LncRNA PVT1在胃癌中的研究进展

长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位体1(Long Non-Coding Ribonucleic Acid Plasmacytoma Variant Translocation 1,LncRNA PVT1)是一种在多种肿瘤中异常表达的LncRNA,与肿瘤的发生、侵袭、患者预后等密切相关。近年来,越来越多的研究表明LncRNA PVT1在胃癌中发挥重要作用。本文将聚焦于LncRNA PVT1在胃癌发生发展及治疗过程中的最新研究进展,探讨并展望其在胃癌的发展及治疗中的价值与可能性。

脓毒症患者血lncRNA PVT1、lncRNA TUG1、HMGB1的表达及临床意义

目的 探讨脓毒症患者外周血长链非编码RNA(lncRNA)PVT1、lncRNA TUG1、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达及临床意义。方法 选取脓毒症患者87例为脓毒症组,按是否休克将其分为非休克组(54例)和休克组(33例);随机选取同期健康人群50例为对照组。比较各组血清HMGB1、lncRNA PVT1、lncRNA TUG1表达情况,并分析其相关性。结果 与对照组比较,脓毒症组血lncRNA PVT1、HMGB1升高,lncRNA TUG1降低;且休克组较非休克组更为显著(P<0.05)。脓毒症患者HMGB1与lncRNA PVT1呈正相关,与lncRNA TUG1呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析表明,lncRNA PVT1、lncRNA TUG1和HMGB1联合检测对脓毒症的诊断效能最高。结论 lncRNA PVT1、lncRNA TUG1和HMGB1与脓毒症病情严重程度密切相关,三者联合检测对脓毒症患者的诊断有一定预测价值。

LncRNA PVT1调控巨噬细胞极化抑制胰腺癌细胞侵袭

目的探讨lncRNA PVT1调控巨噬细胞向M1型极化对胰腺癌细胞侵袭的影响及机制。方法培养单核细胞株THP-1,通过感染NC shRNA慢病毒、PVT1 shRNA慢病毒、miR-NC慢病毒、miR-409-5p慢病毒、miR-409-5p抑制物慢病毒及嘌呤霉素筛选的方法得到稳定转染的THP-1细胞,检测lncRNA PVT1、miR-409-5p、音猬因子(SHH)的表达水平;进行M1型极化诱导后检测TNF-α、IL-1β、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达水平。稳定转染的THP-1细胞进行M1型极化诱导后与胰腺癌细胞株PANC-1细胞共培养,检测PANC-1细胞的侵袭数目。结果稳定转染PVT1 shRNA后,THP-1细胞中lncRNA PVT1、SHH表达明显降低(NC shRNA组、PVT1 shRNA组lncRNA PVT1分别为1.00±0.12、0.43±0.05;SHH分别为1.00±0.13、0.47±0.05)(均P<0.05),miR-409-5p、TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS表达明显增加(NC shRNA组、PVT1shRNA组的miR-409-5p分别为1.00±0.08、1.83±0.19;TNF-α分别为1.00±0.11、1.93±0.25,IL-1β分别为1.00±0.08、1.77±0.21,IL-6分别为1.00±0.09、2.31±0.20;iNOS分别为1.00±0.13、2.09±0.17)(均P<0.05),共培养体系中PANC-1细胞的侵袭数目明显减少(P<0.05);稳定转染miR-409-5p后,THP-1细胞中SHH表达明显降低(P<0.05),miR-409-5p、TNF-α、IL-1β、IL-6、i NOS表达明显增加(P<0.05),共培养体系中PANC-1细胞的侵袭数目明显减少(P<0.05);稳定转染PVT1 shRNA与miR-409-5p抑制物后,THP-1细胞中SHH表达明显增加,miR-409-5p、TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS表达明显降低(均P<0.05),共培养体系中PANC-1细胞的侵袭数目明显增加(P<0.05)。结论敲低lncRNA PVT1能够促进巨噬细胞M1型极化并抑制胰腺癌细胞侵袭,这一调控作用可能与靶向miR-409-5p/SHH轴有关。

