lncRNA GAS6-AS2靶向miR-125a-3p调控肺癌A549细胞紫杉醇敏感性

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)GAS6-AS2对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭及紫杉醇(paclitaxel,PTX)敏感性的影响及其分子机制。方法:用qPCR法检测肺癌A549和A549/PTX细胞中GAS6-AS2和miR-125a-3p的表达水平。用脂质体转染技术,分别将si-NC、si-GAS6-AS2、miR-NC、miR-125a-3p、pcDNA、pcDNA-GAS6-AS2、si-GAS6-AS2+anti-miR-NC、si-GAS6-AS2+anti-miR-125a-3p等转染入A549/PTX细胞,同时用不同浓度(1、5、10、20、40 nmol/L)PTX处理A549和A549/PTX细胞,WB法检测细胞中增殖、迁移与侵袭相关蛋白cyclin D1、p21、MMP2和MMP9的表达水平,MTT法检测PTX对A549/PTX细胞的增殖抑制作用,Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力。用双荧光素酶报告基因实验验证GAS6-AS2和miR-125a-3p之间的调控关系。结果:GAS6-AS2在A549/PTX细胞中表达水平显著高于A549细胞(P<0.01),miR-125a-3p在A549/PTX细胞中表达水平显著低于A549细胞(P<0.01)。不同浓度PTX处理后A549/PTX细胞的增殖抑制率显著低于A549细胞(均P<0.01),且呈浓度依赖性。抑制GAS6-AS2或过表达miR-125a-3p联合PTX处理均可抑制A549/PTX细胞的迁移和侵袭能力,增强PTX对细胞的增殖抑制,上调p21表达量,下调cyclin D1、MMP2和MMP9表达量(均P<0.01)。GAS6-AS2靶向负调控miR-125a-3p的表达。干扰miR-125a-3p可逆转抑制GAS6-AS2对A549/PTX细胞增殖、迁移、侵袭和PTX敏感性的作用(均P<0.01)。结论:抑制GAS6-AS2通过靶向miR-125a-3p抑制肺癌A549/PTX细胞的增殖、迁移和侵袭,增强细胞PTX敏感性,GAS6-AS2是肺癌潜在的分子靶点。

lncRNA CERS6-AS1通过调控miR-138-2-3p抑制人胶质瘤细胞系增殖

目的探讨lncRNA CERS6-AS1对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其可能作用机制.方法qRT-PCR法检测胶质瘤组织、癌旁组织中CERS6-AS1和miR-138-2-3p的表达量;Pearson法分析胶质瘤组织中CERS6-AS1与miR-138-2-3p表达量的相关性;体外培养人胶质瘤细胞T98G,将si-NC、si-CERS6-AS1、miR-NC、miR-138-2-3p mimics、si-CERS6-AS1与anti-miR-NC、si-CERS6-AS1与anti-miR-138-2-3p分别转染至T98G细胞;CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测CERS6-AS1和miR-138-2-3p的靶向关系.结果与癌旁组织比较,胶质瘤组织中CERS6-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-138-2-3p的表达量降低(P<0.05);CERS6-AS1与miR-138-2-3p呈负相关(r=-0.8899,P<0.001);si-CERS6-AS1组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均低于si-NC组(P<0.05);CERS6-AS1可靶向调节miR-138-2-3p的表达;miR-138-2-3p组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均少于miR-NC组(P<0.05);si-CERS6-AS1+anti-miR-138-2-3p组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均比si-CERS6-AS1+anti-miR-NC组增多(P<0.05).结论干扰CERS6-AS1表达可通过调控miR-138-2-3p而抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭.

