中西医结合医院收治的86例结肠癌病人、53例结肠腺瘤性息肉病人为研究对象,收集结肠癌病人的结肠癌组织、对应癌旁组织及结肠腺瘤性息肉病人的结肠腺瘤性息肉,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定组织中lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平;分析结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平与结肠癌病人临床病理特征、预后关系;分析结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p相关性,生物信息学预测lncRNA DNAJC3-AS1与miR-214-3p的关系。结果 lnCAR数据库分析显示,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平(4.40±0.49)高于正常结肠组织(4.00±0.36)(P<0.05)。qRT-PCR检测显示,与结肠腺瘤性息肉(1.71±0.57、0.67±0.22)相比,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平(2.63±0.88)升高(P<0.05),miR-214-3p表达水平(0.31±0.10)降低(P<0.05);与癌旁组织(1.04±0.35、1.01±0.34)相比,结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1表达水平升高(P<0.05),miR-214-3p表达水平降低(P<0.05)。结肠癌组织lncRNA DNAJC3-AS1、miR-214-3p表达水平在不同分化程度、淋巴结转移、血管浸润、TNM分期方面,分布差异有统计学意义(P<0.05);结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p呈负相关(r=-0.58,P<0.05),且lncRNA DNAJC3-AS1与miR-214-3p存在结合位点;lncRNA DNAJC3-AS1高表达组29.75个月、miR-214-3p低表达组30.16个月结肠癌病人累积生存率低于lncRNA DNAJC3-AS1低表达组34.69个月、miR-214-3p高表达组34.37个月(P<0.05)。结论 癌旁组织、结肠腺瘤性息肉、结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达依次升高,miR-214-3p表达依次降低,且结肠癌组织中lncRNA DNAJC3-AS1表达水平与miR-214-3p、临床病理特征、预后有关。

LncRNA PSMA3-AS1调节miR-140-3p/DDX5轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA人蛋白酶体α亚基3型的反义RNA1(PSMA3-AS1)调节miR-140-3p/DEAD box p68 RNA解旋酶(DDX5)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法qRT-PCR、Western blot、免疫组化法分别检测40例肺癌组织和细胞系中PSMA3-AS1、miR-140-3p、DDX5表达。将A549细胞分为:control组、si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+inhibitor-NC组、si-PSMA3-AS1+miR-140-3p inhibitor组,qRT-PCR检测转染效率;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及DDX5蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与PSMA3-AS1和DDX5的关系;构建肺癌裸鼠模型,分为si-NC、si-PSMA3-AS1组,测量肿瘤质量与体积,qRT-PCR检测移植瘤组织中miR-140-3p表达,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、DDX5蛋白表达。结果在肺癌组织/细胞系中,PSMA3-AS1 mRNA、DDX5蛋白表达升高,miR-140-3p mRNA表达水平降低(P<0.05);敲低PSMA3-AS1表达可显著抑制A549细胞增殖、迁移与侵袭,降低PCNA、MMP-2、vimentin、DDX蛋白表达,促进miR-140-3p、Bax、E-cadherin表达及细胞凋亡(P<0.05);下调miR-140-3p,可减弱敲低PSMA3-AS1对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-140-3p与PSMA3-AS1、miR-140-3p与DDX5存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制PSMA3-AS1表达可显著降低移植瘤质量和体积,降低Ki-67、DDX5表达水平,升高miR-140-3p表达(P<0.05)。结论敲低PSMA3-AS可能通过调节miR-140-3p/DDX5轴,抑制肺癌细胞的增殖和EMT,促进细胞凋亡。

