下调lncRNA LOXL1-AS1表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)类赖氨酰氧化酶1反义RNA1(LOXL1-AS1)对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法实时荧光定量PCR检测lncRNA LOXL1-AS1、miR-28-5p和IGF-1在乳腺癌细胞(MCF-7细胞)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞)及收集的55例乳腺癌组织和癌旁正常组织中的表达量。采用lncRNA LOXL1-AS1 siRNA、miR-28-5p inhibitor、IGF-1 siRNA分别转染MCF-7细胞,MTT法检测MCF-7细胞的增殖活力,Transwell分析MCF-7细胞的侵袭情况,流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡情况。生物信息学软件(miRanda)和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA LOXL1-AS1和miR-28-5p之间的作用靶点及相关性,TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-28-5p与IGF-1之间的作用靶点及相关性;pcDNA-LOXL1-AS1与miR-28-5p mimics共同转染MCF-7细胞后,MTT法检测MCF-7细胞的增殖活力,Transwell分析MCF-7细胞的侵袭情况,流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡情况。结果MCF-7细胞内lncRNA LOXL1-AS1和IGF-1表达高于MCF-10A细胞(P<0.01),miR-28-5p表达低于MCF-10A细胞(P<0.01)。与癌旁组织相比,乳腺癌组织中lncRNA LOXL1-AS1和IGF-1表达明显升高(P<0.01),miR-28-5p表达明显降低(P<0.01)。转染lncRNA LOXL1-AS1 siRNA或IGF-1 siRNA后,MCF-7细胞增殖活力降低,细胞侵袭数目减少,细胞凋亡率增加(均P<0.01)。lncRNA LOXL1-AS1靶向miR-28-5p,miR-28-5p靶向IGF-1;miR-28-5p表达下调后,MCF-7细胞增殖活力提高,细胞侵袭数目增加,细胞凋亡率减少(P<0.05);pcDNA-LOXL1-AS1与miR-28-5p mimics共同转染MCF-7细胞后,MCF-7细胞增殖活力提高,侵袭数目增加,细胞凋亡率减少(均P<0.05)。结论lncRNA LOXL1-AS1在MCF-7细胞中表达上调,下调lncRNA LOXL1-AS1表达通过影响miR-28-5p/IGF-1轴抑制了乳腺癌增殖和侵袭。

胃癌细胞外泌体lncRNA LOXL1-AS1诱导M2型巨噬细胞极化功能及机制研究

目的:探究胃癌细胞外泌体lncRNA LOXL1-AS1对巨噬细胞分化的影响及机制。方法:差速离心法提取胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、MKN-45和人胃黏膜细胞GES-1所分泌的外泌体(分别记为MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo和GES-1 exo),人单核细胞系TH-1加入PMA诱导其分化为M0型巨噬细胞,将10μg/mL的GES-1 exo、MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo以及等体积的PBS分别与M0型巨噬细胞共孵育48 h后,qRT-PCR检测各组细胞中TNF-α、CCR7、Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达,流式细胞术检测各组细胞CD206和CD14表达,Western blot检测各组细胞ERK和STAT3磷酸化水平。在MKN-45细胞中分别转染lncRNA LOXL1-AS1过表达质粒(lncRNA LOXL1-AS1)和空白质粒(Vector)后提取各组细胞分泌的外泌体(记为lncRNA LOXL1-AS1 exo和Vector exo),将10μg/mL的lncRNA LOXL1-AS1 exo和Vector exo分别与M0型巨噬细胞共孵育,检测孵育后各组细胞TNF-α、CCR7、Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达以及ERK和STAT3磷酸化水平。结果:本文所提取的外泌体符合其结构和生物学特征。相比于PBS组,MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo组细胞TNF-α、CCR7表达显著下调(P<0.01),Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达均显著上调(P<0.01),CD206+CD14+细胞所占比例显著增加(P<0.001),ERK和STAT3磷酸化水平显著增加(P<0.001)。相比于Vector exo组,lncRNA LOXL1-AS1 exo组中lncRNA LOXL1-AS1表达显著上调(P<0.001)。相比于Vector exo组细胞,lncRNA LOXL1-AS1 exo组巨噬细胞中Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达均显著上调(P<0.001),CD206^(+)CD14^(+)细胞所占比例显著增加(P<0.001),ERK和STAT3磷酸化水平显著增加(P<0.001)。结论:胃癌细胞外泌体中lncRNA LOXL1-AS1可显著促进巨噬细胞的M2型极化,其机制可能与激活ERK/STAT3信号通路相关。

