LncRNA PITPNA-AS1靶向miR-491-3p基因调控宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)PITPNA反义RNA 1(PITPNA-AS1)是否通过靶向miR-491-3p调控宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭。方法qRT-PCR检测宫颈癌细胞系(HeLa、SiHa、Caski)、宫颈上皮永生化细胞H8中LncRNA PITPNA-AS1和miR-491-3p表达。将未处理的宫颈癌细胞HeLa设为对照(NC组),并在宫颈癌细胞HeLa中转染si-NC(si-NC组)、si-LncRNA PITPNA-AS1(si-LncRNA PITPNA-AS1组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-491-3p mimics(miR-491-3p组)、pcDNA(pcDNA组)、pcDNA-LncRNA PITPNA-AS1(pcDNA-LncRNA PITPNA-AS1组)、si-LncRNA PITPNA-AS1和anti-miR-NC(si-LncRNA PITPNA-AS1+anti-miR-NC组)、si-LncRNA PITPNA-AS1和anti-miR-491-3p(si-LncRNA PITPNA-AS1+anti-miR-491-3p组)。Western Blot、细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和Transwell法分别检测转染前后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白表达、细胞增殖、迁移和侵袭变化。LncBase Predicted v.2和双荧光素酶活性检测分析LncRNA PITPNA-AS1和miR-491-3p的靶向结合。结果与宫颈上皮永生化细胞H8比较,宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、Caski中LncRNA PITPNA-AS1表达水平升高,miR-491-3p表达水平降低(P<0.05)。选择差异最显著的宫颈癌细胞HeLa进行后续研究。低表达LncRNA PITPNA-AS1或过表达miR-491-3p降低CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平、细胞增殖、迁移和侵袭数量(P<0.05)。LncRNA PITPNA-AS1靶向miR-491-3p,并调控miR-491-3p的表达。anti-miR-491-3p逆转低表达LncRNA PITPNA-AS1对宫颈癌细胞HeLa增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论低表达LncRNA PITPNA-AS1通过靶向miR-491-3p基因,抑制宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭。

LncRNA PITPNA-AS1促进非小细胞肺癌增殖及抑制细胞凋亡和自噬

目的探讨长链非编码RNA PITPNA-AS1反义RNA 1(LncRNA PITPNA-AS1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达水平及作用和机制。方法收集NSCLC和癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测LncRNA PITPNA-AS1表达;采用LncRNA PITPNA-AS1 siRNA转染NSCLC细胞,分为si-NC组和si-LncRNA PITPNA-AS1组;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡及ROS;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白caspase 3、caspase 9、Bcl-2、Bax,自噬蛋白LC3B、Atg5、Beclin-1及ERK信号通路p38、ERK蛋白表达。结果LncRNA PITPNA-AS1在NSCLC组织和细胞系中表达均上调(P<0.05)。肿瘤大小>3 cm、TNM分期Ⅲ—Ⅳ患者的LncRNA PITPNA-AS1表达量高于肿瘤大小≤3 cm、TNM分期Ⅰ—Ⅱ患者(P<0.05)。与si-NC组相比,si-LncRNA PITPNA-AS1组NSCLC细胞中LncRNA PITPNA-AS1表达显著减少、NSCLC细胞增殖能力显著降低、ROS产生增多并发生细胞凋亡和自噬,细胞中caspase 3、caspase 9、Bax、Beclin-1、LC3B、Atg5、p-p38、pERK蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少(均P<0.05)。结论LncRNA PITPNA-AS1调控ROS/ERK信号途径促进非小细胞肺癌增殖及抑制细胞凋亡和自噬。