LncRNA-DNAJC3-AS1在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的:检测lncRNA-DNAJC3-AS1在子宫颈鳞癌组织中的表达水平及其临床意义。方法:运用RNA原位杂交技术检测lncRNA-DNAJC3-AS1在73例宫颈鳞癌和癌旁正常组织中的表达情况,并分析lncRNA-DNAJC3-AS1与宫颈鳞癌患者病理资料和预后生存的相关性。结果:lncRNA-DNAJC3-AS1在宫颈鳞癌组织中呈阳性表达,约占83.56%(61/73);与癌旁正常组织阳性表达(5.48%,4/73)之间有统计学差异(χ^(2)=90.096,P<0.05)。高表达lncRNA-DNAJC3-AS1的例数为57例,低表达lncRNA-DNAJC3-AS1的例数为16例。高表达的lncRNA-DNAJC3-AS1与宫颈鳞癌的分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与患者年龄、HPV感染、肿瘤大小和TNM分期无相关性(P>0.05)。低表达组的生存时间明显长于高表达组(χ^(2)=33.85,P<0.05)。结论:lncRNA-DNAJC3-AS1可能是宫颈鳞癌的一种新的细胞癌基因,可以作为宫颈鳞癌发生和预后判断的新标志物;lncRNA-DNAJC3-AS1促进了宫颈鳞癌的发生发展过程。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的机制研究

目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/mL)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达水平。分别将pcDNA-FGD5-AS1、miR-103a-3p mimics转染至软骨细胞,随后使用IL-1β处理48 h。采用ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-8水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-103a-3p的靶向关系;Western blot检测Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达量。结果与NC组相比,IL-1β组软骨细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P<0.05),miR-103a-3p、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05),IL-6、TNF-α、IL-8水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05);FGD5-AS1过表达后可明显降低IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、p-IκBα水平(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),抑制Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实FGD5-AS1靶向结合miR-103a-3p并可负向调控miR-103a-3p的表达(P<0.05);miR-103a-3p过表达可明显逆转FGD5-AS1过表达对细胞凋亡及炎症反应的抑制作用(P<0.05)。结论LncRNA FGD5-AS1可通过靶向负调控miR-103a-3p的表达从而抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞炎症反应及细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB信号通路激活有关。

沉默LncRNA PROX1-AS1通过NLRP3/Caspase-1炎症通路抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭及诱导细胞凋亡的实验研究

目的:研究LncRNA PROX1-AS1对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:将si-con、si-LncRNA PROX1-AS1、mimic-con、PROX1-AS1 mimic转染至Huh7中,分别记为si-con组、si-LncRNA PROX1-AS1组、mimic-con组、PROX1-AS1 mimic组;正常培养的细胞作为对照(NC)组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LncRNA PROX1-AS1表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;蛋白质印迹(Western blot)法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体含热蛋白结构域3(NLRP3)、前体Caspase-1(pro-Caspase-1)、Caspase-1 p20蛋白表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:与正常肝细胞THLE-3相比,肝癌细胞Hep3B、Huh7、MHCC97L中LncRNA PROX1-AS1高表达(P<0.05)。沉默LncRNA PROX1-AS1,细胞活性显著降低,MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,细胞迁移和侵袭数显著降低,Cleaved caspase-3表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1 p20表达水平显著降低,IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05)。结论:沉默LncRNA PROX1-AS1可抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭及诱导细胞凋亡,其机制可能与NLRP3/Caspase-1炎症通路有关。

LncRNA WDR86-AS1调节FOXO3a对滋养细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探究LncRNA WDR86-AS1对叉头框转录因子3a(FOXO3a)与胎盘组织和人早孕绒毛外滋养细胞HTR8/SVneo细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能参与子痫前期(PE)发生发展的分子机制.方法:选择子痫前期(PE)孕妇的胎盘组织25例为PE组,同期健康孕妇的胎盘组织25例为对照组,采用免疫组化法、蛋白印迹法及实时荧光定量PCR技术检测两组孕妇胎盘组织中LncRNA WDR86-AS1和FOXO3a的表达水平,并分析二者表达的相关性;沉默HTR8/SVneo细胞中LncRNA WDR86-AS1或FOXO3a的表达,检测FOXO3a的表达,并采用CCK-8和Transwell检测对滋养细胞增殖和侵袭能力的影响.结果:PE组中LncRNA WDR86-AS1 mRNA、FOXO3a mRNA和蛋白表达均高于对照组(P<0.05);FOXO3a在胎盘组织滋养细胞的胞质和胞核均有表达且PE组的表达高于对照组(P<0.05);PE组中LncRNA WDR86-AS1和FOXO3a表达呈正相关(r=0.54,P<0.05);在HTR8/SVneo细胞中沉默LncRNA WDR86-AS1,FOXO3a mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞的增殖和侵袭能力增加(P<0.05);在HTR8/SVneo细胞中沉默FOXO3a,FOXO3a mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞的增殖和侵袭能力增加(P<0.05).结论:LncRNA WDR86-AS1可能通过调节FOXO3a的表达影响滋养细胞增殖和侵袭能力,参与PE的发生发展.