lncRNA LOXL1-AS1通过靶向miR-142-5p/PIK3CA调控胃癌细胞侵袭、迁移能力

目的探讨lncRNA LOXL1-AS1对胃癌细胞侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法 Transwell小室法检测上调或敲低LOXL1-AS1表达后对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响,生物信息学方法预测LOXL1-AS1和miR-142-5p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验验证两者靶向关系,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测上调或敲低LOXL1-AS1表达对miR-142-5p表达的影响;免疫印迹法检测EMT标志物蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZO-1)表达和PIK3CA表达。结果敲低LOXL1-AS1表达可抑制胃癌细胞侵袭、迁移能力,并抑制胃癌细胞EMT;双荧光素酶实验证实LOXL1-AS1直接靶向作用于miR-142-5p;LOXL1-AS1负调控miR-142-5p表达与活性,并通过miR-142-5p正调控PIK3CA表达;过表达LOXL1-AS1可促进胃癌细胞侵袭和迁移,miR-142-5p可逆转LOXL1-AS1过表达对胃癌细胞侵袭和迁移的促进作用。结论 LOXL1-AS1靶向miR-142-5p/PIK3CA调控胃癌细胞侵袭和迁移能力。

LncRNA ZEB2-AS1联合亲本基因ZEB2在卵巢癌SKOV3细胞中的作用及其机制研究

目的探索LncRNA ZEB2-AS1联合亲本基因ZEB2在卵巢癌SKOV3细胞中的功能及可能的机制。方法原位杂交和免疫组织化学分别检测ZEB2-AS1和ZEB2在卵巢癌组织中的表达;建立ZEB2-AS1的过表达和沉默SKOV3细胞模型;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡和周期;细胞免疫荧光和Western blotting检测上皮-间充质相互作用(EMT)相关蛋白的表达;双萤光素酶基因报告实验检测ZEB2-AS1与ZEB2、microRNA-145(miR-145)的结合关系。结果ZEB2-AS1和ZEB2均表达于卵巢癌组织中的细胞质和细胞核;相比SKOV3细胞,ZEB2-AS1过表达的SKOV3细胞增殖能力增强(P<0.05),凋亡能力减弱(P<0.05),侵袭和迁移能力增强(P<0.05),S期细胞数增加(P<0.05),G1期细胞数减少(P<0.05);EMT相关蛋白E-cadherin相对表达量降低(P<0.05),N-cadherin和Vimentin相对表达量升高(P<0.05);而ZEB2-AS1沉默的SKOV3细胞则相反。双萤光素酶报告实验结果证实,ZEB2-AS1和miR-145具有结合关系,ZEB2-AS1与ZEB2 mRNA具有结合关系。结论LncRNA ZEB2-AS1联合亲本基因ZEB2在卵巢癌SKOV3细胞中发挥促EMT的功能作用。

咪达唑仑通过调控LncRNA NR2F2-AS1对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨咪达唑仑对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响及其可能作用机制。方法 体外培养人肾癌细胞786-O,随机分组:咪达唑仑0、20、40、60μmol/L组、si-NC组、si-核受体亚家族2组F成员反义RNA(NR2F2-AS)1组、咪达唑仑+pcDNA组、咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组;CCK-8法、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡及迁移;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA NR2F2-AS1表达量;Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关蛋白(Bax)表达量。结果 与咪达唑仑0μmol/L组比较,咪达唑仑20、40、60μmol/L组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显升高,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显降低,长链非编码(Lnc)RNA NR2F2-AS1表达量明显降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);转染si-NR2F2-AS1可明显抑制细胞增殖及迁移,并可明显提高细胞凋亡率(P<0.05);与咪达唑仑+pcDNA组比较,咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显降低,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可通过抑制LncRNA NR2F2-AS1表达而减弱肾癌细胞增殖及迁移能力,并可诱导肾癌细胞凋亡。