lncRNA PVT1通过靶向miR-761对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨lncRNA PVT1对缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激的影响及其对miR-761的调控作用。方法采用H/R诱导大鼠心肌细胞H9c2建立细胞损伤模型,分别将si-NC、si-PVT1、miR-mimics-NC、miR-761 mimics、si-PVT1与miR-inhibitor-NC、si-PVT1与miR-761 inhibitor转染至H/R诱导的心肌细胞;采用qRT-PCR法检测PVT1、miR-761的表达量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的含量;双荧光素酶报告实验检测PVT1与miR-761的靶向关系;Western blot法检测B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤2相关蛋白(Bax)的蛋白表达量。结果与对照组比较,H/R组PVT1的表达水平升高(P<0.05),miR-761的表达水平降低(P<0.05)。与H/R+si-NC组比较,H/R+si-PVT1组凋亡率及Bax蛋白水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平及SOD、CAT的活性升高(P<0.05),MDA的含量降低(P<0.05)。与H/R+miR-mimics-NC组比较,H/R+miR-761 mimics组凋亡率及Bax蛋白水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平及SOD、CAT的活性升高(P<0.05),MDA的含量降低(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实PVT1可靶向结合miR-761;干扰miR-761可明显逆转沉默PVT1对H/R诱导的心肌细胞氧化应激及凋亡的作用。结论沉默PVT1可通过上调miR-761而抑制细胞凋亡及氧化应激从而减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

LncRNA PVT1通过竞争miR-149-5p上调CHI3L1并影响变应性鼻炎进展的研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)PVT1对变应性鼻炎(AR)进展的影响及其相关作用机制。方法24只BALB/c小鼠,其中6只作为对照组,余18只采用卵白蛋白和氢氧化铝建立AR模型并采用随机数字表法均分为模型组、AR+NC组(尾静脉注射空载体慢病毒)、AR+shPVT1组(尾静脉注射LncRNA PVT1干扰载体慢病毒),每组6只。采用行为学评分评估各组小鼠过敏症状;HE染色观察各组小鼠鼻黏膜组织病理学改变;实时荧光定量PCR检测各组小鼠鼻黏膜组织中LncRNA PVT1、miR-149-5p和几丁质酶-3样蛋白1(CHI3L1)mRNA的表达;Western blot检测CHI3L1蛋白表达;ELISA分析各组小鼠血清IgE、白细胞介素(IL)-5、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。构建LncRNA PVT1和CHI3L1的野生型(WT)和突变型(MT)荧光素酶报告质粒,单独或同时与miR-149-5p mimic共转染293T细胞,采用双荧光素酶实验分析并计算各组细胞荧光素酶相对活性。结果与模型组相比,AR+shPVT1组小鼠行为学评分降低;血清中IgE、IL-5和TNF-α水平降低;鼻黏膜组织中LncRNA PVT1 mRNA表达水平降低,miR-149-5p mRNA表达水平升高,CHI3L1 mRNA及蛋白水平均降低,鼻黏膜组织炎症反应减轻。双荧光素酶实验证实LncRNA PVT1通过竞争性结合miR-149-5p,上调miR-149-5p靶基因CHI3L1的表达。结论在AR模型小鼠中异常高表达的LncRNA PVT1通过发挥竞争性内源RNA作用抑制miR-149-5p表达而上调CHI3L1的表达,引发小鼠鼻黏膜组织的炎性症状并促进过敏反应。

