lncRNA HOXC13-AS调控miR-204-5p对食管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)同源盒基因C13反义RNA(HOXC13-AS)对食管癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨其潜在分子机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测食管癌组织和相应癌旁组织中lncRNA HOXC13-AS表达水平。将食管癌细胞Eca-109分为si-NC组、si-HOXC13-AS组、si-HOXC13-AS+anti-miR-NC组、si-HOXC13-AS+anti-miR-204-5p组。集落形成实验、流式细胞术分析细胞克隆形成能力、凋亡以及周期分布。免疫印迹法(Western blot)检测半胱氨酸蛋白酶3前体(pro-caspase3)和裂解的caspase3(Cleaved-caspase3)蛋白表达。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证HOXC13-AS对miR-204-5p的调控作用。结果食管癌组织中HOXC13-AS表达较癌旁组织显著升高(P<0.05)。与si-NC组比较,si-HOXC13-AS组Eca-109细胞克隆形成数、S期细胞比例、pro-caspase3蛋白表达显著降低,凋亡率、G0-G1期细胞比例、Cleaved-caspase3蛋白以及miR-204-5p表达显著升高(P<0.05)。与si-HOXC13-AS+anti-miR-NC组比较,si-HOXC13-AS+anti-miR-204-5p组Eca-109细胞克隆形成数、S期细胞比例、pro-caspase3蛋白表达显著升高,凋亡率、G0-G1期细胞比例、Cleaved-caspase3蛋白表达显著降低(P<0.05)。miR-204-5p是HOXC13-AS的靶基因。结论干扰lncRNA HOXC13-AS通过负调控miR-204-5p能够抑制食管癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。

LncRNA HOXC13-AS靶向miR-634对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)HOXC13-AS(LncRNA HOXC13-AS)对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法收集20例子宫内膜癌组织标本及20例癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HOXC13-AS、微小RNA(miR)-634在子宫内膜癌组织及癌旁组织中的差异表达;以子宫内膜癌Ishikawa细胞为研究对象,噻唑蓝(MTT)、流式细胞术、Transwell检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证HOXC13-AS、miR-634的靶向作用;Western印迹法检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果相较于癌旁组织,HOXC13-AS在子宫内膜癌组织显著高表达(P<0.05),而miR-634显著低表达(P<0.05);HOXC13-AS敲除抑制细胞活力、迁移与侵袭,诱导CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9的表达水平显著降低(P<0.05)及细胞凋亡率及p21和Bax表达水平显著升高(P<0.05);miR-634过表达与抑制HOXC13-AS表达对细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响相同;miR-634可显著抑制野生型载体WT-HOXC13-AS细胞的荧光素酶活性(P<0.05),且HOXC13-AS可负向调控miR-634的表达(P<0.05);干扰miR-634表达可逆转抑制HOXC13-AS对Ishikawa细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用。结论LncRNA HOXC13-AS可靶向调节miR-634调控子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭行为。

lncRNA HOXC13-AS在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的:探究反义长链非编码RNA HOXC13-AS(lncRNA HOXC13-AS)在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法:选取2012年9月至2014年5月本院进行手术切除的73例宫颈癌患者作为研究对象,将切除的癌组织作为试验组,同时取同一患者的癌旁(距肿瘤边缘>2 cm)组织作为对照组。用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA HOXC13-AS表达情况;分析lncRNA HOXC13-AS与宫颈癌病理特征的关系;分析lncRNA HOXC13-AS表达情况对宫颈癌患者5年生存情况的影响;Cox回归分析影响宫颈癌的预后因素。结果:试验组HOXC13蛋白阳性率明显高于对照组(P<0.05);试验组lncRNA HOXC13-AS表达明显高于对照组(P<0.05);宫颈癌患者癌组织中lncRNA HOXC13-AS表达与患者年龄、肿瘤直径、病理类型及分化程度无关(P>0.05),与淋巴结是否转移、肌层浸润深度和FIGO分期有关(P<0.05);绘制宫颈癌患者术后1~60个月生存曲线,lncRNA HOXC13-AS高表达者的5年生存率明显低于低表达者(P<0.05);Cox回归分析显示,lncRNA HOXC13-AS表达、淋巴结是否转移、肌层浸润深度和FIGO分期均是影响宫颈癌患者预后的危险因素(P<0.05),其中lncRNA HOXC13-AS表达是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:宫颈癌患者癌组织中lncRNA HOXC13-AS呈高表达,其表达水平与淋巴结是否转移、肌层浸润深度和FIGO分期有关,是影响患者预后的独立危险因素,与宫颈癌患者预后密切相关,有望成为宫颈癌的潜在治疗靶点。