lncRNA RRAS2-AS1在LPS诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症中的功能

【背景】奶牛乳腺炎是奶牛中危害最严重的疾病之一,严重影响乳品质,不仅造成经济损失,甚至危及人类健康。已有研究表明,lncRNAs广泛参与人和动物的炎症和免疫调节。lncRNA RRAS2-AS1是我们在前期研究中新发现的差异表达lncRNA,其表达模式和功能尚不清楚。【目的】通过探究lncRNA RRAS2-AS1在奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, bMECs)炎症反应中的作用机制,为奶牛乳腺炎的分子调控机制解析和抗乳腺炎分子选育提供理论依据。【方法】利用RT-PCR和RACE等技术进行了lncRNA RRAS2-AS1的克隆,并通过生物信息学方法进行lncRNA RRAS2-AS1的靶基因预测及功能富集分析;利用细胞免疫荧光技术鉴定bMECs,利用细胞核质分离及半定量PCR技术检测了lncRNA RRAS2-AS1的亚细胞定位情况;采用qRT-PCR检测了lncRNA RRAS2-AS1在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导bMECs炎症反应和乳腺炎奶牛乳腺组织中的表达模式;利用LPS诱导bMECs构建了炎症细胞模型,在此基础上,通过lncRNA超表达、qRT-PCR和ELISA等技术研究了lncRNA RRAS2-AS1对炎性bMECs内的促炎细胞因子基因、增殖相关基因和凋亡相关基因在mRNA和(或)蛋白质水平表达的影响,同时采用EdU、CCK-8和流式细胞术进一步验证了lncRNA RRAS2-AS1对bMECs增殖、活力和凋亡的影响。【结果】lncRNA RRAS2-AS1基因的长度为363 bp,主要定位于细胞质中。表达量检测结果表明,与对照组相比,lncRNA RRAS2-AS1在LPS诱导炎症的bMECs和乳腺炎组织中的表达量显著下调(P<0.05);lncRNA RRAS2-AS1超表达试验结果表明,与对照组相比,lncRNA RRAS2-AS1超表达组的炎症信号通路关键基因(TLR4和NF-κB1)、促炎细胞因子基因(IL-1β、IL-6和IL-8)、促凋亡基因(BAD、CASP3和BAX等)的表达量显著下调(P<0.01),而增殖标志基因(CDK2、CDK4和PCNA)的表达量显著上调(P<0.05)。此外,lncRNA RRAS2-AS1超表达组的细胞活力显著增加(P<0.05),而bMECs的凋亡率极显著降低(P<0.01)。【结论】lncRNA RRAS2-AS1在LPS诱导bMECs的炎症反应和乳腺炎奶牛的乳腺组织中均显著下调;超表达lncRNA RRAS2-AS1可下调促炎细胞因子IL-6、IL-8和IL-1β在mRNA和蛋白质水平的表达,并促进细胞活力和增殖、抑制细胞凋亡,从而减轻LPS诱导的bMECs炎症反应,该结果可为解析奶牛乳腺炎的分子调控网络奠定了基础。

lncRNA PSMA3-AS1调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响

目的:探讨lncRNA PSMA3-AS1通过调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响及其机制。方法:选择2019年3月至2022年7月期间在本院确诊的53例卵巢癌患者作为研究对象,收集患者卵巢癌组织及癌旁组织。体外培养人正常卵巢细胞HOSEpiC和卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3、A2780、COV362,RT-qPCR检测卵巢癌细胞中lncRNA PSMA3-AS1表达,筛选最佳干预细胞系。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PSMA3-AS1、HMGA2与miR-142-3p的靶向关系;将SKOV3细胞分为si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-NC组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-142-3p组、miR-NC组、miR-142-3p mimics组、miR-142-3p mimics+pcDNA组、miR-142-3p mimics+HMGA2组,检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭;Western blot检测Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、cleaved caspase 3、HMGA2蛋白表达;小鼠移植瘤实验验证lncRNA PSMA3-AS1对卵巢癌肿瘤生长的影响。结果:与癌旁组织比较,卵巢癌组织中lncRNA PSMA3-AS1和HMGA2表达升高,miR-142-3p表达降低(P<0.05);lncRNA PSMA3-AS1和HMGA2在SKOV3细胞中表达水平最高,miR-142-3p在SKOV3细胞中表达水平最低;下拉实验和双荧光素酶报告显示,lncRNA PSMA3-AS1、HMGA2与miR-142-3p存在靶向关系;敲低lncRNA PSMA3-AS1或过表达miR-142-3p后,细胞OD值、细胞克隆数、划痕愈合率、细胞侵袭数及Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、HMGA2表达显著降低,细胞凋亡率、cleaved caspase 3表达显著增加(P<0.05);抑制miR-142-3p表达或过表达HMGA2可逆转敲低lncRNA PSMA3-AS1或过表达miR-142-3p对卵巢癌细胞恶性行为的抑制作用;体内实验表明,敲低lncRNA PSMA3-AS1表达可抑制小鼠肿瘤生长。结论:lncRNA PSMA3-AS1在卵巢癌中高表达,敲低lncRNA PSMA3-AS1可调节miR-142-3p/HMGA2轴抑制卵巢癌恶性发展。

lncRNA FEZF1-AS1促进黑色素瘤细胞增殖和侵袭的实验研究

目的:观察lncRNA FEZF1-AS1对黑色素瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法:对黑色素瘤病人的肿瘤组织和癌旁组织进行lncRNA测序分析,以肿瘤组织表达增加最明显的lncRNA FEZF1-AS1作为研究对象。通过转染慢病毒载体沉默黑色素瘤细胞A375中lncRNA FEZF1-AS1的表达。利用流式细胞术和qRT-PCR验证转染效果。通过CCK-8和Transwell实验检测A375细胞的增殖水平和侵袭能力。将敲减lncRNA FEZF1-AS1前后的A375细胞皮下注射到小鼠体内,检测移植瘤体积、质量以及生存时间。Western blot检测敲减lncRNA FEZF1-AS1前后A375细胞中Notch1的表达水平。结果:相比癌旁组织,黑色素瘤组织中lncRNA FEZF1-AS1的表达显著增高。通过转染慢病毒敲减,A375细胞中lncRNA FEZF1-AS1的表达明显降低。沉默lncRNA FEZF1-AS1后,A375细胞的增殖率降低,侵袭能力下降。敲减lncRNA FEZF1-AS1后,黑色素瘤模型小鼠肿瘤体积减小,质量降低,生存时间明显延长。沉默lncRNA FEZF1-AS1后细胞中Notch1蛋白表达降低。结论:lncRNA FEZF1-AS1能够增强黑色素瘤细胞A375的增殖和侵袭,这种作用与lncRNA FEZF1-AS1增强Notch1信号通路相关。

