lncRNA SNHG16通过miR-182-5p/PPARG轴调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和侵袭

目的:确定小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)在类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及其在RA发展中的作用。方法:RT-qPCR用于测量SNHG16、miR-182-5p和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARG) mRNA表达;双荧光素酶实验用于检测SNHG16、miR-182-5p和PPARG mRNA的相互作用关系;EdU和Transwell用于检测细胞增殖、侵袭;Western blot用于检测PPARG蛋白水平。结果:RA滑膜组织和人RA-FLS系(HFLS-RA)中SNHG16和PPARG mRNA表达上调,miR-182-5p表达下调。SNHG16负靶向调节miR-182-5p表达,正调节PPARG(miR-182-5p靶标)表达。沉默SNHG16抑制HFLS-RA增殖、侵袭;下调miR-182-5p部分逆转SNHG16沉默对细胞增殖、侵袭的抑制作用;过表达PPARG部分逆转miR-182-5p上调对HFLS-RA增殖、侵袭的抑制作用。结论:沉默SNHG16靶向miR-182-5p/PPARG轴抑制HFLS-RA的增殖、侵袭。

LncRNA SNHG16通过调控miR-195-5p/MYB促进胃癌细胞增殖及迁移

目的探讨lncRNA SNHG16(SNHG16)对胃癌细胞增殖、迁移的影响及其分子调控机制。方法基于在线数据库检索SNHG16在胃癌组织中的表达情况并筛选SNHG16的下游靶基因。通过生物信息学方法分析、双荧光素酶报告基因实验验证SNHG16与miR-195-5p间相互作用关系。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SNHG16、miR-195-5p和MYB在胃癌细胞(HGC-27、MKN-28)中的表达情况;敲低SNHG16检测miR-195-5p或MYB表达;过表达miR-195-5p检测MYB表达;蛋白质印迹分析(Western blot)检测各组中MYB的蛋白表达水平。敲低SNHG16或过表达miR-195-5p,通过细胞增殖及划痕实验分别检测胃癌细胞(HGC-27、MKN-28)增殖及迁移能力。结果LncRNA SNHG16在胃癌组织及胃癌细胞(HGC-27、MKN-28、MKN-45、NCI-N87)中表达升高。双荧光素酶报告基因实验结果显示,将psiCHECK2-SNHG16-WT和miR-195-5p mimic同时转染进HGC-27中,显著抑制了HGC-27细胞的荧光素酶活性。qRT-PCR及WB实验结果显示:敲低HGC-27、MKN-28细胞中SNHG16可上调miR-195-5p并抑制MYB在转录及翻译水平的表达;过表达HGC-27、MKN-28细胞中miR-195-5p可抑制MYB表达。CCK8增殖实验及细胞划痕实验结果表明:敲低SNHG16或过表达miR-195-5p均可抑制HGC-27、MKN-28细胞的增殖和迁移。结论LncRNA SNHG16可通过miR-195-5p调节MYB在胃癌细胞中的表达,SNHG16高表达可促进胃癌细胞增殖和迁移。

LncRNA SNHG16靶向调控miR-516a-5p对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的分析LncRNA SNHG16靶向调控miR-516a-5p对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法采用实时荧光RT-PCR检测lncRNA SNHG16、miR-516a-5p表达,构建抑制lncRNA SNHG16表达的SW480细胞,并对SW480细胞转染,分为NC组、si-NC组、si-SNHG16组、miR-NC组、miR-516a-5p组、si-SNHG16+anti-miR-NC组、si-SNHG16+anti-miR-516a-5p组,检测各组细胞增殖、凋亡侵袭、迁移情况。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织中lncRNA SNHG16表达水平升高,miR-516a-5p表达水平降低(P<0.05)。与FHC组相比,HCT116组、SW620组、SW480组细胞中lncRNA SNHG16表达水平升高,miR-516a-5p表达水平较低,且SW480组lncRNA SNHG16水平最高、miR-516a-5p水平最低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-SNHG16组lncRNA SNHG16表达水平降低(P<0.05),表明干扰lncRNA SNHG16表达的SW480细胞株构建成功,与si-NC组相比,si-SNHG16组CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低,凋亡细胞升高(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-516a-5p组miR-516a-5p表达水平升高(P<0.05),表明高表达miR-516a-5p的SW480细胞株构建成功,与miR-NC组相比,miR-516a-5p组CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低,凋亡细胞升高(P<0.05)。双荧光素酶报告试验显示,与miR-NC组相比,miR-516a-5p可使SNHG16荧光素酶活性降低(P<0.05),对MUT-SNHG16荧光素酶活性影响较小(P>0.05)。与si-NC组相比,抑制lncRNA SNHG16表达可使SW480细胞中miR-516a-5p表达、凋亡细胞升高,CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低(P<0.05),与si-SNHG16+antimiR-NC组相比,si-SNHG16+anti-miR-516a-5p组miR-516a-5p表达、凋亡细胞降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9、OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数升高(P<0.05)。结论干扰lncRNA SNHG16表达,可对miR-516a-5p表达进行调控,抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移,并促进其凋亡。

