lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探究长链非编码RNA(long-nocoding RNA,lncRNA)HOXA11-AS在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:采用2012年1月至2015年12月浙江省人民医院骨外科13例骨肉瘤组织及癌旁正常组织,以及骨肉瘤细胞系MG63、U20S和人成骨细胞株h FOB1.19,用实时荧光定量PCR检测骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系MG63和U20S中lncRNA HOXA11-AS的表达水平。用慢病毒载体构建稳定过表达lncRNA HOXA11-AS的骨肉瘤MG63及U20S细胞,用CCK-8和克隆形成实验、Transwell小室法分别检测过表达lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。建立过表达lncRNA HOXA11-AS MG63骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤模型,以空载体慢病毒Lv-NC转染的细胞作为对照,观察过表达lncRNA HOXA11-AS对裸鼠移植瘤生长的影响。结果:lncRNA在骨肉瘤组织和MG63及U20S细胞中表达水平显著下调(P<0.01)。与h FOB1.19细胞比,过表达lncRNA HOXA11-AS细胞后,(1)显著抑制骨肉瘤MG63及U20S细胞的增殖[(4.03±0.98)vs(6.96±0.54),(4.68±0.77)vs(8.87±1.23),均P<0.01]、迁移细胞数[(83.00±6.03)vs(168±12.54),(96.00±8.77)vs(184.00±14.63)个,均P<0.01]和侵袭细胞数[(35.00±3.48)vs(97.00±8.32),(38.00±1.73)vs(87.00±6.37)个,均P<0.01];(2)显著抑制骨肉瘤裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0.01)。结论:lncRNA HOXA11-AS在骨肉瘤细胞中低表达,且lncRNA HOXA11-AS过表达对骨肉瘤的发生发展具有抑制作用,可以作为骨肉瘤治疗潜在的分子靶点。

右美托咪定通过调控LncRNA HOXA11-AS/miR-515-5p抑制膀胱癌细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的探讨右美托咪定(Dex)通过调控长链非编码RNA HOXA11-AS(LncRNA HOXA11-AS)/微小RNA-515-5p(miR-515-5p)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法采用不同浓度(25、50、100、200 ng/ml)的Dex处理膀胱癌T24细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;流式细胞术检测Dex对T24细胞凋亡率的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Dex对HOXA11-AS、miR-515-5p表达水平的影响。利用脂质体方法分别将si-HOXA11-AS及阴性对照(si-NC)、miR-515-5p模拟物(mimics)及阴性对照(miR-NC)转染至T24细胞,通过MTT、流式细胞术检测细胞增殖与凋亡能力变化。双荧光素酶报告实验确定HOXA11-AS与miR-515-5p的靶向关系。Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(C-caspase)-3表达量。结果Dex可明显提高细胞凋亡率及C-caspase-3、miR-515-5p的表达水平(P<0.05),明显降低HOXA11-AS的表达水平(P<0.05);抑制HOXA11-AS表达与miR-515-5p过表达后,细胞存活率及CyclinD1的表达水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率及C-caspase-3的表达水平明显升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证明HOXA11-AS可靶向结合miR-515-5p;HOXA11-AS过表达可逆转Dex对T24细胞增殖和凋亡的影响;miR-515-5p过表达可逆转HOXA11-AS过表达对Dex处理的T24细胞增殖和凋亡的影响。结论Dex通过下调HOXA11-AS及上调miR-515-5p抑制膀胱癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。

