lncRNA SNHG3对Hedgehog信号通路和结直肠癌细胞增殖的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因3(SNHG3)表达水平在结直肠癌(CRC)中的临床意义及其可能的作用机制。方法选择2017年2月至2019年10月在空军军医大学第一附属医院接受手术并经病理确诊为CRC的61例患者,采集其手术切除标本的CRC组织及癌旁组织。采用定量RT-PCR(qRT-PCR)法检测并比较CRC组织和癌旁组织中lncRNA SNHG3的表达水平,根据CRC组织中lncRNA SNHG3表达水平的中位数将患者分为高表达组和低表达组,分析lncRNA SNHG3表达水平与CRC患者的临床病理特征及胶质瘤相关癌基因1(Gli1)mRNA表达水平的相关性。培养人CRC细胞系LoVo、SW480和正常人结肠组织细胞系CCD-18Co,采用qRT-PCR法检测并比较各种细胞中lncRNA SNHG3的表达水平。利用shRNA转染敲低CRC细胞中SNHG3的表达,检测CRC细胞增殖情况和Hedgehog信号通路相关基因及E2F1表达情况的变化。结果CRC组织和CRC细胞中的lncRNA SNHG3表达水平分别较癌旁组织和正常结肠组织细胞显著升高(P均<0.01)。CRC组织中的lncRNA SNHG3表达水平与CRC患者的TNM分期、淋巴结转移及远处转移相关。CRC组织中lncRNA SNHG3低表达组的总生存率较高表达组高。CRC组织中Gli1 mRNA的表达水平较癌旁组织显著升高(P<0.01),Pearson相关性分析显示CRC组织中Gli1 mRNA与lncRNA SNHG3表达水平呈正相关(r=0.5742,P<0.01)。敲低CRC细胞中lncRNA SNHG3的表达水平可显著抑制CRC细胞的增殖能力,并可导致Hedgehog信号通路相关基因Smo、Gli1和Ptch1及转录因子E2F1的mRNA表达水平显著降低。结论lncRNA SNHG3可作为CRC的生物标志物和独立预后预测指标,其可能通过与E2F1及Hedgehog信号通路相互作用促进CRC的进展。

LncRNA SNHG3/miR-423-5p对IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞损伤的影响

该文旨在探讨lncRNA SNHG3/miR-423-5p轴对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的骨关节炎软骨细胞损伤的影响。IL-1β诱导软骨细胞建立细胞损伤模型,将si-NC、si-SNHG3、miR-NC、miR-423-5p mimics分别转染至软骨细胞后加入10μg/L IL-1β处理24 h,将si-SNHG3和anti-miR-NC、si-SNHG3和anti-miR-423-5p分别共转染至软骨细胞后加入10μg/L IL-1β处理24 h;MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡情况;ELISA法检测IL-6、IL-8、IL-10的水平;双荧光素酶报告实验检测SNHG3与miR-423-5p的靶向关系;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。IL-1β诱导的软骨细胞中SNHG3的表达量升高(P<0.05),miR-423-5p的表达量降低(P<0.05);转染si-SNHG3或转染miR-423-5p mimics后细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平降低(P<0.05),IL-6、IL-8的水平降低(P<0.05),IL-10的水平和Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05);SNHG3可靶向结合miR-423-5p;转染anti-miR-423-5p可以逆转由si-SNHG3引起的细胞生长加快、炎症因子水平降低、IL-10浓度降低和Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05)。沉默SNHG3可通过负向调控miR-423-5p表达而促进细胞增殖以及抑制细胞凋亡、炎症反应从而减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤。