lncRNA PITPNA-AS1靶向miR-367-3p调控多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)PITPNA反义RNA 1(PITPNA-AS1)靶向miR-367-3p调控多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)测定多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226、MM1.S、OPM-2中lncRNA PITPNA-AS1和miR-367-3p表达。在RPMI-8226细胞中转染si-NC(si-NC组)、si-lncRNA PITPNA-AS1(si-lncRNA PITPNA-AS1组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-367-3p mimics(miR-367-3p组),或同时转染anti-miR-NC与si-lncRNA PITPNA-AS1(anti-miR-NC+si-lncRNA PITPNA-AS1组)、anti-miR-367-3p与si-lncRNA PITPNA-AS1(anti-miR-367-3p+si-lncRNA PITPNA-AS1组),并将未转染的细胞设为对照组(NC组)。采用Western Blot、细胞计数试剂盒8(CCK-8)、细胞克隆形成实验和Transwell实验分别测定RPMI-8226细胞的基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白表达、细胞活力、克隆形成和迁移、侵袭。双荧光素酶活性检测实验分析lncRNA PITPNA-AS1和miR-367-3p的靶向关系。结果与成骨细胞MC3T3-E1比较,多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226、MM1.S、OPM-2中lncRNA PITPNA-AS1表达量均增加,miR-367-3p的表达量均减少(P<0.05)。干扰lncRNA PITPNA-AS1或miR-367-3p高表达显著降低RPMI-8226细胞的MMP2蛋白、MMP9蛋白的表达量,并降低细胞活力、克隆形式数、迁移和侵袭数量(均P<0.05)。lncRNA PITPNA-AS1靶向调控miR-367-3p的表达。anti-miR-367-3p可以逆转干扰lncRNA PITPNA-AS1对多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖、迁移和侵袭的影响。结论干扰lncRNA PITPNA-AS1通过靶向调控miR-367-3p,从而抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

lncRNA PITPNA-AS1靶向miR-92a-3p/TCF21对卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA PITPNA-AS1在卵巢癌中的作用及其可能的分子机制。方法采用荧光实时定量聚合酶链式反应(qPCR)技术检测卵巢癌组织和对应的癌旁组织、卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞系中PITPNA-AS1的表达水平。将PITPNA-AS1表达最少的细胞系分为对照组和实验组,分别转染阴性对照质粒或PITPNA-AS1质粒。细胞计数实验(CCK-8)法和Transwell法检测细胞的增殖活性和侵袭能力。生物信息学方法预测和双荧光素酶活性报告基因实验验证PITPNA-AS1作用的分子机制。qPCR和Western blot检测PITPNA-AS1相互作用的基因表达。结果PITPNA-AS1在卵巢癌组织中表达低于癌旁组织(P<0.01)。PITPNA-AS1在卵巢癌细胞系中的表达水平均低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05),OVCAR-3细胞表达最少(P<0.01)。与对照组比较,过表达PITPNA-AS1能抑制OVCAR-3细胞的增殖活力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01)。PITPNA-AS1与miR-92a-3p存在靶向关系(P<0.01),miR-92a-3p与转录因子21(TCF21)存在靶向关系(P<0.01)。过表达PITPNA-AS1导致OVCAR-3细胞中miR-92a-3p的表达下降(P<0.01),TCF21基因的表达增加(P<0.01)。结论PITPNA-AS1在卵巢癌组织和细胞系中低表达,PITPNA-AS1可靶向调控miR-92a-3p/TCF21抑制卵巢癌OVCAR-3细胞的增殖和侵袭。

LncRNA HCG18通过靶向miR-140-3p/PD-L1通路对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨长非编码(lncRNA)HCG18通过微小RNA-140-3p(miR-140-3p)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法 选择人鼻咽癌CNE2细胞、人正常鼻黏膜上皮细胞HNEpC细胞,将CNE2细胞分为HCG18组、pcDNA3.1组、sh-HCG18组、sh-NC组、miR-140-3p组、miR-NC组、miR-140-3p inhibitor组、Scramble组、HCG18+miR-NC组、HCG18+miR-140-3p组、miR-140-3p inhibitor+sh-NC组及miR-140-3p inhibitor+sh-PD-L1组。用CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测PD-L1蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1 mRNA水平,生物信息学、双荧光素酶报告实验分析lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1的靶向关系。结果 CNE2细胞lncRNA HCG18、PD-L1蛋白及其mRNA表达水平高于HNEpC细胞,miR-140-3p表达水平低于HNEpC细胞(P <0.05)。上调lncRNA HCG18或下调miR-140-3p后CNE2细胞增殖、细胞迁移与侵袭能力增强,PD-L1蛋白、PD-L1 mRNA水平升高(P <0.05);下调lncRNA HCG18或上调miR-140-3p后CNE2细胞增殖、细胞迁移与侵袭能力降低,PD-L1蛋白、PD-L1 mRNA水平降低(P <0.05)。miR-140-3p与lncRNA HCG18、PD-L1均有靶向关系。上调miR-140-3p表达可逆转上调lncRNA HCG18对CNE2细胞增殖、迁移与侵袭的促进作用;沉默PD-L1可逆转下调miR-140-3p对CNE2细胞增殖、迁移与侵袭的促进作用。结论 过表达lncRNA HCG18可通过海绵化miR-140-3p,上调PD-L1表达,促进CNE2细胞增殖、迁移与侵袭。