茯苓多糖通过LncRNA HCG11/miR-539-3p调控肝癌细胞自噬、化疗耐药的机制

目的:探讨茯苓多糖(Poria cocos polysaccharide,PCP)对肝癌细胞增殖、自噬和化疗耐药的影响及机制。方法:对数期HepG-2/DDP细胞随机分组:对照组、PCP组(7.5、15、30μg/mL PCP)、shNC组、HCG11siRNA组(转染50 nmol/L HCG1干扰序列)、pcDNA组(转染2μg pcDNA)、pcDNA3.1-HCG11组(转染2μg pcDNA3.1-HCG11)、PCP组(30μg/mL)和PCP+pcDNA3.1-HCG11组(转染2μg pcDNA3.1-HCG11+30μg/mL PCP)。MTT检测肝癌细胞耐药情况和抑制率,Western blot检测Beclin-1、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ水平,实时荧光定量PCR(Real time quantitative PCR,qRT-PCR)检测细胞株中LncRNA HCG11和miR-539-3p的水平,双荧光素酶报告实验检测LncRNA HCG11和miR-539-3p的靶向关系,裸鼠成瘤实验验证体内瘤体的瘤重、瘤体积及自噬相关蛋白水平。结果:4~128μg/mL PCP抑制HepG-2/DDP细胞增殖,7.5、15、30μg/mL的PCP能显著降低HepG-2/DDP细胞中MRP1、P-gp、Beclin-1、LC3Ⅱ的水平,下调HCG11水平,增加miR-539-3p的表达水平(P<0.01);与对照组比较,HCG11 siRNA组HepG-2/DDP细胞HCG11相对表达水平、IC_(50)(顺铂)、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著降低,miR-539-3p水平和抑制率(顺铂)显著增加(P<0.01);与PCP组比较,PCP+pcDNA3.1-HCG11处理组HCG11相对表达水平显著升高,Belin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著增加(P<0.01);在不同浓度的顺铂处理下,与PCP组比较,PCP+pcDNA3.1-HCG11组抑制率显著降低(P<0.01);与PCP组比较,PCP+HCG11 shRNA组肿瘤体积和肿瘤重量显著降低,Belin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平显著下调(P<0.05)。结论:PCP能通过LncRNA HCG11/miR-539-3p调控耐药和自噬,并影响肝癌细胞的增殖。

循环外泌体介导的lncRNA HOXA11-AS通过上调SOX4促进血管内皮细胞增殖

目的:探索循环外泌体对内皮细胞增殖能力的影响及其可能机制。方法:收集支架内再狭窄患者(n=199)及对照组患者(n=32)血浆并提取外泌体,用患者血浆外泌体干预经雷帕霉素诱导的内皮细胞增殖抑制模型,MTT法测各组细胞的增殖能力,Western blot检测细胞中PCNA、Ki67的表达情况。基因芯片检测两组外泌体中差异的非编码RNA,qRT-PCR检测lncRNA HOXA11-AS表达情况。结果:与对照组比,雷帕霉素组细胞增殖能力减弱;PCNA、Ki67表达减少(P<0.05);相比于雷帕霉素组,对照组外泌体干预后内皮细胞增殖能力增强;PCNA、Ki67表达增加(P<0.05)。芯片结果显示lncRNA HOXA11-AS在ISR外泌体中表达减少(P<0.05)。pHOXA11-AS可以促进内皮细胞的增殖能力,增加细胞中PCNA、Ki67、SOX4的表达(P<0.05)。结论:血浆外泌体中的lncRNA HOXA11-AS可能是通过上调内皮细胞中SOX4的表达,增加内皮细胞的增殖能力。

lncRNA HOXA11-AS对膀胱尿路上皮癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的:研究lncRNA HOXA11-反义RNA(HOXA11-AS)对膀胱尿路上皮癌J82细胞增殖、侵袭迁移的影响及与微小RNA-515-5p(miR-515-5p)之间的调控关系。方法:qRT-PCR检测膀胱尿路上皮癌组织、癌旁组织和J82细胞中HOXA11-AS和miR-515-5p的转录水平,MTT法和Transwell实验检测J82细胞的增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞中Cyclin D1、p21、p27、MMP-2、MMP-9和MMP-14的表达,双荧光素酶报告系统验证HOXA11-AS和miR-515-5p的结合关系。结果:与正常癌旁组织相比,膀胱尿路上皮癌组织中HOXA11-AS含量显著升高(P<0.05),miR-515-5p的含量显著下降(P<0.05);干扰HOXA11-AS表达可以抑制膀胱尿路上皮癌J82细胞增殖、迁移和侵袭,使Cyclin D1、MMP-2、MMP-9和MMP-14表达下降,p21和p27表达升高;过表达miR-515-5p抑制J82细胞增殖、迁移和侵袭;HOXA11-AS靶向负调控miR-515-5p的表达;抑制miR-515-5p表达可逆转干扰HOXA11-AS表达对J82细胞增殖、迁移和侵袭的作用。结论:LncRNA HOXA11-AS通过靶向miR-515-5p抑制膀胱尿路上皮癌J82细胞增殖、迁移和侵袭。LncRNA HOXA11-AS是膀胱尿路上皮癌的潜在靶点。