lncRNA SNHG3靶向调控miR-340对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

目的探究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因3(lncRNA SNHG3)对卵巢癌细胞恶性生物学行为的调控机制。方法体外培养人卵巢癌细胞株(SKOV3、A2780、SW626和OVCAR3)和正常卵巢上皮细胞(HOSEpiC),将对数生长期的OVCAR3细胞分为对照组、si-NC组、SNHG3沉默组、miR-NC组、miR-340-5p过表达组、SNHG3沉默+anti-miR-NC组、SNHG3沉默+anti-miR-340-5p组。RT-qPCR检测细胞中lncRNA SNHG3、miR-340-5p表达;双荧光素酶实验验证SNHG3和miR-340-5p的调控作用;CCK-8法、划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞增殖、迁移、侵袭能力;Western blot检测各组细胞中上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)相关蛋白[E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(VIM)]表达。裸鼠成瘤实验检测沉默SNHG3的OVCAR3细胞体内生长情况;免疫组织化学法和RT-qPCR检测移植瘤组织中E-cadherin、VIM和lncRNA SNHG3、miR-340-5p表达。结果与HOSEpiC细胞相比,卵巢癌细胞系中lncRNA SNHG3表达增加,miR-340-5p表达降低(P<0.05)。双荧光素酶实验结果证实,miR-340-5p是SNHG3的靶基因。敲低SNHG3或过表达miR-340-5p可降低OVCAR3细胞的增殖活性和迁移、侵袭能力以及N-cadherin、VIM水平,升高E-cadherin水平(P<0.05);下调miR-340-5p可激活EMT,减弱SNHG3沉默对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。体内实验结果显示,敲低SNHG3可抑制裸鼠移植瘤生长,并升高肿瘤组织中E-cadherin、miR-340-5p表达,降低VIM表达(P<0.05)。结论敲低SNHG3可能通过上调miR-340-5p,抑制EMT,进而抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭。

LncRNA-SNHG3通过Hedgehog通路对乳腺癌细胞增殖的作用

目的探究LncRNA-SNHG3(SNHG3)对乳腺癌细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法慢病毒包装SNHG3干扰质粒和过表达质粒,慢病毒液感染乳腺癌细胞,获得干扰SNHG3(sh-SNHG3)和过表达SNHG3(oe-SNHG3)的稳转细胞系,RT-qPCR检测SNHG3 mRNA表达;CCK-8检测细胞活力;克隆形成实验检测细胞增殖;Western blot法检测Gli1蛋白表达。结果与sh-NC组比较,sh-SNHG3组细胞中SNHG3 mRNA的表达明显降低(P<0.05),12、24、48和72h细胞活力、克隆形成数和Gli1蛋白表达明显降低(P<0.05);与oe-NC组比较,oe-SNHG3组细胞中SNHG3 mRNA的表达明显升高(P<0.05),12、24、48和72h细胞活力、克隆形成数和Gli1蛋白表达明显升高(P<0.05)。与oe-SNHG3组比较,oe-SNHG3+cyclopamine组细胞中SNHG3 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),12、24、48和72h细胞活力、克隆形成数和Gli1蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论SNHG3通过激活Hedgehog通路促进乳腺癌细胞增殖。

SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化的机制研究

目的探究SNHG3调控miR-186-5p/E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的机制。方法在HepG2细胞中转染siRNA干扰片段敲除SNHG3、转染pcDNA3.1(+)/SNHG3使SNHG3过表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)检测是否转染成功。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖,细胞划痕实验检测HepG2细胞迁移率,Transwell小室实验检测HepG2细胞侵袭数量,双荧光素酶活性检测验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p与ZEB1的靶向关系,FQ-PCR和Western blot法检测SNHG3、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9、Snail的表达水平。结果肝癌组织中SNHG3表达量高于正常组织,SNHG3表达量低/中的肝癌患者的生存预后优于SNHG3表达量高的肝癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。克隆形成实验结果显示,与pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞增殖数量显著增加(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞迁移率显著高于pcDNA3.1(+)组(P<0.05)。Transwell小室实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞侵袭数量显著高于pcDNA3.1(+)组(P<0.05)。双荧光素酶活性检测结果显示,miR-186-5p mimic和pGL6-SNHG3-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,miR-186-5p mimic和pGL6-ZEB1-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR和Western blot检测结果显示,当SNHG3过表达时,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著下调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著上调;当SNHG3敲除后,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著上调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,表明SNHG3是肝癌潜在的治疗靶点。

lncRNA SNHG3在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类转录本长度>200 nt的不编码蛋白质的RNA分子。近年来研究发现长链非编码RNA在诸多肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。lncRNA SNHG3是一种近年被广泛探究的典型lncRNA。研究不断深入,lncRNASNHG3被发现可能与人体各系统中肿瘤的发生发展有关,如消化系统、呼吸系统、神经系统、生殖系统、泌尿系统等,且机制各异,可能为多种肿瘤的治疗提供新的潜在治疗靶点,有着广泛的研究前景。本文结合国内外最新报道,就lncRNA SNHG3影响多种肿瘤发生发展的最新研究进展进行简要综述。