LncRNA GAS5-AS1靶向miR-106a-5p调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

背景长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)生长停滞特异性转录本5反义RNA(growth arrest specific transcript 5 antisense RNA,GAS5-AS1)被发现在多种癌症中扮演肿瘤抑制因子的作用.但是其在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)进展中的作用和机制尚不清楚.目的探讨LncRNA GAS5-AS1靶向miR-106a-5p在CRC进展中的作用.方法实时荧光定量聚合酶链反应分析LncRNA GAS5-AS1和miR-106a-5p在43对CRC组织和癌旁组织样本中的表达.分别转染pcDNA、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-106a-5p、si-NC、si-LncRNA GAS5-AS1、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-NC、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-106a-5p mimics至HCT8细胞.细胞计数试剂盒-8法检测细胞活力;Transwell小室法检测迁移和侵袭细胞数.通过双荧光素酶报告实验确定LncRNA GAS5-AS1和miR-106a-5p的靶向关系.结果与癌旁组织比较,CRC组织中LncRNA GAS5-AS1表达降低(P<0.05),miR-106a-5p表达升高(P<0.05).与转染pcDNA比较,转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1后HCT8细胞活力、迁移、侵袭、miR-106a-5p表达显著降低(P<0.05).与转染anti-miR-NC比较,转染anti-miR-106a-5p后HCT8细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05).与转染si-NC比较,转染si-LncRNA GAS5-AS1后miR-106a-5p表达水平显著升高(P<0.05).与转染miR-NC比较,转染miR-106a-5p能显著降低LncRNA GAS5-AS1-WT载体的荧光素酶活性,表明miR-106a-5p是LncRNA GAS5-AS1的直接靶点.与转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-NC比较,转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-106a-5p mimics后HCT8细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05).结论LncRNA GAS5-AS1通过靶向miR-106a-5p来抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭.

LncRNA FEZF1-AS1调控特发性肺间质纤维化的机制研究

目的 探讨FEZ家族锌指1-反义RNA 1(LncRNA FEZF1-AS1)对肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮-间充质相互作用(EMT)的影响及其作用机制。方法 将转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))作用于A549细胞,诱导肺间质纤维化细胞模型,将其分为空白对照组(A549细胞组)和模型组。Western blotting检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达,观察模型复制是否成功;实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。根据实验目的和转染质粒不同,将A549细胞分为空白对照组(Blank组)、TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组、TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1组。CCK-8法检测细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell检测细胞侵袭能力。Western blotting检测细胞E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表达;qRT-PCR检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。结果 模型组E-cadherin蛋白相对表达量较空白对照组降低(P <0.05),N-cadherin及Vimentin蛋白相对表达量较空白对照组升高(P <0.05);模型组LncRNA FEZF1-AS1基因相对表达量较空白对照组升高(P <0.05),miR-200c-3p基因相对表达量较空白对照组降低(P <0.05)。与Blank组比较,TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组细胞增殖、迁移、侵袭能力升高(P <0.05);与TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低(P<0.05)。与TGF-β_(1)+SiLncRNAFEZF1-AS1NC组比较,TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1组LncRNA FEZF1-AS1基因相对表达量及N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量降低(P <0.05),E-cadherin蛋白相对表达量升高(P <0.05);与TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β_(1)+SiLncRNAFEZF1-AS1组和Blank组miR-200c-3p基因相对表达量升高(P<0.05)。结论LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭及EMT过程。