lncRNA HOXA11-AS通过EZH2/TFPI2途径调控OSCC的机制研究

目的:探究lncRNA-(HOXA11-AS)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及作用机制。方法:用检测OSCC患者和SCC-25细胞中HOXA11-AS和组织因子途径抑制剂2(TFPI2)的表达;对SCC-25细胞转染si-HOXA11-AS或TFPI2,用CCK-8、Transwell和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Western bolt检测组蛋白甲基化转移酶(EZH2)和TFPI2蛋白水平,RIP检测HOXA11-AS与EZH2蛋白相互作用,ChIP检测EZH2在TFPI2启动子区的富集。结果:在OSCC中HOXA11-AS表达上调,TFPI2下调;沉默HOXA11-AS或过表达TFPI2抑制SCC-25细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。HOXA11-AS主要在细胞核中,可以与EZH2蛋白结合将其募集到TFPI2启动子区,抑制TFPI2转录。结论:HOXA11-AS通过EZH2沉默TFPI2,促进OSCC细胞增殖、侵袭,抑制细胞凋亡。

干扰lncRNA HOXA-AS3负调控miR-340-5p对小细胞肺癌细胞DMS114/DDP顺铂耐药性的影响

目的探讨长链非编码RNA HOXA-AS3(lncRNA HOXA-AS3)对小细胞肺癌耐药性细胞DMS114/DDP的影响及其对微小RNA-340-5p(miR-340-5p)的调控作用。方法采用qRT-PCR法检测肺癌组织及癌旁组织中HOXA-AS3、miR-340-5p的表达量;体外培养小细胞肺癌细胞DMS114,采用顺铂浓度递增法建立耐药细胞DMS114/DDP,分别将si-NC、si-HOXA-AS3、si-HOXA-AS3与anti-miR-NC、si-HOXA-AS3与anti-miR-340-5p转染至DMS114/DDP细胞;采用qRT-PCR法检测细胞中HOXA-AS3、miR-340-5p的表达量;采用CCK-8法检测细胞存活率及计算顺铂IC_(50)值;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测HOXA-AS3、miR-340-5p的靶向关系。结果肺癌组织中HOXA-AS3的表达水平升高(P<0.05),miR-340-5p的表达水平降低(P<0.05);不同浓度的顺铂处理后DMS114细胞、DMS114/DDP细胞存活率逐渐降低(P<0.05),且DMS114/DDP细胞IC_(50)值高于DMS114细胞(P<0.05);与DMS114细胞比较,DMS114/DDP细胞中HOXA-AS3的表达水平升高(P<0.05);转染si-HOXA-AS3可明显降低细胞活力(P<0.05),提高凋亡率(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实HOXA-AS3可靶向结合miR-340-5p;共转染si-HOXA-AS3与anti-miR-340-5p可明显提高细胞活力(P<0.05),降低凋亡率(P<0.05)。结论干扰HOXA-AS3表达可抑制细胞增殖及促进细胞凋亡进而增强DMS114/DDP细胞顺铂敏感性,其作用机制可能与上调miR-340-5p的表达有关。

lncRNA HOXA11-AS抑制骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡与基质降解的作用研究