LncRNA PVT1/miR-124轴靶向Jagged-1/Notch通路抑制晶状体纤维化的分子机制研究

目的 探究环状LncRNA PVT1调节人晶状体上皮细胞(LECs)纤维化的作用及可能的分子机制。方法 收集新鲜晶状体前囊膜标本,包括前囊下白内障(ASC)手术眼和健康死后眼各9例。体外培养SRA01/04细胞,并分为空白组、TGFβ2组、si-control组、si-PVT1组、si-PVT1+miR-NC组、si-PVT1+miR-124-inhibitor组。除空白组外,其余各组在转染相应序列后,用5 ng·m LTGFβ2作用48 h。提取组织或细胞RNA并进行微阵列分析。应用实时荧光定量PCR法检测组织样本或细胞中LncRNA PVT1、miR-124表达。采用双荧光素酶报告系统和RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP)法分析LncRNA PVT1、miR-124、Jagged-1之间的靶向关系。Western blot法检测各组细胞Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3、Snail、Slug、纤维蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、肌动蛋白α (α-SMA)等蛋白表达。结果 LncRNA PVT1在ASC眼的前囊膜组织或TGFβ组SRA01/04细胞中表达上调,同时miR-124表达水平降低(P<0.05),且LncRNA PVT1与miR-124表达水平均呈负相关性(P<0.05)。与空白组相比,TGFβ2组和si-control组FN、α-SMA、ColⅣ、Snail、Slug蛋白表达上调;与TGFβ2组和si-control组比较,si-PVT1组和si-PVT1+miR-NC组上述蛋白表达下调,但si-PVT1+miR-124-inhibitor组可逆转si-PVT1对上述蛋白表达的下调作用(P<0.05)。双荧光素酶报告系统和RIP法分析结果显示,LncRNA PVT1通过“海绵吸附”miR-124,负性调节miR-124的表达。与空白组相比,TGFβ2组Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3蛋白表达显著上调;与TGFβ2组和si-control组比较,si-PVT1组Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3蛋白表达下调,同时si-PVT1+miR-124-inhibitor组可逆转si-PVT1对上述蛋白表达的下调作用(P<0.05)。结论 TGFβ2通过一种LncRNA PVT1依赖机制诱导LECs发生上皮—间充质转化,其机制可能是LncRNA PVT1通过“海绵吸附”miR-124负性调节其表达,进而诱导下游Jagged-1/Notch信号通路激活。

乳腺癌组织中lncRNA PVT1的表达与患者临床特征及总体生存率的关系

目的探讨乳腺癌组织中lncRNA PVT1的表达与患者临床特征及总体生存率的关系。方法采用实时荧光定量PCR法检测乳腺癌组织及其相应癌旁正常组织中lncRNA PVT1的相对表达量;分析lncRNA PVT1表达水平与乳腺癌患者临床特征与总体生存率间的关系。结果lncRNA PVT1在乳腺癌组织中的相对表达量显著高于癌旁正常组织(0.0075 vs 0.003),其差异具有统计学意义(P=0.0186)。lncRNA PVT1表达水平与乳腺癌患者的年龄(χ^2=5.948,P=0.015)、临床分期(χ^2=12.349,P=0.006)、淋巴结转移(χ^2=20.942,P<0.001)、远端转移(χ^2=5.330,P=0.021)和Her2(χ^2=5.221,P=0.022)显著相关。lncRNA PVT1高表达组患者的总体生存率(overall survival,OS)显著低于lncRNA PVT1低表达组,差异具有统计学意义(P=0.036)。结论lncRNA PVT1是一种可预测乳腺癌患者预后的有潜力的生物学指标。