LncRNA GAS6-AS1靶向miR-324-3p激活Wnt/β-catenin通路调控脑胶质瘤细胞增殖及放疗敏感性的研究

目的研究LncRNA GAS6-AS1对脑胶质瘤T98G细胞增殖及其放疗敏感性的影响。方法RT-qPCR技术分析脑胶质瘤组织、癌旁组织和X射线照射的T98G细胞中LncRNA GAS6-AS1、miR-324-3p基因表达。分别下调T98G细胞中GAS6-AS1或miR-324-3p的表达后,利用X射线照射细胞,分析GAS6-AS1表达下调对T98G细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。miRcode和双荧光素酶报告基因实验检测LncRNA GAS6-AS1和miR-324-3p之间的相互关系。同时上调LncRNA GAS6-AS1与miR-324-3p在T98G细胞中的表达,进一步分析T98G细胞增殖、侵袭和放疗敏感性。Western blot检测miR-324-3p对Wnt/β-catenin通路的影响。分析miR-153-3p通过Wnt/β-catenin通路对T98G细胞增殖、侵袭和放疗敏感性的影响。结果与癌旁正常组织比较,脑胶质瘤组织中LncRNA GAS6-AS1 mRNA表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。2、4、6 Gy X射线照射T98G细胞后中GAS6-AS1 mRNA表达低于0 Gy剂量X射线照射(P<0.05)。下调LncRNA GAS6-AS1表达后,GAS6-AS1 mRNA表达明显降低(P<0.01)。下调GAS6-AS1表达后,T98G细胞活力降低(P<0.01),细胞侵袭数目减少。6 Gy X射线照射细胞后活力明显降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高;下调GAS6-AS1表达后并用6 Gy X射线照射细胞,活力明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高。GAS6-AS1 wt+miR-324-3p mimics组荧光素酶活性显著低于mimics NC+GAS6-AS1 wt组(P<0.01)。与癌旁正常组织比较,脑胶质瘤组织中miR-324-3p mRNA表达显著降低(P<0.01)。2、4、6 Gy X射线照射T98G细胞后中miR-324-3p mRNA表达高于0 Gy剂量X射线照射(P<0.05)。上调GAS6-AS1和miR-324-3p表达后,GAS6-AS1、miR-324-3p mRNA表达明显升高(P<0.01)。与pcDNA-3.1(+)+mimics NC组比较,pcDNA-GAS6-AS1+mimics NC组T98G细胞活力和侵袭数目显著升高(P<0.05),pcDNA-3.1(+)+miR-324-3p mimics组细胞活力和侵袭数目显著降低(P<0.05);与pcDNA-3.1(+)+miR-324-3p mimics组比较,pcDNA-GAS6-AS1+miR-324-3p mimics组细胞活力和侵袭数目显著升高(P<0.05)。与pcDNA-3.1(+)+mimics NC+6 Gy组比较,pcDNA-GAS6-AS1+mimics NC+6 Gy组细胞活力明显上升,细胞凋亡率明显降低(P<0.05);pcDNA-3.1(+)+miR-324-3p mimics+6 Gy组细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显上升(P<0.05);与pcDNA-3.1(+)+miR-324-3p mimics+6 Gy组比较,pcDNA-GAS6-AS1+miR-324-3p mimics+6 Gy组细胞活力明显上升,细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与mimics NC组比较,miR-324-3p mimics组细胞内β-catenin和CyclinD1蛋白表达显著降低,β-catenin/GAPDH、CyclinD1/GAPDH比值显著降低(P<0.01)。与inhibitor NC组比较,miR-324-3p inhibitor组细胞内β-catenin和CyclinD1蛋白表达显著升高,β-catenin/GAPDH、CyclinD1/GAPDH比值显著升高(P<0.01)。与inhibitor NC组比较,miR-324-3p inhibitor转染T98G细胞48 h后增殖活力显著上调(P<0.05),细胞侵袭数目明显增加(P<0.01);与miR-324-3p inhibitor组比较,miR-324-3p inhibitor+XAV939组细胞增殖活力显著降低(P<0.05),细胞侵袭数目明显减少(P<0.01)。用6 Gy X射线照射T98G细胞后,与inhibitor NC组比较,miR-324-3p inhibitor组细胞增殖活力显著上调(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.01),与miR-153-3p inhibitor组相比,miR-153-3p inhibitor+XAV939组细胞增殖活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论LncRNA GAS6-AS1靶向miR-324-3p激活Wnt/β-catenin通路促进了T98G细胞增殖,降低了放疗敏感性。

TNF-α和lncRNA DLX6-AS1在2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清中的表达及诊断价值

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和长链非编码RNA(lncRNA)同源盒转录因子6反义RNA 1(DLX6-AS1)在2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清中的表达水平及诊断价值。方法选取126例2型糖尿病患者为研究对象,根据骨密度(BMD)测定结果分为单纯2型糖尿病组(72例)和2型糖尿病合并骨质疏松症组(54例)。另选取同时期60例健康体检者作为对照组。酶联免疫法检测各组患者血清TNF-α表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血清lncRNA DLX6-AS1表达水平。Pearson相关性分析2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平与临床指标相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析TNF-α和lncRNA DLX6-AS1对2型糖尿病合并骨质疏松症的诊断价值,Logistic回归分析2型糖尿病合并骨质疏松症的影响因素。结果与健康对照组比较,单纯2型糖尿病组和2型糖尿病合并骨质疏松症组患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平均升高(P<0.05)。与单纯2型糖尿病组比较,2型糖尿病合并骨质疏松症组患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平均升高(P<0.05)。2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清TNF-α、lncRNA DLX6-AS1与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均呈正相关(P<0.05),与BMD呈负相关(P<0.05)。与TNF-α或lncRNA DLX6-AS1单独诊断比较,二者联合检测诊断2型糖尿病合并骨质疏松症的灵敏度、特异度及准确度升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,lncRNA DLX6-AS1是2型糖尿病合并骨质疏松症的独立影响因素(P<0.05)。结论TNF-α和lncRNA DLX6-AS1参与2型糖尿病合并骨质疏松症发生发展,可能成为该疾病的诊断指标。