目的研究长链非编码RNA(long-nocoding RNA,lncRNA)HOXA11-AS在骨关节炎(osteoarthritis,OA)的大鼠软骨细胞中的表达情况,及其对软骨细胞凋亡、基质降解以及核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路的影响。方法采用弗氏完全佐剂注射大鼠构建OA大鼠模型,造模后分离培养软骨细胞;小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术抑制软骨细胞中HOXA11-AS表达;细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测转染siRNA不同时间后软骨细胞的活力;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测软骨细胞中HOXA11-AS及基质金属蛋白酶13(matrix metallo protein-13,MMP-13)、血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶5(a disintesrin and metalloprotease with thrombospondin type 5 motifs,ADAMTS-5)、Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)mRNA的表达情况;流式细胞术检测软骨细胞的凋亡情况;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)检测软骨细胞上清液中Bcl-2相关X蛋白(Bcl 2-associated X protein,Bax)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达情况;蛋白质印迹法(western blot)检测MMP-13、ADAMTS-5、CollagenⅡ、aggrecan和抗核因子κB抑制蛋白(anti-nuclear factor kappa B inhibitory protein,IκBα)、抗磷酸化核因子κB抑制蛋白(anti-phosphorylated nuclear factor kappa B inhibitory protein,p-IκBα)、抗核因子κB 65(nuclear factor kappa B,NF-κB 65)的表达,免疫荧光染色检测NF-κB在软骨细胞细胞核中的表达情况。结果与正常组大鼠软骨细胞相比,HOXA11-AS在OA大鼠软骨细胞中高表达;与NC siRNA组比较,HOXA11-AS siRNA组细胞活力显著下降,细胞凋亡率及促凋亡因子Bax、Caspase-3的表达水平显著升高,而抑凋亡因子Bcl-2的表达水平显著下降;同时,与NC siRNA组比较,HOXA11-AS siRNA组细胞collagenⅡ和aggrecan的基因和蛋白表达水平明显降低,MMP-13和ADAMTS-5基因及蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平显著下降而p-IκBα和NF-κB p65的表达水平显著增高,此外,NF-κB在HOXA11-AS siRNA组细胞核中明显表达。结论lncRNA HOXA11-AS可以抑制骨关节炎大鼠软骨细胞的凋亡以及基质降解,并阻止NF-κB信号通路的激活。

lncRNA HOXA⁃AS2在胰腺癌组织中的表达及对细胞增殖和侵袭力的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOXA簇反义RNA2(HOXA⁃AS2)在胰腺癌组织中表达,以及沉默该基因对胰腺癌细胞增殖和侵袭力的影响。方法选取2015年8月至2020年8月在我院行根治性手术治疗的胰腺癌患者97例,培养人胰腺癌PANC⁃1和AsPC⁃1细胞并分别分为si⁃HOXA⁃AS2组、si⁃Con组和空白组,分别转染干扰序列、阴性对照序列和不作任何处理,使用RT⁃PCR检测胰腺癌和癌旁组织中HOXA⁃AS2表达,以及不同组细胞中HOXA⁃AS2表达,分别使用CCK⁃8和Transwell法检测细胞增殖活性及细胞侵袭力。结果HOXA⁃AS2在胰腺癌组织中表达量为(2.21±0.20),高于癌旁组织的(1.03±0.14),差异有统计学意义(t=48.030,P<0.001);胰腺癌组织中HOXA⁃AS2表达量在不同TNM分期、分化程度和是否发生淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.05);PANC⁃1和AsPC⁃1细胞中,与si⁃Con组和空白组比较,si⁃HOXA⁃AS2组HOXA⁃AS2表达量明显降低(P<0.05),si⁃HOXA⁃AS2组24、48、72和96 h时吸光度OD值均低于si⁃Con组和空白组(P<0.05),si⁃HOXA⁃AS2组侵袭细胞数均低于si⁃Con组和空白组(P<0.05)。结论HOXA⁃AS2在胰腺癌组织中表达量升高,且与恶性进展临床指标相关,沉默其表达可减少细胞增殖、抑制细胞侵袭力。