LncRNA FAS-AS1转染对K562细胞生物学行为的影响

目的探究LncRNA FAS-AS1对K562白血病细胞生物学行为的影响。方法取对数生长期的K562细胞培养分为空白对照组(正常培养,不做任何处理),阴性对照组(转染LncRNA FAS-AS1空质粒),实验组(Lnc RNA FAS-AS1)。MTT法检测细胞增殖情况,Western blot检测细胞中mTOR、AMPK蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组K562细胞FAS-AS1 mRNA表达显著上升(P<0.05),但空白组与阴性对照组细胞中FAS-AS1 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。随着培养时间的延长,实验组K562细胞的增殖率显著低于对照组(P<0.05),但空白与阴性对照组细胞增殖率比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组凋亡率显著高空白对照和阴性对照组(P<0.05),而空白对照组与阴性对照组凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组K562细胞AMPK蛋白表达水平显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),而空白对照组和阴性对照组K562细胞中表达水平蛋白mTOR、AMPK比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论LncRNA FAS-AS1过表达对K562白血病细胞的生物学行为有显著影响,能够降低细胞的增殖数量及增殖活性,可能与活化AMPK基因进而阻断mTOR活性相关。

敲降lncRNA UCA1降低人膀胱癌细胞系T24对吉西他滨耐药

目的探讨lncRNA UCA1对人膀胱癌细胞系T24体外对吉西他滨(GEM)耐药的影响及相关分子机制。方法用RT-qPCR检测T24细胞和T24/GEM细胞中UCA1 mRNA表达。用不同浓度GEM(0.1、1和10μmol/L)刺激T24/GEM细胞48 h,用LC3染色法观察自噬斑,Western blot检测自噬相关蛋白质表达。将UCA1-shRNA或UCA1-shRNA+pcDNA-Bcl-2转入T24/GEM细胞,用MTT法和流式细胞测量术评估细胞对GEM的敏感性;用Western blot检测p53、Bcl-2和自噬相关蛋白质的表达。结果T24/GEM细胞中UCA1的表达显著高于亲本T24细胞(P<0.05)。在0~10μmol/L浓度范围的GEM呈依赖性促进T24/GEM细胞自噬(P<0.05)。敲降UCA1后,T24/GEM细胞对GEM的敏感性增加(P<0.05),自噬能力减弱(P<0.05),p53和Bcl-2表达降低(P<0.05)。Bcl-2过表达能部分逆转UCA1-shRNA对T24/GEM细胞的GEM增敏和抑制自噬的作用(P<0.05)。结论敲降lncRNA UCA1通过抑制Bcl-2介导的自噬降低T24/GEM细胞对GEM的耐药性。