丹酚酸A调控LncRNA TSPOAP1-AS1缓解H_(2)O_(2)诱导脑微血管内皮细胞凋亡及血管新生能力的影响

目的 探讨丹酚酸A调控lncRNA TSPAOP1-AS1缓解H2O2诱导脑微血管内皮细胞凋亡及血管新生能力的影响。方法 选取2021年1月-2023年3月在我院收治的80例高血压脑出血患者和健康体检者,分别设为研究组和对照组。将对数生长的HBMECs分为9组,即Control组、H_(2)O_(2)组、SAA-L组、SAA-M组、SAA-H组、si-TSPOAP1-AS1组、si-NC组和pcDNA-TSPOAP1-AS1组。RT-PCR法检测患者血清及细胞中TSPOAP1-AS1的相对表达水平;分别采用CCK-8法、流式细胞仪和Matrigel体外成管试验检测细胞存活率、凋亡率及血管生成能力;ELISA检测细胞氧化应激;蛋白质印迹法检测细胞中Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 与对照组(1.00±0.09)相比,研究组患者血清中TSPOAP1-AS1相对表达量(4.36±0.37)明显升高(P<0.01)。与Control组比较,H2O2组细胞中TSPOAP1-AS1相对表达水平(2.65±0.23)、细胞凋亡率(18.29±1.65)、细胞中MDA含量(40.81±3.72)和Caspase-3蛋白(0.78±0.08)、Bax蛋白(0.82±0.09)表达均明显增加,细胞存活率(35.36±3.65)、小管形成数目(85.32±7.68)、细胞中SOD活性(15.48±1.63)、GSH-Px含量(9.43±0.82)及Bcl-2蛋白(0.21±0.02)表达均明显降低(P<0.01);与H2O2组相比,SAA-H组和si-TSPOAP1-AS1组细胞中TSPOAP1-AS1相对表达水平(1.21±0.12)(1.30±0.13)、细胞凋亡率(5.31±0.50)(6.01±0.62)、细胞中MDA含量(8.95±0.82)(9.39±0.92)和Caspase-3蛋白(0.32±0.04)(0.35±0.04)、Bax蛋白(0.40±0.05)(0.45±0.05)表达均明显降低,细胞存活率(87.21±7.64)(82.31±7.50)、小管形成数目(198.75±18.32)(180.31±17.64)、细胞中SOD活性(60.27±5.89)(55.26±5.24)、GSH-Px含量(40.63±4.17)(38.76±3.27)及Bcl-2蛋白(0.70±0.08)(0.68±0.07)表达均明显升高(P<0.01)。与SAA-H组相比,pcDNA-TSPOAP1-AS1组细胞中TSPOAP1-AS1相对表达水平(2.49±0.20)、细胞凋亡率(16.90±1.60)、细胞中MDA含量(39.01±3.83)和Caspase-3蛋白(0.72±0.08)、Bax蛋白表(0.78±0.08)达均明显增加,细胞存活率(40.47±2.89)、小管形成数目(90.15±8.62)、细胞中SOD活性(20.16±2.11)、GSH-Px含量(11.56±1.08)及Bcl-2蛋白(0.28±0.03)表达均明显降低(P<0.01)。结论 丹酚酸A可促进H2O2诱导的HBMECs存活和血管生成,抑制细胞凋亡,减轻氧化应激反应,其作用机制可能和抑制lncRNA TSPOAP1-AS1相关。

lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌中的临床意义及生物学功能分析

目的探讨lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达意义和其参与HCC发生发展的潜在作用机制。方法收集37例HCC组织及其配对癌旁组织,以及HCC细胞RNA,利用qRT-PCR检测lncRNA SLC9A3-AS1在组织和细胞中的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。绘制lncRNA SLC9A3-AS1的受试者工作特征(ROC)曲线,分析其对HCC的诊断效能。通过生物信息学方法筛选与lncRNA SLC9A3-AS1结合的RNA结合蛋白,并绘制韦恩图,分析lncRNA SLC9A3-AS1与结合蛋白表达的相关性,以及蛋白表达与HCC病理分期和患者生存预后的关系。结果lncRNA SLC9A3-AS1在HCC组织和细胞中表达下调,其表达水平与患者血清甲胎蛋白(AFP)水平明显相关(P<0.05)。lncRNA SLC9A3-AS1的ROC曲线下面积(AUC)为0.849(95%CI:0.796~0.886)。韦恩图显示5个与lncRNA SLC9A3-AS1潜在结合的蛋白:hnRNPA1、YTHDC1、RBM4、NONO和RBMx,其表达与lncRNA SLC9A3-AS1表达呈明显正相关(P<0.05)。随着HCC分期的进展,不同分期的RNA结合蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);RBM4、NONO和RBMx低表达患者总体生存期明显长于高表达患者(P<0.05)。结论lncRNA SLC9A3-AS1在HCC中下调,有望作为HCC诊断的生物标志物,并且可能通过与RNA结合蛋白互作调控HCC进展。

LncRNA IDH1-AS1 sponges miR-518c-5p to suppress proliferation of epithelial ovarian cancer cell by targeting RMB47

