LncRNA-NEF转录激活FOXA2并通过抑制β-catenin信号通路抑制肝癌细胞的EMT过程

目的探讨长链非编码lncRNA-NEF对肝癌转移关键步骤EMT过程的分子调节机制。方法通过TGF-β诱导肝癌细胞系Hep3B细胞向EMT转化,通过构建pcDNA3.1-FOXA2过表达载体,过表达FOXA2诱导肝癌细胞系HepG2细胞向MET转化,随后检测两种细胞的E-cadherin、Vimentin、Snail共3种EMT相关标志物的表达变化、lncRNA-NEF的表达变化,以及细胞侵袭能力变化。之后检测上述两种细胞分别经历EMT和MET转化后,β-catenin信号通路相关蛋白因子的表达变化情况。结果lncRNA-NEF在肝癌组织和肝癌细胞中表达水平低于对照组正常细胞(P<0.05);与对照组相比,TGF-β处理组的细胞侵袭能力显著增强(P<0.05),pcDNA3.1-FOXA2转染组的细胞侵袭能力显著降低(P<0.05);与对照组相比,TGF-β处理组的Hep3B细胞内磷酸化的β-catenin(p-β-catenin)表达量显著增高,而总β-catenin蛋白水平不变,pcDNA3.1-FOXA2转染组的HepG2细胞内磷酸化的β-catenin(p-β-catenin)表达量显著降低,而总β-catenin蛋白水平不变。LncRNA-NEF是以顺式作用方式转录激活FOXA2,并通过抑制β-catenin信号通路抑制肝癌细胞的EMT过程。结论LncRNA-NEF能转录激活FOXA2并通过抑制β-catenin信号通路抑制肝癌细胞的EMT过程。

LncRNA-NEF通过吸附miR-21调节绝经后骨质疏松小鼠的免疫失衡和PD-1/PD-1L介导的Treg-Th17细胞平衡

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)NEF对绝经后骨质疏松症(PMOP)小鼠T细胞免疫功能的调节机制。方法使用Balb/c小鼠建立去卵巢模型(OVX,模拟PMOP)(46只),设立假手术(sham)对照组(16只),从这两组小鼠中用随机数字表法各选6只安乐死后分离培养骨髓间充质干细胞(BMSCs);构建NEF的重组表达载体(pIRSE2-NEF)并转染BMSCs,使用RT-qPCR检测sham组、OVX组和pIRSE2-NEF组的BMSCs细胞中的NEF和miR-21水平;荧光素酶基因报告实验验证NEF和miR-21的结合作用。将剩余的40只OVX小鼠分为4组,包括OVX组(10只),pIRSE2-NEF注射组(pIRSE2-NEF组,10只),pIRSE2-NEF联合PD-1抑制剂组(pIRSE2-NEF+PD-L1-IN-1组,10只),pIRSE2-NEF联合miR-21拟似物(mimic)组(pIRSE2-NEF+mimic组,10只)。sham组剩余的10只小鼠作为对照组。ELISA检测外周血IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-13、PD-1/PD-1L信号水平,流式细胞术检测血清Treg-Th17细胞亚群偏移情况变化。结果与sham组(1.01±0.04,1.00±0.03)比,OVX组的BMSCs中NEF的表达下调(0.23±0.01),miR-21上调(2.96±0.05)(P<0.05)。与OVX组(1.23±0.15,5.20±0.31)比,pIRSE2-NEF组BMSCs细胞中NEF明显上调(6.83±0.35)(P<0.05),而miR-21下调(0.29±0.11)(P<0.05)。NEF与miR-21具有直接结合碱基位点。OVX组小鼠外周血的IFN-γ(3.25±0.21)、IL-2(2.44±0.06)水平,Th17/Treg比率(3.18±0.65)与sham组(1.03±0.02、1.00±0.01、0.86±0.09)比上升(均P<0.05),而IL-4(0.45±0.02)、IL-13(0.43±0.07)、PD-1(0.24±0.03)及PD-1L(0.51±0.06)的水平与sham组(1.00±0.04、1.00±0.02、1.00±0.03、1.00±0.00)比降低(均P<0.05);而与OVX比,pIRSE2-NEF组的IFN-γ(2.02±0.06)、IL-2水平(0.88±0.01)、Th17/Treg比率(1.43±0.22)降低,IL-4(0.87±0.03)、IL-13(0.84±0.07)、PD-1(0.79±0.06)及PD-1L(0.77±0.06)的水平升高(均P<0.05);与pIRSE2-NEF组比,pIRSE2-NEF+PD-L1-IN-1组中的IFN-γ(2.89±0.06)、IL-2水平(2.07±0.07)、Th17/Treg比率(2.39±0.38)上升,IL-4(0.68±0.03)、IL-13(0.76±0.08)、PD-1(0.52±0.02)及PD-1L(0.83±0.04)的水平降低(均P<0.05);且pIRSE2-NEF+mimic组与pIRSE2-NEF+PD-L1-IN-1组的调节效果一致。结论lncRNA-NEF通过吸附miR-21改善绝经后骨质疏松小鼠免疫失衡和PD-1/PD-1L介导的Treg-Th17细胞平衡。