lncRNA LINC02859介导Wnt通路在甲基硝基亚硝基胍诱发胃癌中的机制研究

[背景]胃癌发生是多因素共同作用的复杂过程,长链非编码RNA(lncRNA)在胃癌进程中可作为致癌或抑癌基因发挥重要作用。研究发现,lncRNA LINC02859在胃癌组织中表达下调且与肿瘤的分化程度及病理分期相关,同时在环境致癌物甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱发细胞恶性转化的发生发展中发挥重要作用,但其作用机制尚不明确。[目的]探索胃癌相关lncRNA LINC02859基因在MNNG诱导人正常胃黏膜细胞(GES-1)恶性转化中的作用和潜在机制。[方法]选取甘肃省胃癌高发区110例胃癌患者作为生物标本来源,由医院专业病理医师采集患者癌组织及距肿瘤边缘5 cm以上癌旁正常胃黏膜组织,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测癌及癌旁组织中LINC02859的表达水平。通过高通量测序及生物信息学分析发现与LINC02859共表达关系的基因潜在调控的信号通路。取细胞代数较低且形态正常的GES-1,待细胞融合达到70%~80%时,分别加入0、0.25和0.5μmol·L^(–1)的MNNG染毒液培养48 h后检测LINC02859基因表达水平,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测细胞增殖活性,平板细胞克隆形成试验检测细胞克隆形成,划痕实验检测细胞迁移能力,评估MNNG染毒对细胞形态及功能的影响;采用RT-qPCR及免疫印记实验(Western blotting)检测Wnt信号通路关键蛋白的表达水平。[结果]RT-qPCR结果显示,与癌旁组织比较,LINC02859在胃癌组织中呈低表达,差异有统计学意义(P<0.05);Pathway富集分析显示,LINC02859潜在调控Wnt通路。体外恶性转化实验提示,MNNG暴露后,恶性转化第五代细胞(MC-5)与对照组细胞相比,其形态发生改变、集落形成数量增加、增殖和迁移能力高于GES-1细胞;与正常GES-1细胞比较,0.25和0.5μmol·L^(–1)MNNG暴露的GES-1细胞,LINC02859基因表达量均降低,0.5μmol·L^(–1)MNNG暴露后,Wnt通路关键蛋白转录因子7(TCF7)、Axis抑制剂(Axin1)、磷酸化糖原合成酶激酶-3-Beta(p-GSK-3β)、酪蛋白激酶-1(CK1)和β-连环蛋白(β-catenin)表达水升高,差异有统计学意义􀀁(P<0.05);而过表达LINC02859可抑制MNNG对Wnt通路的激活作用。[结论]LINC02859基因在胃癌患者癌组织中呈低表达。MNNG暴露可引起GES-1细胞形态及功能改变,LINC02859基因表达异常下调,同时激活Wnt信号通路;过表达LINC02859可抑制MNNG暴露诱导胃癌进程中的Wnt信号通路激活。