Long noncoding RNA(lncRNA)IDH1 antisense RNA 1(IDH1-AS1)is involved in the progression of multiple cancers,but its role in epithelial ovarian cancer(EOC)is unknown.Therefore,we investigated the expression levels of IDH1-AS1 in EOC cells and normal ovarian epithelial cells by quantitative real-time PCR(qPCR).We first evaluated the effects of IDH1-AS1 on the proliferation,migration,and invasion of EOC cells through cell counting kit-8,colony formation,EdU,transwell,wound-healing,and xenograft assays.We then explored the downstream targets of IDH1-AS1 and verified the results by a dual-luciferase reporter,qPCR,rescue experiments,and Western blotting.We found that the expression levels of IDH1-AS1 were lower in EOC cells than in normal ovarian epithelial cells.High IDH1-AS1 expression of EOC patients from the Gene Expression Profiling Interactive Analysis database indicated a favorable prognosis,because IDH1-AS1 inhibited cell proliferation and xenograft tumor growth of EOC.IDH1-AS1 sponged miR-518c-5p whose overexpression promoted EOC cell proliferation.The miR-518c-5p mimic also reversed the proliferation-inhibiting effect induced by IDH1-AS1 overexpression.Furthermore,we found that RNA binding motif protein 47(RBM47)was the downstream target of miR-518c-5p,that upregulation of RBM47 inhibited EOC cell proliferation,and that RBM47 overexpressing plasmid counteracted the proliferation-promoting effect caused by the IDH1-AS1 knockdown.Taken together,IDH1-AS1 may suppress EOC cell proliferation and tumor growth via the miR-518c-5p/RBM47 axis.

肝细胞肝癌中LncRNA OSER1-AS1靶向调控miR-433-3p的作用

目的研究肝细胞肝癌(HCC)中长链非编码RNA(LncRNA)氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA1(OSER1-AS1)靶向调控微小RNA(miR)-433-3p的作用及生物学意义。方法选择唐山市第九医院手术切除的HCC组织和癌旁组织,培养HCC细胞株SMMC-7721、HepG2、MHCC97H及正常肝细胞株HL-7702。检测LncRNA OSER1-AS1、miR-433-3p的表达水平,比较HCC组织与癌旁组织、HCC细胞株与正常肝细胞株中LncRNA OSER1-AS1、miR-433-3p表达水平的差异。对转染MHCC97H细胞进行分组,转染阴性对照(NC)-siRNA为si-NC组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA为si-OSER1-AS1组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA及NC miR为si-OSER1-AS1+miR-NC组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA及miR-433-3p抑制物为si-OSER1-AS1+miR-433-3p抑制物组。检测细胞增殖活力、凋亡率、增殖细胞核抗原(PCNA)及裂解型caspase-3(cleaved caspase-3)的表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA OSER1-AS1靶向miR-433-3p。结果HCC组织中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于癌旁组织(1.77±0.34 vs1.00±0.21)、miR-433-3p的表达水平低于癌旁组织(0.65±0.09 vs 1.00±0.28)(P<0.05)且LncRNA OSER1-AS1与miR-433-3p呈负相关(r=-0.351,P<0.05);HCC细胞株中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于HL-7702细胞、miR-433-3p的表达水平低于HL-7702细胞(P<0.05)且MHCC97H细胞中上述变化最显著。si-OSER1-AS1组MHCC97H细胞中LncRNA OSER1-AS1、PCNA的表达水平及增殖活力低于si-NC组(0.37±0.05 vs 1.00±0.11,0.33±0.05 vs 0.92±0.12,0.51±0.09 vs 1.03±0.12),miR-433-3p、cleaved caspase-3的表达水平及凋亡率高于si-NC组(1.88±0.25 vs 1.00±0.09,0.96±0.11 vs 0.44±0.06,9.39%±1.15%vs 3.82%±0.55%)(P<0.05);si-OSER1-AS1+miR-433-3p抑制物组MHCC97H细胞中cleaved caspase-3表达水平及凋亡率低于si-OSER1-AS1+miR-NC组(0.27±0.05 vs 0.91±0.10,6.04%±0.77%vs 11.32%±1.32%),PCNA的表达水平及增殖活力高于si-OSER1-AS1+miR-NC组(0.94±0.12 vs 0.48±0.06,0.95±0.11 vs 0.34±0.05)(P<0.05)。结论LncRNA OSER1-AS1靶向miR-433-3p调控HCC细胞的增殖和凋亡。

LncRNA PSMA3-AS1调节miR-140-3p/DDX5轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA人蛋白酶体α亚基3型的反义RNA1(PSMA3-AS1)调节miR-140-3p/DEAD box p68 RNA解旋酶(DDX5)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法qRT-PCR、Western blot、免疫组化法分别检测40例肺癌组织和细胞系中PSMA3-AS1、miR-140-3p、DDX5表达。将A549细胞分为:control组、si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+inhibitor-NC组、si-PSMA3-AS1+miR-140-3p inhibitor组,qRT-PCR检测转染效率;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及DDX5蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与PSMA3-AS1和DDX5的关系;构建肺癌裸鼠模型,分为si-NC、si-PSMA3-AS1组,测量肿瘤质量与体积,qRT-PCR检测移植瘤组织中miR-140-3p表达,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、DDX5蛋白表达。结果在肺癌组织/细胞系中,PSMA3-AS1 mRNA、DDX5蛋白表达升高,miR-140-3p mRNA表达水平降低(P<0.05);敲低PSMA3-AS1表达可显著抑制A549细胞增殖、迁移与侵袭,降低PCNA、MMP-2、vimentin、DDX蛋白表达,促进miR-140-3p、Bax、E-cadherin表达及细胞凋亡(P<0.05);下调miR-140-3p,可减弱敲低PSMA3-AS1对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-140-3p与PSMA3-AS1、miR-140-3p与DDX5存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制PSMA3-AS1表达可显著降低移植瘤质量和体积,降低Ki-67、DDX5表达水平,升高miR-140-3p表达(P<0.05)。结论敲低PSMA3-AS可能通过调节miR-140-3p/DDX5轴,抑制肺癌细胞的增殖和EMT,促进细胞凋亡。