LncRNA DLX6-AS1靶向miR-374a-3p调控糖尿病患者创面愈合的分子机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)DLX6-AS1靶向miR-374a-3p对糖尿病(DM)患者创面愈合的影响。方法将人微血管内皮细胞(HMECs)分为对照(NC)组、高糖(HG)组,小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)+HG组(转染si-NC后用HG处理)、si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染si-LncRNADLX6-ASI后用HG处理)、miR-NC+HG组(转染miR-NC后用HG处理)、miR-374a-3p+HG组(转染miR-374a3p后用HG处理)、anti-miR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染imR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1后用的HG处理)、anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG后用HG处理)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测DM患者(DM组)和正常人(对照组)创面组织中miR-374a-3p和LncRNADLX6-AS1表达水平。CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检细胞迁移和侵袭。LncRNADLX6-AS1和miR-374a-3p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验确定。结果与对照组相比,DM组创面组织中miR-374a-3p表达显著降低(P<0.05),LncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.05)。与NC组比较,HG组HMECs中LncRNA DLX6-AS1表达显著升高(P<0.05),miR-374a-3p表达、细胞增殖率、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。与si-NC+HG组比较,si-LncRNA DLX6-AS1+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著升高(P<0.05)。与miR-NC+HG组比较,miR-374a-3p+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著升高(P<0.05)。miR-374a-3p是LncRNA DLX6-AS1的靶基因。与anti-miR-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组比较,anti-miR-374a-3p+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。结论下调LncRNA DLX6-AS1通过促进miR-374a-3p表达可诱导HMECs增殖、迁移和侵袭,促进DM患者创面愈合。

MiR-27b-3p通过下调lncRNA ST7-AS1水平调控非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡和侵袭

目的探究微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)通过调控长链非编码RNA ST7-AS1(lncRNA ST7-AS1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法通过qRT-PCR分析miR-27b和lncRNA ST7-AS1在人正常肺上皮BEAS-2B细胞和人NSCLC细胞系(A549、H358、H1299及NCL-H2073)中的表达情况。通过生物信息学和双荧光素酶报告基因检测分析miR-27b-3p与lncRNA ST7-AS1的靶向关系。将A549细胞分为5组:Control组、NC组、miR-27b-3p组、miR-27b-3p+VC组及miR-27b-3p+lncRNA ST7-AS1组。QRT-PCR检测miR-27b-3p和lncRNA ST7-AS1表达;MTT法检测细胞增殖活力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Transwell检测细胞侵袭能力。结果MiR-27b-3p在人NSCLC细胞系中表达低于人正常肺上皮细胞BEAS-2B,且在A549细胞中的表达最低(P<0.05);lncRNA ST7-AS1在人NSCLC细胞系表达水平高于BEAS-2B细胞,且在A549细胞中的表达最高(P<0.05)。生物信息学分析显示,lncRNA ST7-AS1和miR-27b-3p存在靶向结合位点;双荧光素酶报告基因检测结果显示,lncRNA ST7-AS1与miR-27b-3p存在靶向调控关系。qRT-PCR结果显示,与NC组比较,miR-27b-3p组A549细胞中miR-27b-3p水平升高,lncRNA ST7-AS1水平降低(P<0.05);与miR-27b-3p+VC组比较,miR-27b-3p+lncRNA ST7-AS1组A549细胞中miR-27b-3p水平降低,lncRNA ST7-AS1水平升高(P<0.05)。MTT、Annexin V-FITC/PI双染及Transwell结果显示,与NC组比较,miR-27b-3p组A549细胞增殖活力降低,凋亡率增高,侵袭细胞数量减少(P<0.05);与miR-27b-3p+VC组比较,miR-27b-3p+lncRNA ST7-AS1组A549细胞增殖活力增高,凋亡率降低,侵袭细胞数量增多(P<0.05)。结论miR-27b-3p通过下调lncRNA ST7-AS1水平抑制NSCLC细胞增殖和侵袭,并诱导细胞凋亡,抑制NSCLC的恶性进展。