长链非编码RNA SNHG3在食管鳞状细胞癌中的表达及其对ECA-109细胞迁移和侵袭的影响

目的:探究长链非编码RNA SNHG3在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及其对ECA-109细胞迁移和侵袭的影响。方法:收集安阳市肿瘤医院2011年6月到2014年6月收治的60例ESCC患者癌及对应癌旁组织样本,采用qRT-PCR检测ESCC癌与癌旁组织、ESCC细胞ECA-109和人正常食管上皮细胞HEEC中lncRNA SNHG3的表达水平,分析ESCC患者组织中lncRNA SNHG3的表达与ESCC患者临床特征的关系。采用siRNA-SNHG3质粒转染ECA-109细胞,以敲降lncRNA SNHG3的表达水平。采用Kaplan-Meier法分析lncRNA SNHG3表达与患者预后的关系。采用Transwell实验检测ECA-109细胞的迁移和侵袭能力。采用qRT-PCR和Western blot实验检测ECA-109细胞中SNAIL和TWIST的mRNA及蛋白的表达水平。结果:ESCC肿瘤组织中lncRNA SNHG3的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),ECA-109细胞中lncRNA SNHG3的表达水平显著高于人正常食管上皮细胞HEEC(P<0.05)。ESCC患者组织中lncRNA SNHG3的表达水平与肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况显著相关(P<0.05)。siRNA-SNHG3质粒转染ECA-109细胞后,lncRNA SNHG3的表达水平显著降低(P<0.05)。lncRNA SNHG3的高表达与ESCC患者预后不良显著相关。敲降lncRNA SNHG3后,ECA-109细胞的迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),SNAIL和TWIST的mRNA及蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论:lncRNA SNHG3在ESCC肿瘤组织和细胞中高表达,通过调控SNAIL和TWIST蛋白的表达,促进ECA-109细胞的迁移和侵袭。

长链非编码RNA SNHG3 调节微小RNA-340-5p/Skp2 轴对胃癌细胞恶性生物学行为的影响研究

目的探讨长链非编码(long non-coding,Lnc)RNA SNHG3对胃癌细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法实时定量聚合酶链式反应法检测人正常胃黏膜上皮细胞及胃癌细胞中LncRNA SNHG3表达水平。分别构建SNHG3敲低表达组和阴性对照组,并设置空白对照组。采用细胞计数-8法,Transwell实验及流式细胞技术检测敲低LncRNA SNHG3表达对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。通过生物学信息网站预测LncRNA SNHG3下游靶基因,利用双荧光素酶报告实验验证其结合关系。蛋白质印迹法检测LncRNA SNHG3对下游靶蛋白表达的影响。结果胃癌细胞HGC-27、MGC-803、MKN-45及BGC-823中LncRNA SNHG3表达水平明显高于正常胃黏膜上皮细胞CES-1,差异有统计学意义(F=16.128,P<0.05)。敲低SNHG3表达后胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力明显降低,细胞凋亡比例明显升高。LncRNA SNHG3、Skp2均与微小RNA(micro RNA,miR)-340-5p之间存在结合位点,且miR-340-5p可降低WT-SNHG3与WT-Skp2的荧光素酶活性。LncRNA SNHG3负向调控miR-340-5p,并进一步作用于Skp2蛋白。结论胃癌细胞系中LncRNA SNHG3呈高表达,下调其表达可抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭,诱导细胞凋亡,其可能通过内源性竞争miR-340-5p,调控Skp2表达发挥作用。

长链非编码RNA SNHG3对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移与侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA SNHG3对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移与侵袭的影响。方法:构建SNHG3过表达质粒,实验分别设置阴性对照组(pcDNA-3. 1+)与SNHG3基因过表达组(pcDNA-3. 1+/SNHG3)。将MCF-7细胞转染对照组质粒和SNHG3过表达质粒,采用实时定量PCR方法检测SNHG3 mRNA转录水平,Western blot检测MMP9及EMT相关蛋白质水平;集落形成实验检测MCF-7细胞增殖能力;划痕愈合实验检测MCF-7细胞横向迁移能力; Transwell小室实验检测MCF-7细胞纵向迁移能力及侵袭能力。结果:过表达SNHG3后,MCF-7细胞中SNHG3的mRNA水平显著增高(P <0. 001); MCF-7细胞的体外增殖能力明显增加(P <0. 01),迁移(P <0. 01)与侵袭能力(P <0. 001)也显著增强,实时定量PCR,Western blot结果显示SNHG3可激活EMT相关通路。结论:过表达SNHG3可能通过激活EMT通路促进乳腺癌MCF-7细胞的增殖,迁移与侵袭。