肝细胞癌患者中lncRNA LET、lncRNA ZEB1-AS1的表达水平及对其预后的影响

目的:探讨肝细胞癌(HCC)患者中lncRNA LET、lncRNA ZEB1-AS1的表达水平及对其预后的影响。方法:选取2022年1月至2023年4月某三甲医院收治的54例HCC患者设为HCC组,选取2022年1月至2023年4月某三甲医院收治的54例乙型肝炎病毒(HBV)感染患者设为HBV组,选取2022年1月至2023年4月在某三甲医院进行健康体检的54名健康者设为对照组。采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测三组受检者lncRNA LET、lncRNA ZEB1-AS1的表达水平。采用Kaplan-Meier法分析lncRNA LET、lncRNA ZEB1-AS1表达水平与HCC患者预后的关系。结果:HCC组受检者lncRNA LET的表达水平低于对照组、HBV组受检者(P<0.05),其lncRNA ZEB1-AS1的表达水平高于对照组、HBV组受检者(P<0.05)。HCC组患者中lncRNA LET低表达组患者生存率低于lncRNA LET高表达组患者(P<0.05),其lncRNA ZEB1-AS高表达组患者生存率低于lncRNA ZEB1-AS低表达组患者(P<0.05)。结论:HCC患者中lncRNA LET、lncRNA ZEB1-AS1表达水平与其预后密切相关,可作为潜在生物标志物用于HCC患者的诊断和预后评估。

不同浓度的依托咪酯通过调控FEZF1-AS1的表达对结直肠癌细胞生物学功能的影响

目的探讨不同浓度依托咪酯对结直肠癌细胞生物学功能的影响,并分析其潜在机制。方法使用0、4、16、64μmol/L依托咪酯分别处理结直肠癌细胞(LS513细胞)48 h,测定细胞存活率、凋亡率、迁移侵袭能力,并检测Bcl-2、BAX、Cleaved caspase-3及LncRNA FEZF1-AS1和miR-363-3p的表达水平。培养LS513细胞,分为三组:空白组、依托咪酯64μmol/L组、pcDNA-FEZF1-AS1组。比较三组细胞生物学功能。结果4、16、64μmol/L依托咪酯处理LS513细胞后,细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数均降低,凋亡率增加,且凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.05);过表达LncRNA FEZF1-AS1后,LS513细胞LncRNA FEZF1-AS1表达升高,miR-363-3p表达降低,且过表达LncRNA FEZF1-AS1后LS513细胞存活率、迁移细胞数及侵袭细胞数升高,凋亡率降低(P<0.05)。结论依托咪酯可抑制结直肠癌细胞迁移、侵袭,并促进其凋亡,且可能通过调控LncRNA FEZF1-AS1/miR-363-3p信号轴发挥作用。

