lncRNA LUCAT1调控AREG的表达促进宫腔粘连的发生

目的探讨lncRNA LUCAT1通过调控双调蛋白(amphiregulin,AREG)对宫腔粘连发生的作用,为宫腔粘连的防治提供新的分子靶点。方法在宫腔粘连组织和经过转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理的子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cell,ESC)中采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测lncRNA LUCAT1、AREG及纤维化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠalpha 1 chain protein,COL1A1)的mRNA表达水平,采用Western blot法检测AREG、α-SMA、COL1A1的蛋白表达水平。si-LUCAT1、pcDNA LUCAT1、si-AREG分别转染ESC,RT-qPCR方法进一步检测lncRNA LUCAT1和AREG的mRNA表达水平。然后,si-LUCAT1和pcDNA LUCAT1分别转染入ESC中并经过TGF-β1处理48h,采用Western blot法进一步检测AREG、α-SMA、COL1A1的蛋白表达水平,细胞增殖实验和细胞凋亡实验检测细胞增殖率和细胞凋亡率。结果宫腔粘连组织和经TGF-β1处理的ESC中lncRNA LUCAT1、AREG及纤维化标志物α-SMA、COL1A1的表达水平上调。AREG随lncRNA LUCAT1的变化而变化,而下调AREG后lncRNA LUCAT1的表达无明显变化,lncRNA LUCAT1正向调节AREG。在ESC向成纤维细胞转化过程中,si-LUCAT1显著抑制AREG、α-SMA、COL1A1的蛋白表达水平,抑制细胞增殖促进细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.01);pcDNA LUCAT1显著诱导AREG、α-SMA、COL1A1的蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论lncRNA LUCAT1通过上调AREG的表达促进宫腔粘连的发生。lncRNA LUCAT1/AREG轴可能为宫腔粘连的防治提供新的分子靶点。

lncRNA LUCAT1影响自噬促进肺腺癌PC-9/GR细胞对吉非替尼耐药的研究

目的:探索lncRNA LUCAT1对肺腺癌PC-9/GR细胞耐药性的影响,并研究其潜在的耐药机制。方法:CCK-8、克隆形成及Transwell迁移实验检测细胞的药物敏感性、增殖能力、克隆形成能力及迁移能力,qRT-PCR检测细胞中lncRNA LUCAT1的mRNA表达,Western Blot检测自噬关键蛋白p62、Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达,透射电子显微镜观察细胞中自噬小体数量变化。慢病毒转染构建敲低lncRNA LUCAT1和对照组细胞(PC-9/GR-shLUCAT1、PC-9/GR-NC),48 h后荧光显微镜观察慢病毒转染情况,进一步采用qRT-PCR检测敲低LUCAT1转染效果,检测调控LUCAT1前后各组细胞耐药性、克隆及迁移能力的改变,Western Blot实验检测各组细胞自噬关键蛋白表达情况。结果:PC-9/GR细胞较亲本细胞PC-9具有较强耐药性和增殖、迁移能力(P<0.05);PC-9/GR细胞中LUCAT1的mRNA相对表达量高于亲本细胞(P<0.05),并且自噬关键基因LC3-II/LC3-I的蛋白表达量较高,p62蛋白表达较其亲本细胞偏低(P<0.05),而Beclin1蛋白在PC-9/GR和PC-9细胞中表达无明显差异性(P>0.05);PC-9/GR细胞中自噬小体数量明显多于亲本细胞(P<0.05)。敲低LUCAT1后PC-9/GR细胞的耐药性、克隆形成能力及迁移能力均较对照组细胞明显减弱(P<0.05),同时自噬关键基因LC3-II/LC3-I下降、p62蛋白升高(P<0.05)。另外我们发现在PC-9/GR细胞中敲低LUCAT1不影响自噬关键基因Beclin1的蛋白表达(P>0.05),可能在继发性耐药细胞中LUCAT1不是通过影响Beclin1蛋白来调控自噬。结论:肺腺癌PC-9/GR细胞高表达lncRNA LUCAT1及具有高水平自噬,LUCAT1可能通过影响LC3B/p62介导的自噬通路激活自噬进而促进肺腺癌细胞对吉非替尼发生耐药。

