lncRNA HCP5靶向miR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨lncRNA HCP5靶向mlR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR法检测CSCC细胞(SCC13、A431、HSC-5)中HCP5和miR-409-3p的表达情况,筛选用于实验的CSCC细胞。将抑制HCP5表达的质粒si-HCP5及其对照(si-NC)、过表达miR-409-3p的miR-409-3p模拟物及其对照(miR-NC)、抑制HCP5和miR-409-3p的si-HCP5+anti-miR-409-3p及其对照(si-HCP5+anti-miR-NC)分别转染SCC13细胞。采用CCK-8法和Transwell实验检测SCC13细胞增殖、迁移、侵袭能力,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证HCP5和miR-409-3p的靶向关系。结果:SCC13细胞中HCP5表达最高,miR-409-3p表达最低(P<0.05)。抑制HCP5表达后SCC13细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycIinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-409-3p后SCC13细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示lncRNA HCP5和miR-409-3p存在靶向关系。抑制miR-409-3p表达可减弱HCP5低表达对SCC13细胞增殖以及迁移、侵袭能力的影响(P<0.05)。结论:抑制HCP5可通过靶向促进miR-409-3p表达来抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭。

LncRNA HCP5调节miR-27b-3p/H2AFZ轴对口腔鳞状细胞癌增殖侵袭迁移的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)人类白细胞抗原复合物P5(HCP5)通过调节微小RNA(miR)-27b-3p/H2A组蛋白家族成员Z(H2AFZ)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)增殖、侵袭、迁移的影响。方法:收集2021年2月至2022年2月在本院行手术治疗的48例OSCC患者癌组织及邻近癌旁组织、OSCC细胞系(Tca-811、SCC-9、SCC-25、HN4)及人正常口腔角质形成细胞(hNOK),检测LncRNA HCP5、miR-27b-3p、H2AFZ mRNA表达水平;取对数生长期Tca-811细胞,分为对照组、小干扰RNA阴性对照(si NC)组、干扰HCP5表达(si HCP5)组、si HCP5+抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、si HCP5+miR-27b-3p抑制物(miR-27b-3p inhibitor)组。双荧光素酶验证LncRNA HCP5与miR-27b-3p、miR-27b-3p与H2AFZ的靶向关系;qRT-PCR检测LncRNA HCP5、miR-27b-3p、H2AFZ mRNA表达水平;流式细胞仪及MTT法检测Tca-811细胞凋亡及增殖变化;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移变化;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化型半胱天冬酶3(cleaved caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、H2AFZ蛋白表达。结果:与hNOK细胞和癌旁组织比较,OSCC细胞和组织中LncRNA HCP5、H2AFZ mRNA表达升高,miR-27b-3p表达下降(P<0.05)。miR-27b-3p与LncRNA HCP5、H2AFZ均存在靶向关系。si HCP5组细胞凋亡率、cleaved caspase-3、miR-27b-3p表达较si NC组、对照组升高(P<0.05),OD570(24h、48h)、侵袭、迁移细胞数及CyclinD1、MMP-2、HCP5、H2AFZ表达下降(P<0.05);抑制miR-27b-3p表达逆转了干扰HCP5对Tca-811细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。结论:干扰LncRNA HCP5可通过靶向上调miR-27b-3p、抑制H2AFZ表达,进而抑制OSCC的增殖、侵袭、迁移。

类风湿性关节炎患者滑膜组织lncRNA HCP5表达上调并与免疫细胞浸润相关

目的通过机器学习筛选类风湿性关节炎(RA)滑膜中潜在发病相关长链非编码RNA(lncRNA)及与各种免疫细胞浸润的相关性。方法通过基因表达数据集(GEO)数据库获取多个RA滑膜的基因芯片数据,归一化后通过多种机器学习方法筛选并取交集得到关键的lncRNA。使用估计已知RNA转录本的相对子集识别细胞类型(CIBER⁃SORT)算法计算滑膜中22种免疫细胞浸润情况,计算关键lncRNA与免疫细胞的相关性,最后通过实时定量PCR验证关键lncRNA在RA滑膜细胞中表达情况。结果筛选出RA关键lncRNA人类白细胞抗原复合物P5(lncRNA HCP5)。免疫浸润分析显示,在RA滑膜组织中,CD8+T细胞、γδT细胞、M1型巨噬细胞比例升高而M2型巨噬细胞的比例减少。lncRNA HCP5的表达与CD8+T细胞、γδT细胞、M1型巨噬细胞呈正相关。实时定量PCR结果显示在RA滑膜细胞lncRNA HCP5表达上调。结论lncRNA HCP5在RA滑膜细胞表达上调,可能与滑膜免疫细胞的浸润有关。