lncRNA CERS6-AS1通过调控miR-138-2-3p抑制人胶质瘤细胞系增殖

目的探讨lncRNA CERS6-AS1对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其可能作用机制.方法qRT-PCR法检测胶质瘤组织、癌旁组织中CERS6-AS1和miR-138-2-3p的表达量;Pearson法分析胶质瘤组织中CERS6-AS1与miR-138-2-3p表达量的相关性;体外培养人胶质瘤细胞T98G,将si-NC、si-CERS6-AS1、miR-NC、miR-138-2-3p mimics、si-CERS6-AS1与anti-miR-NC、si-CERS6-AS1与anti-miR-138-2-3p分别转染至T98G细胞;CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测CERS6-AS1和miR-138-2-3p的靶向关系.结果与癌旁组织比较,胶质瘤组织中CERS6-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-138-2-3p的表达量降低(P<0.05);CERS6-AS1与miR-138-2-3p呈负相关(r=-0.8899,P<0.001);si-CERS6-AS1组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均低于si-NC组(P<0.05);CERS6-AS1可靶向调节miR-138-2-3p的表达;miR-138-2-3p组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均少于miR-NC组(P<0.05);si-CERS6-AS1+anti-miR-138-2-3p组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均比si-CERS6-AS1+anti-miR-NC组增多(P<0.05).结论干扰CERS6-AS1表达可通过调控miR-138-2-3p而抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭.

LncRNA FEZF1-AS1调控特发性肺间质纤维化的机制研究

目的 探讨FEZ家族锌指1-反义RNA 1(LncRNA FEZF1-AS1)对肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮-间充质相互作用(EMT)的影响及其作用机制。方法 将转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))作用于A549细胞,诱导肺间质纤维化细胞模型,将其分为空白对照组(A549细胞组)和模型组。Western blotting检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达,观察模型复制是否成功;实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。根据实验目的和转染质粒不同,将A549细胞分为空白对照组(Blank组)、TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组、TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1组。CCK-8法检测细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell检测细胞侵袭能力。Western blotting检测细胞E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表达;qRT-PCR检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。结果 模型组E-cadherin蛋白相对表达量较空白对照组降低(P <0.05),N-cadherin及Vimentin蛋白相对表达量较空白对照组升高(P <0.05);模型组LncRNA FEZF1-AS1基因相对表达量较空白对照组升高(P <0.05),miR-200c-3p基因相对表达量较空白对照组降低(P <0.05)。与Blank组比较,TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组细胞增殖、迁移、侵袭能力升高(P <0.05);与TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低(P<0.05)。与TGF-β_(1)+SiLncRNAFEZF1-AS1NC组比较,TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1组LncRNA FEZF1-AS1基因相对表达量及N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量降低(P <0.05),E-cadherin蛋白相对表达量升高(P <0.05);与TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β_(1)+SiLncRNAFEZF1-AS1组和Blank组miR-200c-3p基因相对表达量升高(P<0.05)。结论LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭及EMT过程。