SE-HOXC13-AS对胰腺癌生物学行为的影响及其临床意义

目的探讨超级增强子(super enhancers,SE)-HOXC13-AS对胰腺癌生物学行为的影响及临床意义。方法采用qRT-PCR法检测HOXC13-AS在胰腺癌组织和细胞中的表达,分析HOXC13-AS表达与胰腺癌临床病理特征的关系。选择siRNA转染HOXC13-AS表达量最高的PANC-1细胞,应用CCK-8法、细胞周期实验、划痕实验、Transwell实验及细胞凋亡实验检测敲低HOXC13-AS对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。应用生物数据库分析和JQ1抑制剂验证SE与HOXC13-AS之间调控关系,并通过CCK-8法、划痕实验、Transwell实验及细胞凋亡实验检测抑制SE-HOXC13-AS对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。结果胰腺癌组织中HOXC13-AS平均表达量(4.40±6.21)显著高于癌旁组织(1.01±0.02,P<0.05),HOXC13-AS表达与胰腺癌分化程度和临床分期密切相关。与正常胰腺导管上皮细胞(0.93±0.11)相比,胰腺癌细胞株BXPC-3(2.55±0.19)、SW1990(5.49±0.92)、CF-PAC1(12.27±0.60)及PANC-1(70.39±6.40)中HOXC13-AS的表达升高(P<0.05)。敲低PANC-1细胞中HOXC13-AS表达可明显抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。抑制PANC-1细胞中SE可显著下调HOXC13-AS的表达(0.65±0.02 vs 0.41±0.02,P<0.05),并可能进一步抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。结论HOXC13-AS在胰腺癌中高表达,敲低HOXC13-AS可抑制胰腺癌的进展。SE调控HOXC13-AS的表达,并可能进一步影响胰腺癌的生物学行为。

长链非编码RNA HOXC13-AS在肝细胞癌中的表达及对细胞增殖、侵袭的影响

目的观察长链非编码RNA HOXC13反义RNA(RNA HOXC13-AS)在肝细胞癌中的表达,探讨其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝癌细胞株及正常肝细胞株中HOXC13-AS相对表达水平。体外培养HepG2细胞,设置空白对照组(不转染)、LV-NC组(转染携带HOXC13-AS-NC慢病毒)、LV-HOXC13-AS-shRNA组(转染携带HOXC13-AS-shRNA慢病毒),CCK-8法检测各组细胞增殖情况,Transwell法及细胞划痕实验检测各组肝癌细胞侵袭及迁移能力,蛋白免疫印记(WB)法检测增殖与侵袭相关蛋白表达水平。结果与人正常肝细胞株L02(0.22±0.03)比较,肝癌细胞株HepG2(1.02±0.04)、SMMC-7721(0.71±0.03)、HUH7(0.59±0.03)、SNU-182(0.41±0.03)中HOXC13-AS的表达水平显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),以肝癌细胞HepG2中HOXC13-AS相对表达水平最高。与空白对照组、LV-NC组比较,LV-HOXC13-AS-shRNA组中HepG2细胞增殖、迁移与侵袭能力及基质金属蛋白酶-2、Ki-67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)相对表达水平明显降低,而组织金属蛋白酶抑制剂-2蛋白相对表达水平明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论HOXC13-AS在肝癌细胞中高表达,HOXC13-AS低表达可抑制HepG2细胞的增殖、侵袭。