lncRNA SNHG16通过调控miR-570对肝癌细胞索拉非尼耐药的机制研究

目的分析长链非编码RNA SNHG16(long non-coding RNA SNHG16,lncRNA SNHG16)通过调控微小RNA-570(miR-570)对肝癌细胞索拉非尼耐药的机制研究。方法采用实时荧光RT-PCR检测人体正常肝组织、肝癌细胞组织中HepG2、HepG2-R细胞的lncRNA SNHG16、miR-570表达,并对HepG2-R细胞做转染,后分别记为HepG2-R+pcDNA组、HepG2-R+pcDNA SNHG16组、HepG2-R+anti-miR-NC组、HepG2-R+anti-miR-570组、HepG2-R+pcDNA SNHG16+miR-NC组、HepG2-R+pcDNA SNHG16+miR-570组,用于后续试验,且将miR-NC、miR-570、si-NC、si-SNHG16用相同方式转染至HepG2细胞,分别记为miRNC组、miR-570组、si-NC组、si-SNHG16组。用MTT法、流式细胞仪、Transwell试验检测细胞增殖、凋亡及侵袭,Western blot法测定细胞CyclinD1、P21、MMP-9、MMP-2表达变化。结果与人体正常肝组织组相比,肝癌细胞组织组的lncRNA SNHG16表达升高,miR-570表达下降(P<0.05)。与正常细胞HepG2-P组相比,HepG2-R组的lncRNA SNHG16及IC50值提高,miR-570、HepG2-R细胞在索拉非尼浓度为1、2、4、8、16μmol/L中的抑制水平下降(P<0.05)。HepG2-R+pcDNA SNHG16作为过表达组,其lncRNA SNHG16表达显著升高(P<0.05),与HepG2-R+pcDNA组对比,HepG2-R+pcDNA SNHG16组的迁移的细胞个数及CyclinD1、P21、MMP-9、MMP-2的表达水平降低,抑制率、凋亡率及P21的表达水平上升(P<0.05)。与HepG2-R+anti-miR-NC组相比,HepG2-R+anti-miR-570组miR-570表达水平降低(P<0.05),与HepG2-R+anti-miR-NC组比较,HepG2-R+anti-miR-570组CyclinD1、MMP-9、MMP-2表达水平降低,抑制率、凋亡率及P21的表达水平升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示,与miR-NC组相比,miR-570使WT-SNHG16荧光素酶活性降低(P<0.05),而对MUT-SNHG16荧光素酶活性影响较小(P>0.05)。过表达lncRNA SNHG16可使HepG2-R细胞中miR-570表达下降(P<0.05),与HepG2-R+pcDNA SNHG16+miR-NC组相比,HepG2-R+pcDNA SNHG16+miR-570组迁移的细胞个数及CyclinD1、MMP-9、MMP-2的表达水平升高,抑制率、凋亡率及P21的表达水平降低(P<0.05)。结论lncRNA SNHG16可调控HepG2-R肝癌细胞的耐药性,其机制与lncRNA SNHG16靶向调控miR-570有关,为临床治疗肝癌细胞提供了新的靶点。

lncRNA SNHG16通过靶向miR-22-3p调控肾母细胞瘤WIT49细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制