LncRNA ITGB2-AS1靶向miR-338-3p对肺癌细胞多西他赛耐药性的影响

目的研究lncRNA ITGB2-AS1对肺癌细胞增殖、凋亡及多西他赛耐药性的影响及潜在的分子机制。方法用不同浓度(6.25μg/L、12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L)多西他赛(DTX)处理肺癌A549和多西他赛耐药细胞A549/DTX细胞,CCK8法测定DTX对A549细胞增殖抑制率和IC 50,qRT-PCR检测A549和A549/DTX细胞中lncRNA ITGB2-AS1和miR-338-3p的水平,Western blot检测细胞中CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证lncRNA ITGB2-AS1和miR-338-3p的靶向关系。结果多西他赛(DTX)(6.25μg/L、12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L)对A549/DTX细胞的抑制率显著低于A549细胞,呈浓度依赖性,A549/DTX对DTX的IC 50(256.80±10.22)μg/L显著高于A549细胞(23.57±2.11)μg/L;在A549/DTX中,lncRNA ITGB2-AS1含量显著高于A549细胞(P<0.05),miR-338-3p含量显著低于A549细胞(P<0.05);抑制lncRNA ITGB2-AS1联合12.5μg/L DTX处理可提高A549/DTX细胞凋亡率,增强DTX对A549/DTX细胞的增殖抑制率,上调p21和Bax水平,下调Cyclin D1和Bcl-2蛋白含量;lncRNA ITGB2-AS1靶向负调控miR-338-3p的表达;下调miR-338-3p可逆转抑制lncRNA ITGB2-AS1对A549/DTX细胞增殖、凋亡和多西他赛耐药性的作用。结论LncRNA ITGB2-AS1可靶向miR-338-3p调控A549/DTX细胞的增殖、凋亡及多西他赛耐药性。LncRNA ITGB2-AS1是肺癌潜在的分子靶点。

LncRNA PSMA3-AS1调控miR-27b-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)人蛋白酶体α亚基3型反义RNA1(PSMA3-AS1)通过调控微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响。方法选取20例非小细胞肺癌标本和20例健康志愿者肺部上皮样本。购买人体正常的肺部上皮细胞H1299、H358、A549及NC-LH2073.采用实时荧光RT-PCR检测LncRNA PSMA3-AS1、miR-27b-3p表达,构建抑制LncRNA PSMA3-AS1表达的A549细胞,采用MTT法、流式细胞仪、Transwell检测细胞增殖、凋亡、迁移情况,Western Blot法检测细胞周期蛋白-D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化。结果与人体正常肺上皮组织相比,非小细胞肺癌组织中LncRNA PSMA3-AS1表达升高,miR-27b-3p表达下降(P<0.05)。与BEAS-2B组相比,H1299组、H358组、NC-LH2073组、A549组中LncRNA PSMA3-AS1水平上升,miR-27b-3p水平降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-PSMA3-AS1组lncRNA PSMA3-AS1水平表达降低(P<0.05),与si-NC组相比,si-HIF-1a组OD值、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、迁移细胞数下降,凋亡率升高(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-27b-3p组miR-27b-3p表达水平降低(P<0.05),与miR-NC组相比,miR-27b-3p组OD值、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、迁移细胞数降低,凋亡率上升(P<0.05)。双荧光素酶报告试验显示,LncRNA PSMA3-AS1靶向miR-27b-3p表达,且经转染后,通过RT-qPCR检测显示miR-NC组及miR-27b-3p组中的miR-27b-3p表达差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告发现同时转染miR-27b-3p、WT-PSMA3-AS1后,荧光素酶活性下降(P<0.05)。与si-NC组相比,抑制lncRNA-PSMA3-AS1表达可使PC3细胞中miR-27b-3p表达降低(P<0.05),与si-PSMA3-AS1+anti-miR-NC组相比,si-PSMA3-AS1+anti-miRNA-27b-3p组OD值、CyclinD1、MMP2、MMP9、迁移细胞数上升,凋亡率降低(P<0.05)。结论干扰LncRNA PSMA3-AS1水平表达,可对miR-27b-3p进行有效调控,从而抑制非小细胞肺癌细胞的增殖与迁移,加速其凋亡,阻碍非小细胞肺癌的恶性发展。