蓬子菜总黄酮通过LncRNA TPTEP1/miR-770-5p对高糖诱导足细胞损伤的影响及其机制

目的探讨蓬子菜总黄酮(FGVL)对高糖诱导足细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法采用高糖诱导小鼠足细胞建立细胞损伤模型,不同浓度的FGVL处理足细胞,用脂质体转染法将pcDNA、pcDNA-TPTEP1转染至足细胞后用25 mmol/L葡萄糖处理24 h,用脂质体转染法将si-NC、si-TPTEP1转染至足细胞后用200μg/ml FGVL与25 mmol/L葡萄糖处理24 h;用试剂盒检测丙二醛(MDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TPTEP1、miR-770-5p的水平;双荧光素酶报告实验验证TPTEP1与miR-770-5p的靶向关系;Western印迹检测肾病蛋白(nephrin)、足突蛋白(podocin)、突触极蛋白(synaptopodin)、酶切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达量。结果FGVL可明显降低高糖诱导的足细胞中miR-770-5p表达量和MDA水平(P<0.05),并可明显降低细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平(P<0.05),而细胞存活率和SOD、CAT活性明显升高(P<0.05),TPTEP1表达量和nephrin、podocin、synaptopodin蛋白表达明显升高(P<0.05);TPTEP1可靶向调控miR-770-5p表达;转染pcDNA-TPTEP1后高糖诱导的足细胞中miR-770-5p表达量和MDA的水平明显降低,细胞凋亡率明显下降,Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白表达明显下降,细胞存活率和SOD、CAT活性明显升高,nephrin、podocin、synaptopodin蛋白表达明显升高(均P<0.05);转染si-TPTEP1可逆转FGVL对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡和氧化应激反应。结论FGVL能有效调控细胞增殖与各项氧化反应,其有效调控TPTEP1/miR-770-5p表达是其发挥调控作用的基础,因此有效改善因高糖引起的足细胞受损。

lncRNA TPTEP1通过抑制miR-129-5p影响膀胱癌T24细胞的增殖和侵袭

目的:分析长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)TPTEP1在膀胱癌组织和细胞的表达,观察其对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法:收集2017年8月至2019年10月在武汉市东西湖人民医院泌尿外科接受手术治疗的43例膀胱癌患者的癌与癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测膀胱癌组织、膀胱癌细胞系(T24、BIU-87、5637、J82、UM-UC-3)中lncRNA TPTEP1的表达;选择表达最低的膀胱癌细胞为实验对象,分别转染阴性对照质粒(对照组)和lncRNA TPTEP1过表达质粒(实验组),采用MTT法和Transwell实验检测上调lncRNA TPTEP1对细胞增殖和侵袭的影响。采用生物信息学技术预测lncRNA TPTEP1可能的靶分子,qPCR和WB检测lncRNA TPTEP1下游分子的表达水平。结果:与癌旁组织比较,膀胱癌组织中lncRNA TPTEP1的表达下调(P<0.01);与正常膀胱上皮细胞比较,各膀胱癌细胞系中lncRNA TPTEP1的表达均下调(均P<0.05),以T24细胞中的表达最低(P<0.01)。上调lncRNATPTEP1可抑制T24细胞的增殖(P<0.05)和侵袭(P<0.01)。生物信息学技术显示,lncRNA TPTEP1可互补结合miR-129-5p,miR-129-5p可互补结合EMP3。上调lncRNA TPTEP1可抑制T24细胞中miR-129-5p的表达(P<0.01),从而间接促进EMP3 mRNA和蛋白的表达(P<0.01),但p-MEK、p-ERK1/2、p-AKT、p-PI3K等MAPK/ERK信号通路相关蛋白表达均降低(均P<0.01)。结论:上调膀胱癌细胞系中低表达的lncRNA TPTEP1可抑制膀胱癌T24细胞系的增殖和侵袭,其作用机制与其通过下调miR-129-5p的表达间接促进EMP3基因表达有关。

长链非编码RNA TPTEP1在肺腺癌中的表达及作用研究

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)TPTEP1在肺腺癌中的表达及其作用。方法:收集86对肺腺癌患者的癌组织及癌旁组织样本、33例肺腺癌患者术前及术后的血浆样本,采用qRT-PCR检测TPTEP1在所收集组织、血浆样本及肺腺癌细胞株中的表达量。采用慢病毒过表达TPTEP1在肺腺癌细胞株A549中的表达后,利用CCK-8、Transwell实验评估肺腺癌细胞的增殖和侵袭迁移能力。结果:肺腺癌组织的TPTEP1表达量与对照组相比明显降低,并且其表达量与肺腺癌的肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移和TNM分期明显相关。肺腺癌患者术后血浆中的TPTEP1表达量较术前出现了明显上升。过表达TPTEP1明显抑制了肺腺癌细胞株的增殖、侵袭和迁移能力。结论:TPTEP1在肺腺癌患者癌组织及术前血浆中的表达量明显降低,并且可以抑制肺腺癌细胞的增殖和转移能力,可能成为肺腺癌诊断治疗可行的潜在靶标。