目的探讨lncRNA SNHG16是否可通过靶向miR-22-3p调控肾母细胞瘤WIT49细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡。方法采用qRT-PCR法检测肾母细胞瘤组织、癌旁组织中SNHG16、miR-22-3p的表达水平;体外培养人肾母细胞瘤WIT49细胞,分别将si-NC、si-SNHG16、miR-NC、miR-22-3p mmics、si-SNHG16与anti-miR-NC、si-SNHG16与anti-miR-22-3p转染至WIT49细胞;采用qRT-PCR法检测细胞中SNHG16、miR-22-3p的表达水平;采用CCK-8法检测细胞增殖;采用Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测SNHG16、miR-22-3p的靶向关系;Western blot法检测CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2、p21、Bax蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,肾母细胞瘤组织中SNHG16的表达水平显著升高(P<0.05),miR-22-3p的表达水平显著降低(P<0.05);转染si-SNHG16或转染miR-22-3p mimics可明显降低吸光度值及CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05),提高凋亡率及p21、Bax蛋白水平(P<0.05);双荧光素酶实验证实SNHG16可靶向结合miR-22-3p;下调miR-22-3p表达可明显逆转抑制SNHG16表达对肾母细胞瘤WIT49细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的作用。结论抑制SNHG16表达可通过上调miR-22-3p的表达从而减弱肾母细胞瘤WIT49细胞增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡。

lncRNA SNHG16靶向PAR1调控肺癌发生、发展的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNHG16调控PAR1对肺癌增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法收集2020年3月至2021年8月于该院手术切除的35例肺癌患者的肺癌组织及癌旁组织标本,同时培养肺癌细胞系(HCC827、A549、SK-LU-1、A427)和正常肺细胞系(MRC5)。利用表达载体pcDNA3.1构建生成PAR1过表达模型(pcDNA-PAR1),A549细胞转染后分为转染si-SNHG16、转染si-PAR1、转染si-SNHG16+pcDNA-PAR1及对照(转染si-NC)。采用实时荧光定量逆转录-PCR(qRT-PCR)检测肺癌细胞系(HCC827、A549、SK-LU-1、A427)、肺癌组织及癌旁组织标本中lncRNA SNHG16及PAR1表达水平,并验证各组细胞转染效率。MTT法和克隆形成测定各组细胞的增殖,流式细胞仪检测各组细胞凋亡,细胞划痕和Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测PAR1的蛋白表达变化。结果肺癌组织lncRNA SNHG16表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。肺癌细胞系(HCC827、A549、SK-LU-1、A427)lncRNA SNHG16表达水平高于正常肺细胞系(MRC5),差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,转染si-SNHG16后lncRNA SNHG16基因表达水平为对照的(21.02±0.04)%,转染si-PAR1后PAR1基因表达水平为对照的(19.06±0.02)%,pcDNA-PAR1的PAR1基因表达水平为对照的(2.70±0.00)倍,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,各转染的PAR1蛋白表达水平与对照比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照比较,转染si-SNHG16的细胞活性更低,克隆形成、细胞迁移、侵袭能力明显受到抑制,细胞凋亡率更高(P<0.05),而pcDNA-PAR1可减弱转染si-SNHG16对细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响(P<0.05)。lncRNA SNHG16与PAR1表达水平呈正相关(r=0.61)。结论lncRNA SNHG16可通过靶向PAR1调控肺癌的发生、发展。

lncRNA SNHG16促进宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭并抑制凋亡及机制初探

目的本研究通过体外及体内实验揭示lnc RNA SNHG16在宫颈癌发展中的作用及其分子机制,以确证lncRNA SNHG16为介导宫颈癌恶性发展关键的致病分子。方法采用CCK8法和克隆形成实验检测lnc RNASNHG16对宫颈癌细胞增殖的影响;划痕法和Transwell法检测lnc RNASNHG16对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响;AnnexinV/7-AAD法检测沉默lnc RNA SNHG16对宫颈癌细胞凋亡的影响;裸鼠成瘤实验检测lnc RNA SNHG16对体内宫颈癌肿瘤生长的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测宫颈癌组织、正常宫颈组织以及宫颈癌细胞中PARP9m RNA的表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测SNHG16与PARP9基因启动子活性的关系;RIP法检测SNHG16与SPI1蛋白的结合;ChIP法检测SPI1与PARP9基因启动子的结合;CCK8法检测PARP9在宫颈癌细胞增殖中的作用;Transwell法检测PARP9在宫颈癌细胞侵袭中的作用。Westernblotting检测PARP9、Ki67、PCNA、E-cadherin、Vimentin、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白的表达。结果与正常宫颈上皮细胞HcerEpic相比,宫颈癌细胞Ca Ski、C33a、ME180、HeLa中lnc RNA SNHG16表达明显上调(P<0.05);沉默lnc RNA SNHG16后,C33a和HeLa细胞的增殖能力明显减弱(P<0.05);沉默lnc RNA SNHG16后,C33a细胞的迁移能力明显减弱(P<0.05),而He La细胞的迁移能力不受影响;沉默lnc RNASNHG16后,C33a和He La细胞的侵袭能力明显减弱;沉默lnc RNA SNHG16后,C33a和HeLa细胞的凋亡水平明显增加;在体内实验中,沉默lnc RNA SNHG16能明显抑制肿瘤生长(P<0.05);与HcerEpic细胞相比,He La细胞中PARP9表达明显增加(P<0.05);lnc RNASNHG16增强PARP9基因启动子活性(P<0.05);lnc RNASNHG16与SPI1蛋白结合;SPI1与PARP9基因启动子结合;lnc RNASNHG16沉默后,HeLa细胞中PARP9基因启动子的活性被明显抑制,且PARP9 mRNA和蛋白表达水平显著减少(P<0.05);lncRNA SNHG16沉默后,HeLa细胞的增殖和侵袭能力明显减弱,但同时过表达PARP9可恢复其增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论lnc RNA SNHG16在宫颈癌细胞中高表达;沉默lnc RNA SNHG16可明显抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而促进宫颈癌细胞凋亡,并抑制宫颈癌肿瘤的生长;lnc RNA SNHG16作为致病分子,通过激活SPI1调控的PARP9基因转录而介导宫颈癌细胞的恶性增殖和侵袭,最终促进宫颈癌的恶性发展。