lncRNA PVT1通过miR-1207-5p靶向调控Wnt6/β-catenin2信号通路对高级别浆液性卵巢癌的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)PTV1对高级别浆液性卵巢癌增殖和迁移能力的影响。方法收集61例高级别浆液性卵巢癌患者的癌组织及相应癌旁正常组织,qRT-PCR检测miR-1207-5p、lncRNA PVT1在高级别浆液性卵巢癌组织、癌旁正常组织及不同细胞系中的表达情况。构建lncRNA PVT1沉默细胞系,分为Ovcar3-siPVT1组、Ovcar3-siNC组、NC组。采用MTT和平板克隆实验、Transwell和划痕实验检测细胞增殖、侵袭和迁移;双荧光素酶报告基因检测验证miR-1207-5p与lncRNA PVT1、Wnt6的靶向关系,StarBase和TargetScan网站预测相应miRNA可靶向结合的基因;Western blotting检测Wnt6/β-catenin2信号通路相关蛋白的表达。构建siPVT1+过表达miR-1207-5p、siPVT1+过表达Wnt6细胞系,以siPVT1+siNC为对照,验证lncRNA PVT1的调控作用。结果qRT-PCR结果显示,高级别浆液性卵巢癌组织中lncRNA PVT1的表达水平显著高于正常癌旁组织(P<0.05)。与NC组和Ovcar3-siNC组相比,Ovcar3-siPVT1组中lncRNA PVT1的表达显著下调,细胞克隆数、侵袭数减少,细胞迁移率降低,Wnt6、β-catenin2蛋白表达水平明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果证明miR-1207-5p与lncRNA PVT1、Wnt6具有靶向关系。经StartBase和TargetScan网站预测分析,miR-1207-5p分别与lncRNA PVT1、Wnt6存在靶向结合位点。与siPVT1+NC组相比,siPVT1+过表达miR-1207-5p组和siPVT1+过表达Wnt6组细胞克隆数和迁移数明显增加(P<0.05)。结论lncRNA PVT1在高级别浆液性卵巢癌中高表达。高表达lncRNA PVT1可能通过上调miR-1207-5p表达增强Wnt6/β-catenin2信号通路的活性,从而促进高级别浆液性卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

干扰LncRNA PVT1对LPS所致人支气管上皮细胞16HBE损伤的影响

目的探讨干扰LncRNA PVT1对脂多糖(LPS)所致人支气管上皮细胞16HBE炎症、氧化应激、凋亡的影响及其可能作用机制。方法采用LPS诱导16HBE细胞建立细胞损伤模型,将16HBE细胞分为对照组Control组、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-PVT1组、LPS+si-PVT1+anti-miR-NC组、LPS+si-PVT1+anti-miR-1301-3p组;采用qRT-PCR检测PVT1、miR-1301-3p的表达量;采用ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素13(IL-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测PVT1与miR-1301-3p的靶向关系。结果与Control组比较,LPS组PVT1的表达水平升高(P<0.05),miR-1301-3p的表达水平降低(P<0.05),IL-6、IL-13、TNF-α的水平与MDA、LDH的含量及凋亡率升高(P<0.05),SOD的含量降低(P<0.05);转染siPVT1后可明显降低IL-6、IL-13、TNF-α的水平与MDA、LDH的含量及凋亡率(P<0.05),提高SOD的含量(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实PVT1可靶向调控miR-1301-3p;共转染si-PVT1与anti-miR-1301-3p可明显逆转si-PVT1对LPS所致16HBE细胞炎症、氧化应激及凋亡的作用。结论干扰PVT1可通过上调miR-1301-3p而抑制炎症反应、氧化应激及细胞凋亡从而减轻LPS所致支气管上皮细胞损伤。

LncRNA PVT1通过调节miR-214/STAT6轴减轻哮喘模型小鼠气道炎性反应

目的探究抑制lncRNA PVT1表达对支气管哮喘小鼠气道炎性反应的作用,以及对miR-214/STAT6轴的影响。方法将小鼠随机分成对照组、模型组[用卵清蛋白(OVA)诱导哮喘]、lncRNA PVT1抑制组和lncRNA PVT1 NC组(尾静脉注射lncRNA PVT1抑制物或其阴性对照),每组12只。血细胞计数仪计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞总数、巨噬细胞数、中性粒细胞数和淋巴细胞数;ELISA试剂盒检测BALF上清液中白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)、白介素-13(IL-13)浓度;试剂盒检测血清中IgE水平;HE染色观察肺组织炎性细胞浸润情况并进行评分;RT-qPCR检测肺组织中miR-214和STAT6 mRNA水平;Western blot检测肺组织中STAT6和p-STAT6蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测分析lncRNA PVT1与miR-214靶向关系。结果与对照组相比,模型组小鼠BALF中炎性细胞总数、巨噬细胞数、中性粒细胞数和淋巴细胞数、IL-4、IL-5、IL-13水平、血清中IgE水平及肺组织中炎性细胞浸润程度评分、STAT6 mRNA和蛋白磷酸化水平均显著升高(P<0.05),而肺组织中miR-214水平显著降低(P<0.05)。与模型组和lncRNA PVT1 NC组相比,lncRNA PVT1抑制组BALF中炎性细胞总数、巨噬细胞数、中性粒细胞数和淋巴细胞数、IL-4、IL-5、IL-13水平、血清中IgE水平及肺组织中炎性细胞浸润程度评分、STAT6 mRNA和蛋白磷酸化水平均显著降低(P<0.05),而肺组织中miR-214水平显著升高(P<0.05)。miR-214与lncRNA PVT1具有明显的靶向关系(P<0.05)。结论抑制lncRNA PVT1可能通过靶向提高miR-214表达水平,抑制STAT6磷酸化途径,减轻哮喘小鼠的气道炎性反应。