甲状腺癌患者microrna-675、LncRNA LUCAT1、Actinin-4、IGF-1R的表达与临床特征及预后的相关性

目的探讨甲状腺癌患者microrna-675、LncRNA LUCAT1、Actinin-4、IGF-1R的表达与临床特征及预后的相关性。方法选取2014年1月至2019年3月确诊为甲状腺癌患者78例(甲状腺癌组)与甲状腺良性结节患者78例(良性组),检测2组血液中microrna-675、LncRNA LUCAT1、Actinin-4、IGF-1R表达水平,调查、随访患者的临床特征、预后并进行相关性与影响因素分析。结果甲状腺癌组的microrna-675、LncRNA LUCAT1相对表达水平和血清IGF-1R值低于良性组,血清Actinin-4值高于良性组,差异有统计学意义(P<0.05)。随访到2020年1月1日,良性组患者都存活;甲状腺癌组中存活67例,存活率85.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。在156例患者中,ROC曲线分析microrna-675、LncRNA LUCAT1、Actinin-4、IGF-1R鉴别诊断甲状腺癌的AUC值分别为0.843、0.807、0.811和0.837。在甲状腺癌患者中,Pearson分析显示microrna-675、LncRNA LUCAT1、Actinin-4、IGF-1R表达水平与临床分期、组织学分化、远端转移、预后都存在相关性(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示临床分期、组织学分化、远端转移、microrna-675、LncRNA LUCAT1、Actinin-4、IGF-1R表达水平都为影响患者预后的主要因素(P<0.05)。结论甲状腺癌患者伴随有microrna-675、LncRNA LUCAT1、Actinin-4、IGF-1R的影响表达,与患者的临床特征显著相关,可用于鉴别诊断甲状腺癌,且都是影响患者预后的重要因素。

LncRNA LUCAT1 Activation Mediated by theDown-regulation of DNMT1 Is Involved inCell Apoptosis Induced by PM2.5

Particulate matter （PM）, which is a great environmental concern, has been classified as a Group 1 human carcinogen by the International Agency for Research on Cancer （IARC）;.Epidemiological and experimental studies have indicated that chronic exposure to PM, especially PM;(particles with an aerodynamic diameter less than

lncRNA LUCAT1通过靶向调控miR-199a-5p/HIF-1α促进肾透明细胞癌786-O细胞的增殖和迁移

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺癌相关转录物1(lung cancer associated transcript 1,LUCAT1)对肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)786-O细胞的增殖和迁移能力的影响及其作用机制。方法:选取2013年6月至2017年6月宜昌市第一人民医院泌尿外科行手术切除的40例ccRCC患者癌组织及相应的癌旁组织样本,组织均经病理检查诊断明确。ccRCC细胞株786-O、ACHN、UM-RC-2及正常肾上皮细胞系KiMA培养完成后,用qPCR法检测cc RCC组织和细胞株中miR-199-a-5p、HIF-1α和LUCAT1T mRNA的表达,用CCK-8实验检测786-O细胞的增殖能力,Transwell法检测786-O细胞的迁移能力,双荧光素酶报告基因实验验证LUCAT1与miR-199a-5p的靶向作用关系,Western blotting实验检测LUCAT1、miR-199a-5p对HIF-1α蛋白表达的影响。结果:LUCAT1在ccRCC组织和细胞系786-O、ACHN和UM-RC-2中呈高表达(均P<0.01),敲低LUCAT1后可明显抑制786-O细胞的增殖和迁移(均P<0.01)。miR-199a-5p在ccRCC组织和细胞系中呈低表达(均P<0.01),StarBase数据库分析结果显示LUCAT1含有miR-199a-5p的保守目标位点,miR-199a-5p对LUCAT1-Wt的报告活性具有明显的抑制作用(P<0.01);敲低LUCAT1可明显降低miR-199a-5p的表达(P<0.01)。LUCAT1在转染miR-199a-5p模拟物的786-O细胞中呈低表达,但在LUCAT1+miR-199a-5p模拟物共转染的786-O细胞中出现逆转(P<0.05或P<0.01)。转染miR-199a-5p模拟物的786-O细胞中HIF-1αmRNA和蛋白表达水平升高,而LUCAT1过表达可逆转该效应(P<0.05或P<0.01)。转染miR-199a-5p模拟物抑制786-O细胞的增殖和迁移,而转染LUCAT1可部分消除转染miR-199a-5p模拟物对786-O细胞增殖和迁移的影响(P<0.05或P<0.01)。结论:lncRNA LUCAT1通过靶向调节miR-199a-5p/HIF-1α的表达从而在ccRCC中发挥促癌效应。