lncRNA HCP5和miR-140-5p在子宫内膜癌组织中的表达意义

目的检测子宫内膜癌组织中长链非编码RNA人类组织相容性白细胞抗原复合物P5(long non-coding RNA human histocompatibility leukocyte antigen complex P5,lncRNA HCP5)、微小RNA-140-5p(microRNA-140-5p,miR-140-5p)的表达水平,并探讨两者表达的相关性及其在子宫内膜癌组织中的表达意义。方法收集2012年8月至2014年12月期间我院诊治的子宫内膜癌组织92例和正常对照子宫内膜组织80例,采用荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中lncRNA HCP5及miR-140-5p的表达水平;Pearson分析子宫内膜癌组织中lncRNA HCP5与miR-140-5p表达的相关性;t检验分析子宫内膜癌组织中lncRNA HCP5及miR-140-5p的表达与患者临床病理参数的相关性;Log Rank分析lncRNA HCP5及miR-140-5p的表达对子宫内膜癌患者生存期的影响;Cox回归分析影响子宫内膜癌患者独立预后的危险因素。结果与正常子宫内膜组织相比,子宫内膜癌组织中lncRNA HCP5的表达增高(2.10±0.82 vs 1.02±0.49,t=9.12,P=0.001),miR-140-5p的表达降低(1.16±0.42 vs 1.61±0.75,t=4.82,P=0.001)。子宫内膜癌组织中lncRNA HCP5与miR-140-5p的表达呈负相关(r=-0.824,P=0.002)。lncRNA HCP5的表达与子宫内膜癌患者侵犯宫颈管、肌层浸润深度、淋巴结转移和FIGO分期相关(P<0.05)。miR-140-5p的表达与子宫内膜癌患者肌层浸润深度、淋巴结转移和FIGO分期相关(P<0.05)。lncRNA HCP5高表达的子宫内膜癌患者预后差(χ^(2)=3.99,P=0.046),miR-140-5p低表达的子宫内膜癌患者预后差(χ^(2)=4.33,P=0.037)。淋巴结转移、FIGO分期晚期、lncRNA HCP5高表达和miR-140-5p低表达是子宫内膜癌不良预后独立危险因素。结论lncRNA HCP5、miR-140-5p与子宫内膜癌不良病理参数和预后相关,具有作为子宫内膜癌潜在预后分子标志物和治疗靶点。

lncRNA HCP5对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)人类组织相容性白细胞抗原复合物P5(HCP5)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经细胞损伤的影响,并分析其潜在机制。方法将SH-SY5Y细胞分为对照组(CON组,正常培养基培养)、模型组(Model组,进行OGD/R)、干扰对照组[si-NC组,转染HCP5小分子干扰RNA阴性对照(si-NC)后进行OGD/R)]、HCP5干扰组[si-HCP5组,转染HCP5小分子干扰RNA(si-HCP5)后进行OGD/R]、HCP5干扰+抑制剂对照组[si-HCP5+anti-NC组,转染si-HCP5、miR-525-5p抑制剂阴性对照(anti-NC)后进行OGD/R]、HCP5干扰+miR-525-5p抑制剂组[si-HCP5+anti-miR-525-5p组,转染si-HCP5、miR-525-5p抑制剂后进行OGD/R]。qRT-PCR检测细胞中lncRNA HCP5、miR-525-5p的表达;MTT检测SH-SY5Y细胞活性;二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;流式细胞术检测SH-SY5Y细胞凋亡;Western blot检测细胞中BTG2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白的表达。SPSS 25.0软件用于分析数据,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果 6组细胞中lncRNA HCP5、miR-525-5p的RNA水平和BTG2蛋白的表达水平均差异有统计学意义(F=28.853,59.241,13.731,均P<0.001)。Model组lncRNA HCP5水平高于CON组,miR-525-5p水平低于CON组,BTG2蛋白水平高于CON组(均P<0.05);si-HCP5组lncRNA HCP5水平低于Model组,miR-525-5p水平高于Model组,BTG2蛋白水平低于Model组(均P<0.05);si-HCP5+anti-miR-525-5p组lncRNA HCP5水平高于si-HCP5+anti-NC组,miR-525-5p水平低于si-HCP5+anti-NC组,BTG2蛋白水平高于si-HCP5+anti-NC组(均P<0.05)。6组细胞的细胞活性和ROS水平均差异有统计学意义(F=16.180,59.950,均P<0.001)。Model组的细胞活性低于CON组(0.33±0.12,0.63±0.11),ROS水平高于CON组(224.62±23.27,100.00±0.00)(P<0.05);si-HCP5+anti-miR-525-5p组细胞活性低于si-HCP5+anti-NC组(0.38±0.08,0.58±0.08)(P<0.05),ROS水平高于si-HCP5+anti-NC组(207.83±19.39,135.27±14.36)(P<0.05)。6组细胞的凋亡率和凋亡蛋白Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3的表达水平均差异有统计学意义(F=27.994,29.660,45.000,52.983,均P<0.001)。与si-NC组比较、si-HCP5组与si-HCP5+anti-NC组比较,Model组SH-SY5Y细胞中Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3蛋白水平和凋亡率均差异无统计学意义(均P>0.05);与CON组相比,Model组细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著上调(均P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著下调(P<0.05);与Model组、si-NC组相比,si-HCP5组细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著下调(均P<0.05),Bcl-2蛋白水平上调(P<0.05);与si-HCP5组、si-HCP5+anti-NC组相比,si-HCP5+anti-miR-525-5p组细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著上调(均P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著下调(P<0.05)。结论 lncRNA HCP5可能通过靶向上调miR-525-5p来抑制BTG2表达,从而导致OGD/R模型中神经细胞发生凋亡。