LncRNA PVT1在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨LncRNA PVT1在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法:RT-qPCR法检测130例CRC患者癌组织和癌旁正常组织中LncRNA PVT1的表达,并揭示其表达的临床意义。结果:与癌旁正常组织相比较癌组织中的LncRNA PVT1呈高表达,其高表达与淋巴结转移和远处转移密切相关,而与T分级关系不大。LncRNA PVT1低表达和高表达患者的中位DFS分别为44个月和26个月(P=0.021);COX分析表明LncRNA PVT1表达水平和TNM分期均是预测DFS的独立影响因子。在Ⅰ期CRC中LncRNA PVT1高表达患者所占的比例显著高于血浆CEA升高患者的比例(P<0.0001)。结论:LncRNA PVT1在CRC的高表达与淋巴结转移和远处转移相关,是预测DFS的独立影响因子,另外其异常表达具有早期诊断CRC的潜在价值。

支气管哮喘患者血清lncRNA PVT1表达与气道炎症、重塑的相关性

目的探究支气管哮喘患者血清长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位基因1(lncRNA PVT1)表达与气道炎症、重塑的相关性。方法选取2019年5月至2020年5月安康市人民医院呼吸科收治的80例支气管哮喘患者作为研究对象,将入组患者分为急性发作期组43例和慢性持续期组37例。另选取同期在本院体检显示健康者78例作为对照组。采用实时荧光定量(qRT-PCR)法检测所有入组者血清LncRNA PVT1表达水平,常规检测入组者气道炎症、气道重塑和肺功能指标水平,采用Pearson法进行相关性分析。结果急性发作期组患者哮喘控制测试(ACT)评分明显低于慢性持续期组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。血清lncRNA PVT1、气道炎症指标白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)、转化生长因子-β(TGF-β)、免疫球蛋白E(IgE)、外周血嗜酸性粒细胞计数(EOS)及气道重塑指标支气管厚度(T/D)、管壁面积占支气道总横截面积百分比(WA%)由高至低依次为急性发作期组、慢性持续期组、对照组;肺功能指标第一秒用力呼气量(FEV1)、一秒率预计值(FEV1%)、最高呼吸气流(PEF)水平由高至低依次为对照组、慢性持续期组、急性发作期组,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。急性发作期组和慢性持续期组患者的血清lncRNA PVT1水平均与IL-6、TGF-β、T/D、WA%水平呈正相关(P<0.05),与FEV1、FEV1%水平呈负相关(P<0.05)。结论支气管哮喘患者血清lncRNA PVT1表达水平显著升高,与气道炎症、气道重塑和肺功能指标变化有关,可作为生物标志物用于临床支气管哮喘患者病情评估和治疗方案确定。