lncRNA LUCAT1对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的探讨lncRNA LUCAT1对膀胱癌细胞的增殖和凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法培养正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞J82、5637、BIU-87,将膀胱癌细胞5637随机分为control组、si-NC组,si-LUCAT1组、pcDNA-NC组、pcDNA-LUCAT1组、si-LUCAT1+anti-miR-NC组、si-LUCAT1+anti-miR-493-5p组。qRT-PCR法检测miR-493-5p和LUCAT1表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证LUCAT1和miR-493-5p的靶向关系。结果与膀胱上皮细胞SV-HUC-1相比,膀胱癌细胞J82、5637、BIU-87中LUCAT1的表达水平明显升高,miR-493-5p表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与si-NC组相比,si-LUCAT1组细胞活性降低,凋亡率升高,CyclinD1表达水平降低,Caspase-3表达水平升高,p-JAK2和p-STAT蛋白的表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-493-5p mimics与LUCAT1野生型报告质粒共转染的细胞荧光素酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05);而miR-493-5p mimics与LUCAT1突变型报告质粒共转染的细胞荧光素酶活性无显著变化,差异无统计学意义(P>0.05);与si-LUCAT1+anti-miR-NC组相比,si-LUCAT1+anti-miR-493-5p组细胞活性升高,细胞凋亡率降低,Cyclin D1表达水平升高,Caspase-3表达水平降低,p-JAK2和p-STAT蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNALUCAT1可抑制膀胱癌细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与miR-493-5p及JAK/STAT信号通路有关。

LncRNA LUCAT1介导的miR-199b-5p/MAPKAPK3轴在甲状腺乳头状癌发展中的调控作用及机制

目的探究lncRNA LUCAT1对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT的影响,并进一步探究miR-199b-5p/MAPKAPK3轴在其中发挥的作用。方法RT-qPCR检测甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中LUCAT1、miR-199b-5p和MAPKAPK3表达;生物信息学预测miR-199b-5p与LUCAT1或MAPKAPK3的潜在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-199b-5p与LUCAT1或MAPKAPK3结合。将TPC-1细胞分为sh-NC组、sh-LUCAT1组、sh-LUCAT1+inhibitor NC组、sh-LUCAT1+miR-199b-5p inhibitor组和sh-LUCAT1+miR-199b-5p inhibitor+sh-MAPKAPK3组;Western blot检测各组细胞MAPKAPK3蛋白表达水平;CCK-8实验检测各组细胞增殖活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;Western blot方法检测各组细胞EMT相关蛋白表达水平。结果甲状腺乳头状癌组织中LUCAT1和MAPKAPK3高表达,且miR-199b-5p低表达;miR-199b-5p与LUCAT1和MAPKAPK3结合;敲减LUCAT1降低TPC-1细胞MAPKAPK3表达,抑制TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并促进细胞凋亡;抑制miR-199b-5p逆转了敲减LUCAT1对TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用及细胞凋亡的促进作用;敲减MAPKAPK3逆转了抑制miR-199b-5p对敲减LUCAT1的TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的促进作用及细胞凋亡的抑制作用。结论lncRNALUCAT1可能通过竞争结合miR-199b-5p上调MAPKAPK3表达促进甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT并抑制细胞凋亡。