lncRNA LUCAT1调控AREG的表达促进宫腔粘连的发生

目的探讨lncRNA LUCAT1通过调控双调蛋白(amphiregulin,AREG)对宫腔粘连发生的作用,为宫腔粘连的防治提供新的分子靶点。方法在宫腔粘连组织和经过转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理的子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cell,ESC)中采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测lncRNA LUCAT1、AREG及纤维化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠalpha 1 chain protein,COL1A1)的mRNA表达水平,采用Western blot法检测AREG、α-SMA、COL1A1的蛋白表达水平。si-LUCAT1、pcDNA LUCAT1、si-AREG分别转染ESC,RT-qPCR方法进一步检测lncRNA LUCAT1和AREG的mRNA表达水平。然后,si-LUCAT1和pcDNA LUCAT1分别转染入ESC中并经过TGF-β1处理48h,采用Western blot法进一步检测AREG、α-SMA、COL1A1的蛋白表达水平,细胞增殖实验和细胞凋亡实验检测细胞增殖率和细胞凋亡率。结果宫腔粘连组织和经TGF-β1处理的ESC中lncRNA LUCAT1、AREG及纤维化标志物α-SMA、COL1A1的表达水平上调。AREG随lncRNA LUCAT1的变化而变化,而下调AREG后lncRNA LUCAT1的表达无明显变化,lncRNA LUCAT1正向调节AREG。在ESC向成纤维细胞转化过程中,si-LUCAT1显著抑制AREG、α-SMA、COL1A1的蛋白表达水平,抑制细胞增殖促进细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.01);pcDNA LUCAT1显著诱导AREG、α-SMA、COL1A1的蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论lncRNA LUCAT1通过上调AREG的表达促进宫腔粘连的发生。lncRNA LUCAT1/AREG轴可能为宫腔粘连的防治提供新的分子靶点。

脑小血管病患者血清lncRNA BIRF,lncRNA FAL1表达水平与脑白质病变程度的相关性分析

目的探究脑小血管病(CSVD)患者血清长链非编码RNA(lncRNA)脑缺血相关因子(BIRF)、1号染色体上的局部扩增lncRNA(lncRNA FAL1)表达与脑白质病变(WML)程度的相关性分析。方法选取承德医学院附属医院2021年6月~2023年6月收治的102例CSVD患者,根据WML诊断标准将CSVD患者分为WML组(n=72)和非WML组(n=30)。并根据Fazekas评分进一步将WML组分为轻度WML组(n=24)、中度WML组(n=36)和重度WML组(n=12)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测血清中lncRNA BIRF,lncRNA FAL1水平;采用Pearson相关分析血清lncRNA BIRF,lncRNA FAL1水平的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA BIRF,lncRNA FAL1水平对CSVD患者发生重度WML的诊断价值。结果WML组患者年龄(70.50±5.86岁)、高血压史(有/无:43/29例)、糖尿病史(有/无:45/27例)、IL-33(68.35±6.80 pg/ml),IL-18(97.78±9.65 ng/L)、泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)(0.29±0.10μg/L),lncRNA BIRF水平(2.45±0.30)显著高于非WML组(67.10±5.76岁,11/19例,9/21例,62.48±6.13 pg/ml,92.56±9.37 ng/L,0.24±0.06μg/L,1.02±0.11),血清lncRNA FAL1表达(0.52±0.10)显著低于非WML组(1.04±0.15),差异具有统计学意义(t=2.683,4.518,8.978,4.085,2.510,2.550,25.346,20.500,均P<0.05)。轻度WML组、中度WML组、重度WML组CSVD患者血清lncRNA BIRF水平(2.23±0.23,2.47±0.31,2.82±0.42)依次升高,血清lncRNA FAL1水平(0.60±0.15,0.51±0.09,0.40±0.04)依次降低,差异具有统计学意义(F=14.913,13.899,均P<0.05)。Pearson相关分析,WML组患者血清lncRNA BIRF与lncRNA FAL1水平呈负相关(r=-0.603,P<0.001);WML患者血清lncRNA BIRF与Fazekas评分呈正相关(r=0.483,P<0.001),血清lncRNA FAL1与Fazekas评分呈负相关(r=-0.507,P<0.001)。血清lncRNA BIRF,lncRNA FAL1水平单独及二者联合诊断CSVD患者发生重度WML的AUC(95%CI)分别为0.756(0.641~0.850),0.839(0.733~0.915)和0.892(0.796~0.953),二者联合检测优于血清lncRNA BIRF单独检测(Z=2.111,P=0.035)。结论CSVD伴WML患者血清lncRNA BIRF水平显著升高,lncRNA FAL1水平显著降低,均与CSVD患者WML程度相关。