lncRNA PVT1对急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA PVT1基因(lncRNA PVT1)对人急性髓系白血病(AML)HL-60细胞增殖、凋亡的影响。方法 选取106例AML患者为试验组,同期健康体检志愿者100例为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测外周血lncRNA PVT1表达。以干扰lncRNA PVT1的质粒转染HL-60细胞株(si-lncRNA PVT1组),同时将转染空载体的HL-60细胞设为对照组(si-Control组),另设正常组。RT-qPCR技术检测细胞中lncRNA PVT1的表达;CCK-8检测细胞的增殖率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化;Western blot和RT-qPCR技术检测细胞中细胞周期相关蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase 3)表达。结果 试验组患者lncRNA PVT1表达水平高于对照组(P<0.05)。干扰lncRNA表达后HL-60细胞中,si-lncRNA PVT1组lncRNA PVT1水平显著低于si-Control组(P<0.05)。si-lncRNA PVT1组细胞增殖率显著低于si-Control组(P<0.05)。敲低lncRNA PVT1后细胞被显著阻滞于G1期,且明显诱导细胞的凋亡(P<0.05)。si-lncRNA PVT1组与si-Control组比较,Cyclin D1、Bcl-2表达降低,P21、Bax、Caspase 3表达升高(P<0.05)。结论 敲低lncRNA PVT1可抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,提示lncRNA PVT1可能作为AML防治的一个分子靶点。

清胰汤通过lncRNA-PVT1竞争性结合miR-146a靶向TRAF6参与重症胰腺炎发生发展的机制研究

目的探讨清胰汤通过lncRNA-PVT1竞争性结合miR-146a靶向肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)参与重症胰腺炎发生发展的机制。方法购置SD大鼠50只,随机取10只设为空白对照组;剩余40只大鼠经肠壁穿刺逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠注射制备重症胰腺炎动物模型,建模成功后随机取10只为模型对照组;剩余30只大鼠利用慢病毒转染干扰lncRNA-PVT1序列(LV-shPVT1)及空载(LV-control),分为清胰汤组、清胰汤+空载组和清胰汤+PVT1沉默组,每日用药1次,比较各组HE染色、炎症因子及TRAF6及细胞凋亡相关基因表达。结果HE染色结果表明,清胰汤组病理学改善显著,胰腺组织内炎症细胞浸润减轻明显;清胰汤+空载组和模型组可见微血栓形成,且随着时间延长加重,炎症细胞浸润明显,伴有上皮细胞浸润。清胰汤组TNF-α、IL-1β、TRAF6表达水平均低于清胰汤+空载组和清胰汤+PVT1沉默组(均P<0.05);清胰汤组miR-146a表达水平高于清胰汤+空载组和清胰汤+PVT1沉默组(P<0.05);清胰汤组细胞凋亡相关基因β-actin、ki-67、Bax、caspase、Caspase-9表达水平低于清胰汤+空载组和清胰汤+PVT1沉默组(均P<0.05)。结论在重症胰腺炎中,清胰汤能通显著下调lncRNA-PVT1表达,促进miR-146a表达,抑制TRAF6的表达,作用于炎症信号通路,降低炎症因子水平,抑制细胞凋亡,抑制重症胰腺炎的病理进展。

LncRNA PVT1靶向miR-130a-3p对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探究LncRNA PVT1靶向miR-130a-3p对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法本研究首先探究PVT1在肺炎链球菌坏死性肺炎肺组织和正常肺组织中的表达情况;然后构建PVT1敲减载体,转染肺泡上皮细胞A549,采用比色MTT测定法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡,ELISA检测细胞因子IL-6和TGF-β的表达,qRT-PCR检测肺组织中PVT1的表达,以及A549细胞中PVT1和miR-130a-3p的表达,使用双荧光素酶实验和qRT-PCR试验测定PVT1和miR-130a-3p的靶向调控关系。结果与正常肺组织相比,肺炎链球菌坏死性肺炎肺组织中PVT1表达上调(P<0.05);肺炎链球菌感染可增加肺泡上皮细胞PVT1的表达(P<0.05),敲减PVT1后,可增加肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞A549的增殖(P<0.05),减少A549的凋亡和炎性因子IL-6和TGF-β的表达(P<0.05)。进一步双荧光素酶实验证实PVT1可靶向负调控miR-130a-3p表达(P<0.05)。Anti-miR-130a-3p共转染A549细胞后,与SP+si-PVT1+anti-miR-con组相比,SP+si-PVT1+anti-miR-130a-3p组miR-130a-3p的表达明显降低(P<0.05),细胞增殖明显降低(P<0.05),凋亡增加(P<0.05),炎症因子TGF-β和IL-6表达明显升高(P<0.05)。结论LncRNA PVT1可靶向负调控miR-130a-3p,并减轻肺炎链球菌感染的肺泡上皮的损伤。