LncRNA LUCAT1激活自噬对肺腺癌A549干细胞影响的研究

目的探讨LncRNA LUCAT1在肺腺癌A549干细胞(A549/SC)中与细胞自噬调控的关系,及其对A549/SC增殖和迁移的影响。方法通过qRT-PCR检测A549/SC和肺腺癌A549亲本细胞(A549/MN)中LncRNA LUCAT1的表达情况。慢病毒转染构建稳定敲低LncRNA LUCAT1的A549/SC细胞株(sh-LUCAT1)及对照株(NC-sh LUCAT1);CCK8实验、克隆形成实验、Transwell迁移实验检测抑制LUCAT1表达后细胞增殖和迁移的变化。通过蛋白质印迹法检测各转染组细胞中干性和自噬相关蛋白的表达变化。2组样本比较采用独立样本t检验,采用单因素方差分析对组间差异比较结果进行检验。结果无血清悬浮培养法可富集得到A549/SC。与A549/MN相比,A549/SC中干性相关蛋白CD44、Nanog和Bmi-1表达水平均升高,均P<0.05。同时,A549/SC中自噬小体数量明显高于A549/MN(P<0.01),并且A549/SC中自噬相关蛋白Beclin 1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ较A549/MN表达增高,而p62蛋白表达较其亲本细胞偏低,均P<0.05。A549/SC中LUCAT1的mRNA相对表达量明显高于A549/MN(56.04±6.52 vs 1.04±0.38),t=14.600,P<0.001。抑制LUCAT1表达后,A549/SC的增殖、克隆形成及迁移能力均较对照组细胞明显减弱(P<0.01),同时干性相关蛋白CD44(t=3.006,P=0.040)、Nanog(t=6.666,P=0.003)、Bmi-1(t=7.294,P=0.002)和自噬相关蛋白Beclin 1(t=5.460,P=0.005)、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(t=4.748,P=0.009)表达下降,p62蛋白(t=2.929,P=0.043)表达升高,差异均有统计学意义。结论在A549/SC中存在高表达的LncRNA LUCAT1,LUCAT1可激活自噬从而促进A549/SC的增殖和迁移。

老年克罗恩病血清lncRNA MALAT1和LUCAT1表达情况及其与肠道菌群数量的相关性

目的探讨老年克罗恩病(CD)患者血清lncRNA MALAT1和LUCAT1表达及其与肠道菌群数量的相关性。方法选取2021年1月~2022年1月浙江省丽水市第二人民医院收治的老年CD患者120例为CD组,另外选择同期正常健康体检者80例为对照组。应用qRT-PCR法检测血清中lncRNA MALAT1、LUCAT1表达水平;通过革兰染色对菌群鉴定并计算肠道菌群数量;采用Pearson相关性分析血清lncRNA MALAT1、LUCAT1表达水平与肠道菌群数量的相关性。结果(1)CD组血清中lncRNA MALAT1的表达水平显著低于对照组(P<0.01),LUCAT1的表达水平显著高于对照组(P<0.01);lncRNA MALAT1和LUCAT1CD在CD组三个不同活动期中差异有统计学意义(P<0.01),其中,重度活动期血清lncRNA MALAT1的表达水平显著低于中度活动期和缓解期,中度活动期表达水平显著低于缓解期(P<0.01);重度活动期血清LUCAT1的表达水平显著高于中度活动期和缓解期,中度活动期表达水平显著高于缓解期(P<0.01)。(2)相关性分析显示,缓解期、中度活动期和重度活动期CD患者血清lncRNA MALAT1的表达水平与普氏菌、双歧杆菌的数量呈正相关,与肠球菌、大肠杆菌的数量呈负相关(P<0.01);LUCAT1表达水平与普氏菌、双歧杆菌的数量均呈负相关,与肠球菌、大肠杆菌的数量呈正相关(P<0.01)。结论CD患者血清lncRNA MALAT1表达水平显著降低,而LUCAT1表达水平显著增高,两者与肠道菌群数量有相关性。