种植窗口期人子宫内膜组织中ER、PR及HOXA-11的表达

目的:探讨雌孕激素受体(ER、PR)及同源框基因-11(HOXA-11)在人子宫内膜种植窗口期的表达。方法:采用免疫组化和RT-PCR方法检测ER、PR及HOXA-11在拟行IVF-ET患者排卵后子宫内膜种植窗口期的表达。按IVF-ET后是否妊娠将153例因输卵管因素不孕的患者分为未妊娠组(n=86)和妊娠组(n=67)。结果:免疫组化结果显示PR和HOXA-11在妊娠组腺上皮细胞中的表达均低于未妊娠组(P均<0.001),在间质细胞中的表达均高于未妊娠组(P均<0.001)。RT-PCR结果显示妊娠组子宫内膜ER、PR及HOXA-11 mRNA的相对表达量均高于未妊娠组(P均<0.05)。P水平与腺上皮、间质PR及腺上皮HOXA-11蛋白表达有关(P均<0.05)。结论:种植窗口期内膜腺上皮PR、HOXA-11表达下调和间质细胞PR、HOXA-11表达上调的失败可能是导致子宫内膜容受性下降的原因之一。

HOXA11在人子宫内膜和早孕蜕膜中的表达及与不育的关系

目的检测HOXA11蛋白在正常月经周期子宫内膜、早孕蜕膜和不明原因不育子宫内膜组织中的表达,探讨HOXA11与不明原因不育及雌孕激素受体(ER、PR)表达的相关性。方法采用免疫组织化学和Western-Blot方法对38例正常子宫内膜、15例早孕蜕膜和19例不明原因不育子宫内膜组织中HOXA11、ER及PR的表达。结果HOXA11蛋白在子宫内膜腺上皮和基质细胞均有表达,以分泌中晚期子宫内膜和早孕蜕膜表达量较高;在不育内膜的表达量显著降低(P<0.05);ER、PR在各组表达量的变化与HOXA11相同,即分泌中晚期子宫内膜和早孕蜕膜的表达量较高,而在不育内膜的表达量显著下降(P<0.05)。结论HOXA11基因在着床期子宫内膜的分化、发育以及着床后妊娠的维持起一定作用;HOXA11表达量下降与ER、PR表达量降低相关;HOXA11表达下降或缺失可能是女性不明原因不育的原因之一。

月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达的差异

目的:探讨HOXA11在月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞中的表达规律及其生理意义。方法:免疫组织化学方法观察38例子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11蛋白质的表达;用细胞分离筛选法,分离出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,采用半定量RT-PCR和Dot-blot方法分别观察HOXA11在腺上皮和基质细胞中的表达。结果:腺上皮细胞HOXA11在分泌中晚期表达量较增生期和分泌早期显著降低;基质细胞HOXA11的表达从增生期到分泌期逐渐增加,以分泌中晚期表达量最高。结论:内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达在分泌中晚期变化最显著,而且其表达量呈反相变化,即腺上皮表达量下降,基质细胞表达量增加。提示HOXA11基因与着床期子宫内膜的分化、成熟密切相关;其对内膜腺上皮和基质细胞的调控机制可能不尽相同。

HOXA11-AS在胃癌中的表达及其功能研究

目的探讨长链非编码HOXA11-AS在胃癌及癌旁正常组织中的表达及其在胃癌细胞系中的生物学功能。方法实时荧光定量PCR验证胃癌组织及胃癌细胞系中HOXA11-AS的表达量;核质分离实验及荧光定量PCR检测胃癌细胞胞核与胞质中HOXA11-AS的分布量,明确HOXA11-AS的亚细胞定位;用慢病毒构建HOXA11-AS过表达质粒,筛选稳转株进行细胞功能学实验:细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期、细胞迁移能力、细胞侵袭能力。结果 HOXA11-AS在胃癌组织及胃癌细胞的表达量升高(P<0.05);核质分离实验表明,HOXA11-AS在胃癌细胞胞质的分布量高于细胞核(P<0.05);过表达lncRNA HOXA11-AS可促进胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05),抑制细胞凋亡及阻滞细胞周期。结论 HOXA11-AS在胃癌中高表达,可促进胃癌细胞的肿瘤细胞行为,可作为胃癌治疗的候选分子靶点。