N6-甲基腺苷诱导LncRNA PVT1靶向作用MYC对氯胺酮治疗的乳腺癌细胞干性的影响

目的探讨氯胺酮通过调节LncRNA PVT1/MYC轴对乳腺癌(breast cancer,BC)细胞干性维持的影响。方法采用不同浓度的氯胺酮(0、5、10或20μg/ml)处理BC细胞系MCF-7,或以20μg/ml氯胺酮处理MCF-7细胞不同时间(0、24、48或72 h)。此外,干预MCF-7细胞中的METTL3、PVT1和MYC的表达并且将MCF-7细胞分组。采用球体形成实验检测细胞球体形成的数量。Western blot检测各组细胞干细胞特性相关分子(OCT4和SOX2)的表达水平。采用qRT-PCR法检测PVT1/MYC在各组细胞中的表达水平。MeR-IP分析用于检测PVT1的m6A甲基化水平。结果氯胺酮以剂量和时间依赖性方式显著减少BC细胞球体形成数目,抑制OCT4和SOX2的蛋白表达水平(均P<0.05)。氯胺酮通过调节METTL3介导PVT1的m6A水平,与氯胺酮+pcDNA3.1组相比(207±11),氯胺酮+PVT1组(311±15)细胞的球体形成数目明显增加(t=12.06,P<0.001),OCT4和SOX2蛋白表达水平升高(t=9.68,P<0.001;t=11.50,P<0.001)。MYC是PVT1的下游调节基因,与氯胺酮+PVT1+si-NC组相比,氯胺酮+PVT1+si-MYC组细胞的球体形成数目明显减少(t=0.54,P=0.005),OCT4和SOX2蛋白表达水平降低(t=5.98,P=0.004;t=7.33,P=0.002)。结论氯胺酮通过抑制PVT1的m6A水平介导PVT1及其下游基因MYC的表达,进而抑制BC细胞干细胞样特征。

lncRNA PVT1靶向miR-146a对胃癌MKN-45细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨lncRNA RNA PVT1对胃癌MKN-45细胞增殖和侵袭的影响及可能机制。方法将PVT1抑制物转染胃癌MKN-45细胞,将细胞分为对照组(untreated组)、阴性对照组(si-NC组)及沉默PVT1组(si-PVT1组),实时定量PCR方法检测各组MKN-45细胞PVT1和miR-146a的表达,双荧光素酶报告基因实验分析PVT1和miR-146a的靶向关系,MTT法和Edu染色法检测各组MKN-45细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组MKN-45细胞的侵袭能力。结果转染PVT1抑制物能够使MKN-45细胞PVT1的表达下降,miR-146a的表达升高(P<0.05),双荧光素酶实验表明PVT1可以靶向调控miR-146a。MTT、EdU和Transwell实验结果显示,抑制PVT1表达后,MKN-45细胞的增殖和侵袭能力下降(P<0.05)。结论沉默lncRNA PVT1使胃癌细胞MKN-45的增殖和侵袭能力下降,其机制可能与负调控miR-146a表达有关。