JAG1联合lncRNA lucat1检测对结直肠癌患者疗效的判定及影响患者生存率的危险因素分析

目的:探讨JAG1蛋白联合长链非编码RNA(lncRNA)肺癌相关转录本1(lucat1)检测对结直肠癌患者疗效的判定及影响患者生存率的危险因素。方法:选取2013年3月—2016年10月确诊的120例结直肠癌患者作为研究对象(观察组),另选取同期健康体检人群120例(对照组),运用酶联免疫法和实时荧光定量PCR方法分别对2组的JAG1、lncRNA lucat1水平进行检测,比较不同治疗效果(客观有效组和客观无效组)以及预后(生存组和死亡组)患者的JAG1、lncRNA lucat1水平之间的差异,分析不良预后的危险因素。结果:观察组JAG1、lncRNA lucat1水平显著低于对照组(P<0.05);客观有效组JAG1、lncRNA lucat1水平显著低于客观无效组(P<0.05);生存组JAG1、lncRNA lucat1水平显著低于死亡组(P<0.05);患者的年龄、病程、侵袭深度、临床分型以及DUKE分期均为不良预后的独立危险因素。结论:JAG1联合lncRNA lucat1检测对于结直肠癌患者的疗效的判定以及生存情况具有显著的预测价值。

LncRNA lucat1在结直肠癌组织中的表达水平与意义

目的 探讨LncRNA lucat1在结直肠癌组织中的表达水平及其与肿瘤分化、TNM分期和淋巴结转移的关系。方法 选取2018年8月至2021年8月间上海市第六人民医院收治的120例结直肠癌患者作为研究对象进行前瞻性研究,分析癌症组织及癌旁组织的LncRNA lucat1水平的差异。分析不同患者的肿瘤分化程度、淋巴管浸润、TNM分期、淋巴结转移、远处转移和肿瘤直径的LncRNA lucat1水平的差异。研究患者的肿瘤分化程度、淋巴管浸润、TNM分期、淋巴结转移、远处转移和肿瘤直径与LncRNA lucat1水平之间的相关性。结果 癌症组织的LncRNA lucat1水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤部位的LncRNA lucat1水平之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同分化程度、淋巴管浸润、TNM分期、远处转移和肿瘤直径之间的LncRNA lucat1水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。通过相关性分析,患者的肿瘤分化程度、淋巴管浸润、TNM分期、远处转移和肿瘤直径与LncRNA lucat1水平呈现负相关,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LncRNA lucat1与肿瘤分化、TNM分期和淋巴结转移呈现相关性,可作为患者预后判断以及治疗的重要靶点。

结肠癌中长链非编码RNA LUCAT1水平与患者预后的关系及对结肠癌细胞迁移、侵袭的影响

目的:分析结肠癌中长链非编码RNA(lncRNA)肺癌相关转录本1(LUCAT1)水平与患者预后的关系及对结肠癌细胞迁移、侵袭的影响。方法:选择2016年1月—2017年12月收治的行手术治疗的53例结肠癌患者作为研究对象,检测受试者肿瘤病灶组织和癌旁组织中lncRNA LUCAT1表达水平。取LoVo细胞检测分为空白组、阴性对照组、干预组,检测细胞增殖、迁移、侵袭活性。结果:肿瘤病灶组织中lncRNA LUCAT1水平明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤病灶组织中lncRNA LUCAT1水平是影响患者总生存期和无进展生存期的独立性威胁因素(P<0.05);低lncRNA LUCAT1表达患者总生存期和无进展生存期明显低于高lncRNA LUCAT1表达患者,差异有统计学意义(P<0.05);24 h和48 h时空白组、阴性对照组和干预组LoVo细胞增殖活性存在明显差异,其中空白组最高,干预组最低,差异有统计学意义(P<0.05);3组LoVo细胞迁移及侵袭活性存在明显差异,其中空白组迁移及侵袭活性最高,干预组最低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:结肠癌肿瘤病灶组织中高lncRNA LUCAT1是影响患者预后质量的独立性威胁因素,且可促进结肠癌细胞迁移、侵袭。