长链非编码RNA SNHG16在胰腺癌中的表达及功能

目的探讨长链非编码RNA SNHG16(SNHG16)在胰腺癌中的表达及其功能。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测SNHG16在46例胰腺癌癌组织和癌旁组织中的表达。采用卡方检验分析其表达水平与临床病理参数的相关性。Kaplan-Meier生存分析比较SNHG16表达水平不同的患者生存率差异。qRT-PCR检测SNHG16在4种胰腺癌细胞系及正常胰腺导管上皮细胞系中的表达。在胰腺癌细胞系AsPC-1中敲低SNHG16表达,采用活细胞计数(CCK-8)和流式细胞术分别测定细胞增殖和凋亡水平,Transwell实验测定细胞侵袭能力,TOP/FOP闪光荧光素酶报告系统检测Wnt/β-Catenin信号激活状态,蛋白印迹法检测c-myc、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达。结果胰腺癌癌组织和细胞系中SNHG16表达显著上调(均P<0.01)。SNHG16高表达与患者肿瘤分化差、晚期TNM分期和淋巴结转移显著相关(均P<0.05)。SNHG16高表达组患者总生存率显著低于SNHG16低表达患者(P=0.003)。敲低SNHG16表达可显著抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭能力,并促进细胞凋亡。敲低SNHG16表达可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活和c-myc、β-catenin和cyclin D1的表达。结论胰腺癌组织中SNHG16的表达上调,其表达水平与胰腺癌预后相关,SNHG16可能通过Wnt/β-catenin通路而促进胰腺癌细胞增殖和侵袭,并抑制凋亡,是胰腺癌潜在分子标志物。

血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16和miR-147a在重症肺炎患者血清中的表达及临床意义

目的:探究重症肺炎患者血清中长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因16(lncRNA SNHG16)和微小RNA-147a(miR-147a)表达水平及临床意义。方法:选取收治的肺炎患者108例,分为重症肺炎组和普通肺炎组,另选同期同龄在汉中市人民医院接受治疗的健康人群为对照组,比较血清lncRNA SNHG16和miR-147a表达水平。根据随访结果将重症肺炎患者分为死亡组和存活组,Logistic回归分析预后危险因素,并利用ROC曲线分析诊断价值。结果:重症肺炎组lncRNA SNGH16平均表达水平显著高于普通肺炎组和对照组(均P<0.05)。重症肺炎组miR-147a平均表达水平显著低于普通肺炎组和对照组(均P<0.05)。Logistic回归分析表明,急性生理和慢性健康状况(APACHEⅡ)评分、临床肺部感染评分量表(CPIS)评分、血清lncRNA SNHG16和miR-147a表达水平是影响重症肺炎患者预后独立危险因素(均P<0.05)。ROC曲线表明,二者联合诊断AUC为0.846,灵敏度为86.53%,特异度为84.64%。结论:血清中lncRNA SNHG16和miR-147a在重症肺炎患者血清中表达异常,监测血清lncRNA SNHG16和miR-147a表达水平或可为重症肺炎患者早期诊断和预后评估提供参考。