子痫前期病人长链非编码RNA H19和长链非编码RNA HAND2-AS1表达水平与胰岛素抵抗的相关性研究

目的检测子痫前期病人胎盘组织、血清长链非编码RNA H19(LncRNA H19)与长链非编码RNAHAND2-AS1(Ln⁃cRNA HAND2-AS1)表达水平,并分析其与病人胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法将2021年1—12月在唐山市妇幼保健院建卡的子痫前期孕妇105例作为子痫前期组,根据子痫前期孕妇严重程度分为轻度子痫前期组与重度子痫前期组,另选取同期孕周、年龄相符的健康孕妇97例作为对照组,收集所有孕妇身体质量指数(BMI)、孕周、收缩压、舒张压、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)等一般资料,并计算稳态模型的IR指数(HOMA-IR);实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定孕妇血清、胎盘组织中LncRNA H19,LncRNA HAND2-AS1水平;比较对照组与子痫前期组、轻度子痫前期组与重度子痫前期组间血清、胎盘组织LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1水平;Pearson法分析子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1与HOMA-IR的相关性。结果子痫前期组病人收缩压、舒张压高于对照组(P<0.05),且重度子痫前期病人收缩压、舒张压高于轻度子痫前期病人,孕周低于轻度子痫前期病人(P<0.05);与对照组相比,子痫前期组孕妇24 h尿蛋白、FBG[(5.84±0.97)mmol/L比(4.22±0.70)mmol/L]、FINS[(13.37±2.23)mU/L比(7.52±1.25)mU/L]、HOMI-IR水平(3.47±0.57比1.41±0.23)升高(P<0.05),且重度子痫前期孕妇24 h尿蛋白、FBG[(6.90±1.15)mmol/L比(5.24±0.85)mmol/L]、FINS[(13.97±2.32)mU/L比(13.05±2.17)mU/L]、HOMI-IR水平(4.27±0.71比3.03±0.50)高于轻度子痫前期孕妇(P<0.05);与对照组相比,子痫前期组孕妇血清、胎盘组织Ln⁃cRNA H19(2.52±1.42比1.01±0.15,3.75±0.62比1.02±0.17)与LncRNA HAND2-AS1水平(1.98±0.33比1.01±0.15,2.87±0.47比1.02±0.17)升高(P<0.05),且重度子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19(2.84±0.47比2.34±0.39,4.28±0.71比3.45±0.57)与LncRNA HAND2-AS1水平(2.59±0.43比1.63±0.27,3.56±0.59比2.49±0.41)高于轻度子痫前期孕妇(P<0.05);子痫前期病人血清与胎盘组织间LncRNA H19水平呈正相关(r=0.55,P<0.05),血清与胎盘组织间LncRNA HAND2-AS1水平呈正相关性(r=0.65,P<0.05)。子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19水平分别与HOMI-IR呈正相关(r=0.53、0.59,P<0.05);血清、胎盘组织LncRNA HAND2-AS1水平分别与HOMI-IR呈正相关(r=0.60、0.61,P<0.05)。结论子痫前期病人血清、胎盘组织LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1高表达,二者与IR密切相关,可能通过影响IR参与子痫前期发生发展。

非小细胞肺癌组织中lncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p的表达及临床意义

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中长链非编码RNA(LncRNA)MNX1-AS1、微RNA(miR)-218-5p表达及临床意义。方法选取2015年1月至2017年1月湖北省中医院诊治的120例NSCLC患者,取术中获取的NSCLC组织和癌旁组织,应用荧光定量PCR检测LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p表达。分析NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1与miR-218-5p的相关性及与临床病理特征的关系。以LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p相对表达量的均值(2.321、1.213)为界分为高、低表达组,分析其对NSCLC患者生存预后的影响。结果NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1表达高于癌旁组织,miR-218-5p表达低于癌旁组织(P<0.05)。LncRNA MNX1-AS1与miR-218-5p呈负相关(r=-0.561,P<0.01)。不同淋巴结转移、肿瘤分期患者LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA MNX1-AS1高表达组生存曲线低于LncRNA MNX1-AS1低表达组,miR-218-5p低表达组生存曲线低于miR-218-5p高表达组(P<0.05)。结论NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低,两者与患者预后不良有关,可能作为预后评估指标。

LncRNA SLC16A1-AS1靶向调控miR-182对乳腺癌BT549细胞增殖能力的影响

目的探讨LncRNA SLC16A1-AS1对miR-182的靶向调控作用及对乳腺癌BT549细胞增殖能力的影响。方法使用GEPIA2工具分析TCGA数据库中LncRNA SLC16A1-AS1在三阴型乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的差异性表达,应用Kaplan-MeieRPlotter数据库进行生存分析。利用RegRNA2和miRanda数据库预测LncRNA SLC16A1-AS1的潜在靶标miRNAs。用qRT-PCR检测LncRNA SLC16A1-AS1在TNBC组织及细胞系(BT549、BT20、MDA-MB-231及MDA-MB-468)中的表达。利用双荧光素酶活性测定及RNA免疫沉淀实验验证LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182的结合力。用CCK-8及集落形成实验检测不同处理组BT549细胞增殖能力的变化。结果生物信息学分析结果显示,TNBC组织中LncRNA SLC16A1-AS1的表达水平显著低于正常组织(P<0.001),与预后良好相关(P<0.001),LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182之间存在结合位点。LncRNA SLC16A1-AS1在63例TNBC组织中的表达水平显著低于瘤旁组织(7.94%vs 63.49%,P<0.001),在TNBC细胞系中的表达水平亦显著低于正常乳腺上皮细胞系(P<0.01)。在BT549细胞中过表达miR-182可显著降低LncRNA SLC16A1-AS1-WT载体的荧光酶素活性,RNA免疫沉淀实验显示,AGO2同时富集LncRNA SLC16A1-AS1及miR-182(P<0.01)。与对照组相比,过表达LncRNA SLC16A1-AS1显著降低BT549细胞的增殖活性并减少集落形成数量,共表达LncRNA SLC16A1-AS1与miR-182可恢复BT549细胞的增殖能力(P<0.01)。结论LncRNA SLC16A1-AS1在TNBC中低表达,且通过靶向调控miR-182在体外抑制TNBC细胞的增殖能力,LncRNA SLC16A1-AS1/miR-182轴有望成为TNBC治疗的潜在靶点。