lncRNA HOTAIRM1与miR-125b对肝细胞癌生物学行为影响

目的探讨lncRNA HOTAIRM1是否可以通过靶向miR-125b来调节肝细胞癌的生长和转移,研究其表达改变对肝细胞癌生物学行为的影响。方法运用StarBase 2.0数据库预测lncRNA HOTAIRM1的靶向miRNA,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证。通过qRT-PCR检测收集的肝细胞癌患者组织样本、血液样本及肝细胞系中HOTAIRM1和miR-125b的表达情况。同时构建了HOTAIRM1及miR-125b的干扰慢病毒或过表达慢病毒。结果(1)研究发现miR-125b是HOTAIRM1的靶miRNA;(2)我们收集了100例肝细胞癌患者组织样本及108例血液样本,研究发现正常患者血液样本及正常肝组织中HOTAIRM1高表达,肝细胞癌患者血液样本和癌组织中miR-125b高表达,肝细胞系中,LO2细胞中HOTAIRM1高表达,HCC-LM3细胞中miR-125b高表达;(3)分析发现HOTAIRM1和miR-125b的表达情况与患者肿瘤大小及肿瘤数量密切相关。同时发现miR-125b的表达情况还与患者乙肝情况密切相关;(4)用慢病毒转染HEPG2和HCC-LM3细胞,结果表明HOTAIRM1的过表达显着抑制了miR-125b的表达,而HOTAIRM1的下调则反向支持了肝癌细胞中miR-125b的表达;(5)HOTAIRM1和miR-125b过表达共同作用,可以逆转HOTAIRM1单独过表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响,而HOTAIRM1下调和miR-125b过表达共同作用进一步促进肝癌细胞增殖、侵袭和迁移。结论我们研究发现lncRNA HOTAIRM1在肝癌的发生发展过程中是起到抑癌基因的作用,而miR-125b起到癌基因的作用,并且lncRNA HOTAIRM1可以通过靶向miR-125b来调节肝细胞癌的生长和转移,从而为肝癌的治疗提供新的靶标和思路。

lncRNA Hotairm1靶向miR-129-5p对缺氧/复氧大鼠心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOXA转录本反义RNA1(Hotairm1)调控miR-129-5p对缺氧/复氧(H/R)大鼠心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响。方法:体外培养H9c2大鼠心肌细胞,构建心肌细胞H/R模型。实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测H/R诱导后lncRNA Hotairm1和miR-129-5p的表达水平。用脂质体转染技术分别构建抑制lncRNA Hotairm1表达和过表达miR-129-5p的H9c2心肌细胞,H/R诱导后,噻唑蓝(MTT)实验和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况;试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量以及上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;蛋白质印迹法(Western Blot)检测凋亡关键蛋白Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9的表达;用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA Hotairm1是否靶向miR-129-5p,并分析同时抑制lncRNA Hotairm1和miR-129-5p表达对H9c2心肌细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响。结果:H/R诱导后的H9c2细胞lncRNA Hotairm1基因表达量明显增加,miR-129-5p基因表达量明显降低(P<0.05)。与H/R模型组比较,沉默lncRNA Hotairm1或过表达miR-129-5p处理后的H9c2细胞存活率明显提高(P<0.05),凋亡率明显降低(P<0.05),细胞中MDA含量和ROS水平明显降低(P<0.05或P<0.01),LDH活性明显降低(P<0.01),凋亡蛋白Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9的表达量明显减少(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实H9c2细胞中lncRNA Hotairm1靶向负调控miR-129-5p的表达(P<0.05)。抑制miR-129-5p表达能够部分逆转沉默lncRNA Hotairm1对H/R心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响(P<0.05或P<0.01)。结论:沉默lncRNA Hotairm1通过靶向miR-129-5p可减轻H/R诱导的心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,发挥心肌保护作用。