长链非编码RNA PVT1诱导直肠癌细胞增殖、抑制凋亡并通过上调Atg5诱导其自噬

背景lncRNA PVT1基因作为lncRNAs的一种,已经被证实在多种肿瘤中发挥促癌作用,但对于该基因在直肠癌中的生物学行为报道较少,因此,本研究在结合国内外研究的基础上,探讨lncRNA PVT1在直肠癌中表达以及与预后的关系,以及对直肠癌自噬的调控机制和增殖凋亡的影响,为直肠癌的靶向治疗提供可靠的靶点.目的探究lncRNA PVT1在直肠癌组织中的表达及对直肠癌细胞自噬和增值侵袭的影响.方法通过TCGA数据库获得92例直肠癌,318例健康样本的lncRNA PVT1表达水平,并且通过定量实时PCR检测直肠癌细胞SW837,HR8348,SW1463和FHC中lncRNA PVT1表达水平.通过R语言包(survival,survminer)分析TCGA数据库分析lncRNA PVT1表达高低与直肠癌预后的关系.过表达SW837,HR8348中的lncRNA PVT1.利用transwell,CCK-8试剂盒、流式细胞实验分析其侵袭,增值能力及凋亡的改变.然后Western blot实验分析LC3-II/LC3-I的表达,免疫荧光实验分析LC3荧光斑点的改变,透射电镜分析形态学判断自噬小体的改变.之后共转染si-Atg5分析直肠癌细胞自噬水平的变化.结果LncRNA PVT1在直肠癌组织和细胞中表达都显著增加.并且lncRNA PVT1的表达直肠癌预后相关,过表达lncRNA PVT1后激活直肠癌自噬和诱导肿瘤细胞增殖,侵袭并且抑制其凋亡(P<0.05).结论LncRNA PVT1在直肠癌组织和细胞中均高表达,且与其预后显著相关,过表达lncRNA PVT1诱导直肠癌细胞增殖,侵袭并抑制其凋亡.LncRNA PVT1通过调控Atg5的表达参与直肠癌自噬水平的调控,其可能参与直肠癌的发生发展.

LncRNA-PVT1在巨噬细胞炎症反应中的表达及与炎症基因相关性研究

目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)PVT1在LPS诱导THP-1源巨噬细胞炎症反应中的表达及其与炎症基因表达相关性,推测lncRNA-PVT1在脓毒症急性肺损伤炎症反应中的可能作用。方法:通过LPS刺激THP-1源巨噬细胞产生炎症反应造模,利用RT-qPCR检测,比较不同刺激浓度(0、0.5、5.0μg/ml,8 h)下各组细胞中lncRNA-PVT1及TNF-α、IL-1βmRNA表达情况。结果:与对照组相比,IL-1β及TNF-αmRNA在LPS不同刺激浓度下,均表达上调,且具有统计学差异(均P<0.05)。随着刺激浓度增加,IL-1β及TNF-αmRNA表达量上升,呈浓度依赖,在LPS 5.0μg/ml作用8 h下,IL-1β及TNF-αmRNA表达量达峰值。与对照组相比,在5.0μg/ml LPS组中ln-cRNA-PVT1表达明显上调,具有统计学差异(P<0.0001)。相关性分析发现5μg/ml LPS刺激8 h后,THP-1源巨噬细胞中lncRNA-PVT1相对表达量分别与IL-1β及TNF-αmRNA相对表达水平呈正相关(分别为R^2<0.6134,P=0.0125;R^2<0.7825,P=0.0015)。结论:LncRNA-PVT1在LPS致THP-1源巨噬细胞炎症反应中高表达,且与TNF-α及IL-1βmRNA表达呈正相关,提示该lncRNA-PVT1在脓毒症急性肺损伤炎症反应中可能起重要作用。

lncRNA PVT1促进卵巢癌细胞自噬相关机制研究

目的探究长链非编码RNA PVT1对卵巢癌细胞自噬的影响及其调控机制。方法 Real-timePCR检测PVT1在卵巢癌组织样本中表达情况及PVT1在卵巢癌细胞株中的表达;免疫荧光实验和Western blot检测过表达PVT1对卵巢癌细胞自噬水平的影响;Western blot用于研究过表达PVT1对自噬相关蛋白ATG7表达的影响;利用共转染实验验证PVT1通过上调ATG7从而影响自噬水平。结果 Real-time PCR结果表明卵巢癌组织中PVT1的表达水平高于正常组织,各卵巢癌细胞系(ES2、OVCAR3、A2780)中PVT1表达高于正常卵巢细胞系(HOSEpiC)。Western blot和免疫荧光实验结果表明,与对照组相比,过表达PVT1能增加自噬标志蛋白LC3II/LC3I比例,能够显著促进卵巢癌细胞的自噬并通过上调ATG7的表达促进细胞自噬的发生。结论 lncRNA PVT1能够上调ATG7表达,促进卵巢癌细胞自噬的发生,有望成为卵巢癌新的治疗靶点。