lncRNA PVT1对急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA PVT1基因(lncRNA PVT1)对人急性髓系白血病(AML)HL-60细胞增殖、凋亡的影响。方法 选取106例AML患者为试验组,同期健康体检志愿者100例为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测外周血lncRNA PVT1表达。以干扰lncRNA PVT1的质粒转染HL-60细胞株(si-lncRNA PVT1组),同时将转染空载体的HL-60细胞设为对照组(si-Control组),另设正常组。RT-qPCR技术检测细胞中lncRNA PVT1的表达;CCK-8检测细胞的增殖率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化;Western blot和RT-qPCR技术检测细胞中细胞周期相关蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase 3)表达。结果 试验组患者lncRNA PVT1表达水平高于对照组(P<0.05)。干扰lncRNA表达后HL-60细胞中,si-lncRNA PVT1组lncRNA PVT1水平显著低于si-Control组(P<0.05)。si-lncRNA PVT1组细胞增殖率显著低于si-Control组(P<0.05)。敲低lncRNA PVT1后细胞被显著阻滞于G1期,且明显诱导细胞的凋亡(P<0.05)。si-lncRNA PVT1组与si-Control组比较,Cyclin D1、Bcl-2表达降低,P21、Bax、Caspase 3表达升高(P<0.05)。结论 敲低lncRNA PVT1可抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,提示lncRNA PVT1可能作为AML防治的一个分子靶点。

滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的治疗作用及对lncRNAPVT1、miR-30b-5p表达的影响

【目的】探讨滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠的治疗作用及机制。【方法】将96只大鼠随机分为正常组,模型组,滋金补水膏低、中、高剂量组,盐酸氨溴索组、滋金补水膏高剂量+pcDNA组,滋金补水膏高剂量+pcDNA-人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用气道滴注脂多糖(LPS)联合烟雾暴露法构建COPD模型。建模成功后,进行给药干预。给药结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;流式细胞术检测大鼠外周血中辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理变化,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清和肺组织中长链非编码RNA(lncRNA)PVT1、miR-30b-5p表达,Western Blot法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PVT1与miR-30b-5p的关系。【结果】与正常组比较,模型组肺泡间隔变大,支气管周围有大量炎症细胞浸润,Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平降低,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例、Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平升高(均P<0.05);与模型组比较,滋金补水膏低、中、高剂量组及盐酸氨溴索组大鼠肺组织病理损伤减轻、Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例,Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平降低(均P<0.05)。lncRNA PVT1靶向调控miR-30b-5p表达。【结论】滋金补水膏可能通过调节lncRNA PVT1/miR-30b-5p轴促进Th17/Treg细胞平衡来抑制COPD大鼠炎症反应。

LncRNA PURPL调节miR-342-3p/PIK3R1轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探究长链非编码RNA(PURPL)调节微小RNA-342-3p(miR-342-3p)/磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:细胞实验:将si-NC、si-PURPL、si-PURPL+inhibitor NC、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor分别转染至肝癌细胞Huh-7细胞并命名为si-NC组、si-PURPL组、si-PURPL+inhibitor NC组、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor组,未做任何处理的Huh-7细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PURPL、miR-342-3p、PIK3R1的关系;qRT-PCR检测人正常肝细胞系L02和人肝癌细胞系Huh-7中LncRNA PURPL、miR-342-3p表达;Western blot检测L02细胞、Huh-7细胞PIK3R1蛋白水平;MTT法检测Huh-7细胞增殖情况;流式细胞术检测Huh-7细胞凋亡率;Transwell检测Huh-7细胞侵袭数量;划痕试验测定Huh-7细胞迁移。体内实验:构建裸鼠异种移植模型,分组同细胞实验,检测肿瘤体积和肿瘤重量。结果:细胞实验结果显示:与si-NC组相比,si-PURPL组Huh-7细胞OD490值、划痕愈合率、侵袭细胞数量、LncRNA PURPL、PIK3R1水平显著下降(P<0.05),Huh-7细胞凋亡率、miR-342-3p相对表达量显著升高(P<0.05),而抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL抑制Huh-7细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡的效果;LncRNA PURPL负向调控miR-342-3p/PIK3R1轴。体内结果显示:si-PURPL组裸鼠肿瘤体积和质量较si-NC组下降(P<0.05);抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL对体内肿瘤生长的抑制作用。结论:沉默LncRNA PURPL可抑制Huh-7细胞的恶性生物学行为,其机制可能与调控miR-342-3p/PIK3R1轴有关。