LncRNA-HOTAIRM1下调对Jurkat细胞增殖、凋亡及KIT/AKT通路的影响

目的:观察长链非编码-HOX反义基因间RNA髓样1(LncRNA-HOTAIRM1)下调对人白血病T淋巴细胞Jurkat增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机理。方法:体外培养Jurkat细胞,随机分为对照组、HOTAIRM1siRNA-NC组、HOTAIRM1 siRNA组;利用实时荧光定量PCR法检测转染后各组Jurkat细胞LncRNA-HOTAIRM1mRNA、KIT受体酪氨酸激酶(KIT) mRNA、丝氨酸-苏氨酸激酶(AKT) mRNA的表达情况;采用CCK-8法检测各组Jurkat细胞的增殖情况;利用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组Jurkat细胞的凋亡情况;采用蛋白印迹分析法检测KIT、AKT、p-KIT、p-AKT、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)及半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase-3)蛋白表达的情况。结果:与对照组和HOTAIRM1 siRNA-NC组相比,HOTAIRM1 siRNA组Jurkat细胞LncRNA-HOTAIRM1 mRNA表达水平、细胞存活率、KIT mRNA、AKT mRNA、p-KIT、p-AKT及BCL-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),Cleared Caspase-3蛋白表达水平、Jurkat细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:LncRNA-HOTAIRM1可能通过KIT/AKT信号通路,抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡。

血浆LncRNA-HOTAIRM1表达水平与肺癌发病风险的关联分析

目的探讨血浆长链非编码RNA HOTAIRM1(LncRNA-HOTAIRM1)表达水平与肺癌发病风险的关系及其在肺癌诊断中的价值。方法收集2016年5月至2018年6月竹溪县中医院收治的136例肺癌患者(病例组)和136名健康体检人群(对照组)外周血样本,通过荧光定量PCR检测所有研究对象血浆中LncRNA-HOTAIRM1表达情况,比较分析血浆LncRNA-HOTAIRM1表达水平与肺癌发病风险的关系,并分析其与肺癌患者临床参数之间的关系;同时,收集18例肺癌患者术后7 d血浆标本,分析同一患者术前、术后血浆LncRNA-HOTAIRM1表达变化;另外,绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析血浆LncRNA-HOTAIRM1表达水平在肺癌诊断中的价值。结果病例组患者血浆LncRNA-HOTAIRM1表达水平显著低于对照组[(0.105±0.056)vs.(0.155±0.052),P<0.001],晚期患者(TNM分期为Ⅲ期和Ⅳ期)血浆LncRNA-HOTAIRM1的表达水平显著低于早期患者(TNM分期为Ⅰ期和Ⅱ期)[(0.064±0.02)vs.(0.127±0.05),P=0.009],术后肺癌患者血浆LncRNA-HOTAIRM1表达水平较术前显著增高[(0.165±0.06)vs.(0.119±0.043),P=0.005]。以健康人群为参照,与LncRNA-HOTAIRM1表达高的个体相比,血浆LncRNA-HOTAIRM1表达低的个体肺癌发病风险显著上升(校正比值为2.46,95%可信区间为1.49~4.04),且血浆LncRNA-HOTAIRM1表达水平降低与肺癌发病风险升高之间存在显著的剂量依赖关系(P<0.001)。用传统肺癌标志物CEA、SCCA、CYFRA21-1和LncRNA-HOTAIRM1诊断肺癌的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.623、0.655、0.684和0.788,联合LncRNA-HOTAIRM1与传统肺癌标志物可显著提高单个标志物诊断肺癌的效力(AUC为0.849,95%可信区间为0.802~0.895,P=0.007)。结论血浆LncRNA-HOTAIRM1表达水平降低与肺癌发病风险升高呈显著正相关,可辅助传统肺癌标志物用于肺癌早期诊断。

HOTAIRM1靶向miR-129-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:研究长链非编码RNA HOTAIRM1(lncRNA HOTAIRM1)与微小RNA-129-5p(miR-129-5p)的靶向关系及其对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:荧光定量PCR(qPCR)检测HOTAIRM1和miR-129-5p在人正常脑组织和胶质瘤组织中的表达。建立抑制HOTAIRM1表达细胞株,研究其对U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)、上皮钙黏素(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)水平。生物学信息预测和双荧光素酶报告基因法分析HOTAIRM1和miR-129-5p之间的靶向关系。共转染si-HOTAIRM1和anti-miR-129-5p,观察抑制miR-129-5p表达对抑制HOTAIRM1表达诱导的U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果:HOTAIRM1在胶质瘤组织中的表达明显上调(P<0.05),miR-129-5p表达下调(P<0.05)。抑制HOTAIRM1表达显著降低U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量(P<0.05),明显增加U251细胞凋亡率和p21、Bax、E-cadherin蛋白表达量(P<0.05)。miR-129-5p是HOTAIRM1的靶基因。上调或下调HOTAIRM1表达明显调控miR-129-5p表达(P<0.05)。抑制miR-129-5p表达逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、MMP-2、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,并逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞p21、E-cadherin、Bax蛋白表达和细胞凋亡率的促进作用。结论:lncRNA HOTAIRM1通过靶向miR-129-5p影响胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。