原位杂交检测同源框基因HoxA11在人月经周期子宫内膜的表达

了解 Hox A1 1基因在人月经周期子宫内膜的表达及变化 ,探索该基因对正常内膜周期的调节功能。应用地高辛标记的 RNA探针进行原位杂交。 Hox A1 1基因主要在内膜间质细胞中表达 ,增殖期与分泌期比较未见明显差异。腺上皮细胞中 Hox A1 1基因的表达量虽较间质细胞少 ,但有明显的周期性变化 ,以增生殖期腺上皮细胞表达量较高 ,分泌早期开始下降 ,到分泌中晚期表达量极低或不表达。Hox A1 1基因在月经周期人子宫内膜中的这种表达时空的变化与孕酮受体 (PR)非常相似 ,提示 Hox A1 1基因的表达与卵巢激素及其受体的调控有着密切的关系 ,Hox A1 1在分泌中期内膜腺上皮中表达下降是内膜分化的重要指标志。

HOXA-10、HOXA-11、Esr2、Pgr在控制性超排卵小鼠围着床期子宫内膜表达的研究

目的:检测同源框基因HOXA-10、HOXA-11以及雌激素受体Esr2、孕激素受体Pgr在控制性超排卵(COH)小鼠围着床期子宫内膜中的表达,探讨COH对子宫内膜容受性的影响。方法:将30只SPF级雌性昆明小鼠随机分为模型组(GnRH-a+HMG+HCG)和对照组(生理盐水),每组15只,造模成功后,计算子宫脏器指数,光学显微镜观察子宫内膜组织学变化;应用RT-PCR和Real-time PCR方法检测小鼠子宫内膜中HOXA-10、HOXA-11、Esr2、Pgr mRNA的表达。结果:模型组围着床期小鼠子宫脏器指数较对照组显著降低(P<0.05),子宫内膜发育延迟,子宫内膜成熟度及厚度降低;模型组小鼠HOXA-10、HOXA-11、Pgr mRNA表达较对照组显著下降(P<0.05),而Esr2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论:COH引起HOXA-10、HOXA-11、Pgr mRNA表达下降,Esr2mRNA表达升高,致使围着床期内膜准备不足,子宫内膜容受性下降。

利用酵母双杂交技术筛选与转录因子HOXA11相互作用蛋白

目的：利用酵母双杂交技术从均一化的人肾透明细胞腺癌c DNA文库中筛选与转录因子HOXA11相互作用的蛋白。方法：培养人肾透明细胞腺癌细胞,提取RNA,采用SMART技术制备均一化的人肾透明细胞腺癌c DNA文库。同时,聚合酶链反应扩增人HOXA11基因片段（1～846 bp）,将此基因片段重组入p GBKT7载体,构建诱饵质粒p GBKT7-HOXA11,经酶切和测序验证质粒构建正确。将诱饵质粒转化酵母菌AH109,检测其有无毒性与自激活作用。随后,利用酵母双杂交系统从c DNA文库中筛选与HOXA11相互作用的蛋白。对筛选到的阳性克隆进行回转验证以及测序分析。结果：成功构建了人肾透明细胞腺癌c DNA文库和p GBKT7-HOXA11诱饵质粒。在AH109酵母细胞中,该质粒无毒性、无自激活作用。酵母双杂交筛选获得了5个与HOXA11相互作用阳性克隆。结论：获得人肾透明细胞腺癌细胞中与HOXA11相互作用蛋白,为进一步研究HOXA11在个体发育以及癌症发生发展中的作用机制奠定了基础。