LncRNA ZEB2-AS1联合亲本基因ZEB2在卵巢癌SKOV3细胞中的作用及其机制研究

目的探索LncRNA ZEB2-AS1联合亲本基因ZEB2在卵巢癌SKOV3细胞中的功能及可能的机制。方法原位杂交和免疫组织化学分别检测ZEB2-AS1和ZEB2在卵巢癌组织中的表达;建立ZEB2-AS1的过表达和沉默SKOV3细胞模型;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡和周期;细胞免疫荧光和Western blotting检测上皮-间充质相互作用(EMT)相关蛋白的表达;双萤光素酶基因报告实验检测ZEB2-AS1与ZEB2、microRNA-145(miR-145)的结合关系。结果ZEB2-AS1和ZEB2均表达于卵巢癌组织中的细胞质和细胞核;相比SKOV3细胞,ZEB2-AS1过表达的SKOV3细胞增殖能力增强(P<0.05),凋亡能力减弱(P<0.05),侵袭和迁移能力增强(P<0.05),S期细胞数增加(P<0.05),G1期细胞数减少(P<0.05);EMT相关蛋白E-cadherin相对表达量降低(P<0.05),N-cadherin和Vimentin相对表达量升高(P<0.05);而ZEB2-AS1沉默的SKOV3细胞则相反。双萤光素酶报告实验结果证实,ZEB2-AS1和miR-145具有结合关系,ZEB2-AS1与ZEB2 mRNA具有结合关系。结论LncRNA ZEB2-AS1联合亲本基因ZEB2在卵巢癌SKOV3细胞中发挥促EMT的功能作用。

lncRNA NEAT1通过Klotho/mTOR轴调控慢性脑低灌注大鼠的认知障碍

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA)核富集丰度转录物1 (NEAT1)对慢性脑低灌注(CCH)大鼠认知障碍的调控作用和潜在机制。方法双侧颈总动脉闭塞术(BCCAO)诱导CCH模型大鼠。将大鼠分为5组(每组n=10):Ⅰ组(假手术组);Ⅱ组(BCCAO手术组);Ⅲ组[BCCAO后于海马区注射0.3 mg·kg^(-1)·w^(-1)的沉默lncRNA NEAT1的短发夹RNA重组质粒(shNEAT1),持续12 w];Ⅳ组[BCCAO后于海马区每周注射0.3 mg·kg^(-1)·w^(-1)的shNEAT1和50 mg·kg^(-1)·w^(-1)的沉默克洛托蛋白(Klotho)的短发夹RNA重组质粒(shKlotho),持续12 w];V组[BCCAO后于海马区注射0.3 mg·kg^(-1)·w^(-1)的shNEAT1和25mg·kg^(-1)哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的抑制剂(AZD-8055),持续12w]。行Morris水迷宫实验记录逃避潜伏期。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)测lncRNA NEAT1的表达。Western blot法检测Klotho、mTOR、磷酸化的mTOR (p-mTOR)、神经核抗原(NeuN)、多聚腺苷酸核糖聚合酶(PARP)、半胱天冬酶-3(caspase-3)、切割模式的半胱天冬酶-3(cleaved-caspase-3)的表达。免疫荧光化学检测海马区NeuN阳性细胞数。结果 与Ⅰ组比,Ⅱ组大鼠的逃避潜伏期延长,lncRNA NEAT1、PARP、cleaved-caspase-3的表达均上调,NeuN、Klotho和p-mTOR的表达均下调,NeuN阳性的细胞数减少(~均P<0.05)。与Ⅱ组比,Ⅲ组大鼠的逃避潜伏期缩短,且海马组织中lncRNA NEAT1、PARP、cleaved-caspase-3的表达均下调,NeuN、Klotho和p-mTOR的表达均上调,NeuN阳性的细胞数增加(~均P><0.05)。与Ⅲ组比,Ⅳ组和Ⅴ组中大鼠的逃避潜伏期延长,且海马组织中PARP、cleaved-caspase-3的表达均上调,NeuN、Klotho和p-mTOR的表达均下调,NeuN阳性细胞数都减少(~均P <0.05)。结论 lncRNA NEAT1通过负调控Klotho/mTOR轴促进CCH大鼠的认知障碍,为研究CCH的有效治疗靶点提供理论依据。