LncRNA DLX6-AS1调控miR-497/HMGA2对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)无远端同源框6反义1(DLX6-AS1)调控miR-497/高迁移率族蛋白A2(HMGA2)分子轴对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:将骨肉瘤MG63细胞分为control组、si-DLX6-AS1组、si-NC组、pcDNA3.1-DLX6-AS1组、pcDNA3.1组、miR-497 mimics组、anti-miR-497组、miR-NC组、anti-miR-NC组、si-DLX6-AS1+anti-miR-497组和si-DLX6-AS1+HMGA2组。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测转染后细胞DLX6-AS1、miR-497和HMGA2表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase3表达。通过双荧光素酶报告实验验证miR-497与DLX6-AS1和HMGA2的靶向关系。结果:与control组比较,si-DLX6-AS1组DLX6-AS1表达和细胞增殖能力降低,细胞凋亡率、miR-497表达升高(P<0.05)。与si-NC组比较,si-DLX6-AS1组PCNA表达降低,cleaved caspase3表达升高(P<0.05)。DLX6-AS1可靶向miR-497并下调其表达,miR-497可负调控HMGA2表达。与si-DLX6-AS1组比较,si-DLX6-AS1+anti-miR-497组或si-DLX6-AS1+HMGA2组HMGA2、PCNA表达水平、细胞增殖能力升高,凋亡率、cleaved caspase3表达降低(P<0.05)。结论:DLX6-AS1可通过下调miR-497/HMGA2分子轴促进骨肉瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡,为骨肉瘤早期诊疗提供潜在分子靶点。

lncRNA SH3BP5-AS1在肝癌中的差异表达及促进肝癌发生机制

目的 探究lncRNA SH3BP5-AS1在肝癌中的差异表达及促进肝癌发生的可能机制。方法 qRT-PCR法检测SH3BP5-AS1在肝癌组织/癌旁组织(n=91)中表达;TCGA数据库可视化软件UALCAN分析SH3BP5-AS1在大样本肝癌组织(n=371)中表达;qRT-PCR检测SH3BP5-AS1在正常肝细胞THLE-2和肝癌细胞系Huh 7、BEL-7405、SNU-387、Hep 3B中表达。siRNA技术沉默SH3BP5-AS1表达后,CCK-8法、细胞克隆形成实验、Edu法检测沉默SH3BP5-AS1对Hep 3B细胞增殖的影响,流式检测沉默SH3BP5-AS1对Hep 3B细胞凋亡、周期的影响。基于肝癌组织中SH3BP5-AS1和TM6SF2表达量,统计并分析表达相关性。结果 SH3BP5-AS1在肝癌组织中高表达;SH3BP5-AS1在TCGA数据库中大样本肝癌组织中高表达;SH3BP5-AS1在不同肝癌细胞系Huh 7、BEL-7405、SNU-387和Hep 3B中均不同程度高表达。siRNA沉默SH3BP5-AS1抑制Hep 3B细胞的增殖能力,促进细胞凋亡能力,影响细胞周期,G_(1)期细胞增多。肝癌组织中SH3BP5-AS1与TM6SF2表达负相关。结论 SH3BP5-AS1是一个重要的促癌非编码RNA,该研究为肝癌患者的肿瘤靶向治疗提供理论基础。

过表达lncRNA ATG16L2-211通过促进lncRNA GAS6-AS1表达抑制肺腺癌细胞的生长和迁移

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)ATG16L2-211在肺腺癌组织和细胞株中的表达, 研究其对肺腺癌细胞生长和迁移的影响及其分子机制。方法本研究为实验室研究。GEPIA在线数据库分析ATG16L2-211在肺腺癌组织中的表达情况。采用实时定量聚合酶链式反应检测ATG16L2-211在肺腺癌细胞株(H1650、A549、H1975、H1299)中的表达情况。将ATG16L2-211序列和阴性对照序列转入H1650细胞, 分别标记为ATG16L2-211组和阴性对照组。CCK-8法检测H1650细胞活力, 细胞划痕实验检测H1650细胞迁移。GEPIA在线数据库分析ATG16L2-211相关性较高的基因。实时定量聚合酶链式反应和Western blot检测ATG16L2-211相关基因的表达。结果 ATG16L2-211在肺腺癌组织中表达低于正常组织(t=48.12, P<0.001)。ATG16L2-211在肺腺癌细胞株中表达均低于正常肺泡上皮细胞(P值均<0.05), H1650细胞中ATG16L2-211表达最低(F=13.79, P<0.001)。与阴性对照组比较, 从2 d开始至5 d ATG16L2-211组H1650细胞增殖活力均降低(P值均<0.05)。阴性对照组和ATG16L2-211组划痕愈合率为(72.15±6.23)%和(21.54±4.08)%, ATG16L2-211组H1650细胞迁移能力降低(t=6.79, P=0.001)。肺腺癌组织中ATG16L2-211和GAS6-AS1表达呈显著正相关(r=0.60, P<0.001)。与阴性对照组比较, ATG16L2-211组H1650细胞中GAS6-AS1表达增加(t=3.37, P=0.015), 葡萄糖转运蛋白1基因表达降低(t=4.33, P=0.005), 转化生长因子β1信号通路蛋白表达降低。结论 ATG16L2-211在肺腺癌组织及细胞株中低表达, 上调ATG16L2-211能通过促进GAS6-AS1表达发挥抑制肺腺癌细胞生长和迁移的作用。