HOXA-11基因与不孕及妊娠失败关系的研究

目的 :研究HOXA 11基因与不孕及妊娠失败的关系。方法 :选择 4 1例不明原因不孕症患者及 30例难免流产患者 ,同时选择 2 8例正常未孕者及 18例正常早期妊娠者分别作为对照组 ,留取子宫内膜或蜕膜组织。子宫内膜标本通过组织学检查分为增生期或分泌期。难免流产及正常妊娠组均妊娠 6～ 9周。采用原位杂交方法检测所有子宫内膜或蜕膜组织中的HOXA 11基因mRNA的表达。结果 :整个月经周期子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞中均有HOXA 11基因mRNA表达 ,并因月经周期不同而有所波动。HOXA 11基因mRNA在分泌中晚期子宫内膜间质细胞中阳性表达率为 10 0 % ,在增生期子宫内膜间质细胞中的阳性表达率为 6 3.6 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;在不明原因不孕症患者中HOXA 11基因失去了它在正常子宫内膜表达的周期性变化 ,而且基因表达缺失明显。HOX A 11基因在正常增生期及分泌期子宫内膜腺上皮细胞或间质细胞中的阳性表达率分别为90 .9%、82 .4 %和 6 3.6 %、10 0 % ,在不孕症增生期及分泌期子宫内膜两种细胞的阳性表达率分别为 38.9%、4 7.8%和 2 2 .2 %、39.1% ,两组分别比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ;HOXA 11基因在正常早期妊娠蜕膜细胞中持续表达 ,其阳性表达率均为 10 0 % 。

HOXA11在子宫内膜单纯性增生和内膜癌中表达增加

目的探讨HOXA11基因在子宫内膜单纯性增生和子宫内膜癌中表达的意义,以及与雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progestogene receptor,PR)表达的关系。方法用免疫组化法检测增生期子宫内膜、子宫内膜单纯性增生及子宫内膜癌组织中HOXA11、ER及PR蛋白的表达。结果在子宫内膜单纯性增生和内膜样腺癌中,HOXA11的表达明显高于增生期子宫内膜(P<0.05),而ER、PR的表达明显低于增生期内膜(P<0.05)。结论HOXA11的过度表达可能参与了子宫内膜异常增生或癌变的过程;这种效应可能与ER、PR表达下降相关。

人工干预对反复种植失败患者着床窗口期子宫内膜组织中LPAR3和HOXA-11表达的影响

目的:探讨对反复种植失败(RIF)患者进行人工干预后,着床窗口期子宫内膜组织中溶血磷脂酸受体3(LPAR3)和同源框基因11(HOXA-11)表达变化对临床结局的影响。方法:将92例因输卵管因素不孕的RIF患者分为搔刮组(子宫内膜搔刮,n=31)、中成药组(调经促孕丸,n=31)、未干预组(n=30)。采用RT-PCR和Western blot方法检测3组患者窗口期子宫内膜组织中LPAR3和HOXA-11 mRNA和蛋白表达的情况,并观察3组患者临床妊娠率的差异。结果:搔刮组、中成药组患者窗口期子宫内膜组织中LPAR3和HOXA-11 mRNA及蛋白表达量高于未干预组,差异有统计学意义(F=57.463和60.771,P<0.001;F=48.816和40.313,P<0.001),而前两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。搔刮组、中成药组复苏周期临床妊娠率分别是48.4%和32.3%,均高于未干预组(16.7%),差异有统计学意义(χ2=6.908,P=0.032),但前两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:子宫内膜搔刮术和口服调经促孕丸2种干预措施均可以改善子宫内膜容受性,提高RIF患者的临床妊娠率。

HOXA11基因在生殖过程中的作用

同源框基因是一类控制胚胎发育和细胞分化的调节基因。其家族成员之一HOXA11参与雌性生殖系统的发育,构建正常形态的子宫内膜,影响子宫内膜容受性,并与雄性不育相关。