LncRNA NORAD通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用机制

目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组织中LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1表达。体外分离培养人VSMC,随机分为对照组、LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组、共转染(LncRNA NORAD siRNA+miR-513b-5p inhibitor)组、共转染阴性对照(LncRNA NORAD siRNA阴性对照+miR-513b-5p inhibitor阴性对照)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1 mRNA表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况;采用Hoechst 33342染色和免疫荧光染色检测各组细胞凋亡情况;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;采用免疫印记实验检测各组细胞上皮间充质转化(EMT)标志蛋白神经钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;采用双荧光素酶报告实验分析VSMC中LncRNA NORAD对miR-513b-5p、miR-513b-5p对GREM1的靶向调控。结果:与正常组织比较,颅内动脉瘤组织LncRNA NORAD、GREM1 mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-513b-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);共转染阴性对照组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与LncRNA NORAD siRNA组比较,共转染组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NORAD可通过上调miR-513b-5p表达而降低GREM1表达,从而抑制VSMC增殖与侵袭迁移,并促使其凋亡。

咪达唑仑通过调控LncRNA NR2F2-AS1对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨咪达唑仑对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响及其可能作用机制。方法 体外培养人肾癌细胞786-O,随机分组:咪达唑仑0、20、40、60μmol/L组、si-NC组、si-核受体亚家族2组F成员反义RNA(NR2F2-AS)1组、咪达唑仑+pcDNA组、咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组;CCK-8法、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡及迁移;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA NR2F2-AS1表达量;Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关蛋白(Bax)表达量。结果 与咪达唑仑0μmol/L组比较,咪达唑仑20、40、60μmol/L组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显升高,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显降低,长链非编码(Lnc)RNA NR2F2-AS1表达量明显降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);转染si-NR2F2-AS1可明显抑制细胞增殖及迁移,并可明显提高细胞凋亡率(P<0.05);与咪达唑仑+pcDNA组比较,咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显降低,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可通过抑制LncRNA NR2F2-AS1表达而减弱肾癌细胞增殖及迁移能力,并可诱导肾癌细胞凋亡。

食管鳞癌LncRNA FAL1、miR-637表达与临床病理参数及预后关系研究初探

目的检测食管鳞癌组织中的长链非编码RNA(LncRNA)FAL1与miR-637表达情况,并探讨其与患者临床特征及预后的关系。方法选取2018年1月至2021年6月在广西中医药大学附属国际壮医医院住院治疗的48例食管鳞癌患者,检测食管鳞癌组织及癌旁组织LncRNA FAL1、miR-637表达水平,并探讨其与临床特征及预后的关系。结果食管鳞癌组织中LncRNA FAL1表达量高于癌旁组织,miR-637表达量低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.01)。年龄、性别、吸烟、嗜酒情况不影响食管鳞癌组织LncRNA FAL1、miR-637表达量(P>0.05);TNM分期、淋巴结转移以及癌细胞分化程度影响食管鳞癌组织LncRNA FAL1、miR-637表达量(P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示,LncRNA FAL1高表达组的3年总生存率低于LncRNA FAL1低表达组(P=0.004);miR-637高表达组和miR-637低表达组的3年总生存率比较,差异无统计学意义(P=0.542)。结论食管鳞癌组织中LncRNA FAL1表达量高于癌旁组织,miR-637表达量低于癌旁组织,二者与肿瘤TNM分期、淋巴结转移以及癌细胞分化程度有关,有望成为食管鳞癌诊断、治疗以及评估预后的新生物学指标。

丹蛭降糖胶囊通过LncRNA TUG1/β-catenin信号通路保护线粒体功能减轻血管钙化的机制

目的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)成骨样分化是血管钙化(vascular calcification,VC)细胞学基础。线粒体功能障碍在VSMCs成骨样转化中起重要作用。本研究旨在探讨丹蛭降糖胶囊(Danzhi Jiangtang capsules,DJC)通过调节LncRNA TUG1/β-catenin信号通路保护VSMCs线粒体功能减轻血管钙化的机制。方法使用β-甘油磷酸盐来诱导血管平滑肌细胞的钙化模型,并采用维生素D 3+高脂饲料来诱导糖尿病大鼠的血管钙化模型。Von Kossa染色检测细胞和血管组织钙化;用邻甲酚酞络合物比色法测定钙含量;采用对硝基苯磷酸盐比色法测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;采用RT-qPCR分析VSMCs成骨样转化相关基因骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein2,BMP2)、平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin alpha,ɑ-SMA)及长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(long noncoding RNA taurine up-regulated1,LncRNA TUG1)、β-连环蛋白(β-catenin)表达;Western blot分析BMP2、ɑ-SMA及β-catenin的蛋白表达;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位;透射电镜观察线粒体结构。结果DJC降低β-甘油磷酸盐诱导的VSMCs中LncRNA TUG1的表达,下调β-catenin的表达,降低ALP活性和钙沉积,保护线粒体功能,恢复膜电位,减少VSMCs成骨样转化。重要的是,DJC通过下调糖尿病下肢血管组织LncRNA TUG1、β-catenin的表达,上调ɑ-SMA的表达来减轻糖尿病下肢VC。结论DJC对糖尿病下肢VC有明显的改善作用,机制是通过LncRNA TUG1/β-catenin信号保护线粒体功能减少VSMCs成骨细胞转化。

沉默lncRNA MCF2L-AS1通过miR-138-5p/AnxA2轴抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究lncRNA MCF2L-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响与机制。方法:qRT-PCR检测正常人乳腺上皮细胞系MCF-10A、乳腺癌细胞系(MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231)中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p水平;将si-NC、si-MCF2L-AS1、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor分别转染至MDA-MB-415细胞并命名为si-NC组、si-MCF2L-AS1组、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC组、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor组,未做任何处理的MDA-MB-415细胞记为NC组。qRT-PCR检测MDA-MB-415细胞中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p表达;MTT法检测MDA-MB-415细胞增殖情况;流式细胞术检测MDA-MB-415细胞凋亡率;Transwell检测MDA-MB-415细胞侵袭、迁移数量;Western blot检测MDA-MB-415细胞E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、AnxA2蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p、AnxA2的关系;小鼠异种移植实验检测肿瘤生长。结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231细胞中lncRNA MCF2L-AS1、AnxA2水平显著上调(P<0.05),miR-138-5p表达显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-MCF2L-AS1组MDA-MB-415细胞OD 560 nm值、迁移、侵袭细胞数量、lncRNA MCF2L-AS1表达、N-cadherin、Vimentin蛋白水平、小鼠肿瘤体积、肿瘤质量显著下降(P<0.05),MDA-MB-415细胞凋亡率、miR-138-5p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而抑制miR-138-5p表达减弱了沉默lncRNA MCF2L-AS1抑制MDA-MB-415细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的效果;lncRNA MCF2L-AS1负向调控miR-138-5p/AnxA2轴。结论:沉默lncRNA MCF2L-AS1可能通过上调miR-138-5p来下调AnxA2的表达,进而抑制乳腺癌MDA-MB-415细胞增殖、迁移和侵袭。

LncRNA MAFG-AS1:恶性肿瘤的潜在生物标志物和治疗靶点

长链非编码RNA(long non-coding RNAs,LncRNAs)在肿瘤发展中的调控作用已引起广泛关注。LncRNA MAFG-AS1是一种新型的致癌长链非编码RNA,在肺癌、乳腺癌和肝细胞癌等多种肿瘤组织中高表达,与肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭等恶性行为密切相关。此外,大量证据表明,LncRNA MAFG-AS1的上调与肿瘤患者的临床病理分期和不良生存预后有关。本文系统总结了近年来LncRNA MAFG-AS1在各种肿瘤中的表达、生物学功能、分子机制和临床意义的研究,并强调了LncRNA MAFG-AS1可作为新型诊断、预后生物标志物,以及癌症治疗的重要靶标。