紫檀芪调控核转录因子E2相关因子2对体外结肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨紫檀芪对人结肠癌细胞LoVo的作用,并研究核转录因子E2相关因子2(Nrf2)在紫檀芪作用LoVo细胞过程中的调控机制。方法应用不同浓度的紫檀芪(5、10、20、40、60、80、100μmol/L)处理LoVo细胞。CCK-8检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移,Transwell实验检测细胞侵袭,TUNEL染色检测细胞凋亡,JC-1检测线粒体膜电位水平,2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯检测活性氧水平,Western blot检测细胞内Nrf2、磷酸化的Nrf2、血红素加氧酶-1及凋亡蛋白(Bcl2、Bax)的蛋白表达。此外,联合应用Nrf2特异性激动剂萝卜硫素后,重复检测细胞活力、细胞凋亡率及Nrf2的蛋白表达。结果与对照组相比,40、60、80、100μmol/L紫檀芪均可显著降低细胞活性(P=0.014,P<0.001,P<0.001,P<0.001)。5、10、20μmol/L紫檀芪对LoVo细胞活性无影响,但可显著抑制细胞迁移(P=0.008,P<0.001,P<0.001)和侵袭(P均<0.001)。TUNEL染色、JC-1、2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯染色结果显示40、60、80μmol/L紫檀芪增加LoVo细胞凋亡(P=0.014,P<0.001,P<0.001),使线粒体膜电位去极化(P=0.026,P<0.001,P<0.001)并增加细胞内活性氧聚积(P均<0.001)。40、60、80μmol/L紫檀芪下调了LoVo细胞中磷酸化的Nrf2(P=0.030,P<0.001,P<0.001)、血红素加氧酶-1(P=0.015,P<0.001,P<0.001)、Bcl2(P=0.039,P<0.001,P<0.001)的蛋白表达;60、80μmol/L紫檀芪降低了Nrf2的蛋白表达(P=0.001,P<0.001),增加了Bax的蛋白表达(P均<0.001)。应用萝卜硫素联合处理后,紫檀芪抑制细胞活性(P<0.001)、增加细胞凋亡(P<0.001)及下调Nrf2表达(P=0.022)的作用明显减弱。结论紫檀芪是一种有效抑制结肠癌细胞的化合物,其抗癌机制与抑制Nrf2通路有关。

lncRNA结肠癌相关转录本2在结肠癌细胞系中的表达水平及对细胞增殖和凋亡的影响研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录本2(CCAT2)在结肠癌细胞系中的表达水平及对细胞增殖和凋亡的影响。方法标本取自2016年1月至2018年12月南通市中医院收治的55例结肠癌门诊患者。通过体外实验研究,采集结肠癌细胞系HT29、LOVO、SW620、HCT116和正常结肠上皮细胞系NCM460,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定lncRNA-CCAT2的表达情况。取lncRNA-CCAT2在结肠癌中相对表达量最高的细胞系,将其分为空白对照组(磷酸盐吐温缓冲液)、阴性对照组(经Lipofectamine TM 2000转染NC-siRNA序列)、CCAT2-siRNA组(经Lipofectamine TM 2000转染CCAT2-siRNA序列)。采用MTT实验检测三组细胞增殖能力,用流式细胞术检测CCAT2-siRNA组与阴性对照组细胞凋亡能力。通过蛋白印迹法检测CCAT2-siRNA组与阴性对照组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、裂解型聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)及p53蛋白的表达水平。结果相比正常结肠上皮细胞系NCM460,结肠癌细胞系HT29、LOVO、SW620、HCT116中lncRNA-CCAT2相对表达量均明显上调(P<0.05),其中SW620的表达量最高。经MTT实验显示,转染后0、1、2 d,CCAT2-siRNA组与阴性对照组、空白对照组于490 nm波长处的吸光度值(OD 490 nm)比较,均无显著差异(P>0.05);转染后3、4 d,CCAT2-siRNA组OD 490 nm较阴性对照组、空白对照组明显下降(P<0.01);阴性对照组与空白对照组不同时间点OD 490 nm值的比较,均无显著差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,相比阴性对照组,CCAT2-siRNA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。CCAT2-siRNA组Bcl-2蛋白的表达水平明显低于阴性对照组,裂解型PARP和p53蛋白的表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01)。结论lncRNA-CCAT2高表达于结肠癌细胞系,而通过敲低lncRNA-CCAT2的表达可起到阻滞结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,并且其作用机制与Bcl-2蛋白表达降低、裂解型PARP和p53蛋白表达升高可能存在密切关系。

结直肠癌组织中lncRNA CCAT2和NDRG1的表达及意义

目的探讨结直肠癌(CRC)患者组织中长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录物2(CCAT2)、N-myc下游调节基因(NDRG)1的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法选取2018年2月至2020年2月在南通市中医院行CRC根治性手术治疗的96例CRC患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR检测组织中lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA表达,采用免疫组织化学检测组织中NDRG1蛋白表达,采用Kaplan-Meier曲线分析不同lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA表达组患者的预后差异,采用多因素Cox回归分析CRC预后影响因素。结果与癌旁组织比较,癌组织中lncRNA CCAT2表达较高,NDRG1 mRNA表达及蛋白阳性率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移比较,TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移的CRC患者癌组织中lncRNA CCAT2表达较高,NDRG1 mRNA表达较低(P<0.05)。lncRNA CCAT2高表达组3年累积生存率低于lncRNA CCAT2低表达组,而NDRG1 mRNA高表达组3年累积生存率高于NDRG1 mRNA低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期、淋巴结转移,lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA是CRC预后影响因素(P<0.05)。结论CRC组织中lncRNA CCAT2表达升高,NDRG1表达降低,二者均参与CRC肿瘤的进展,可作为评估CRC患者生存预后的新指标。

长链非编码RNA结肠癌相关转录本2在胃癌血清中的表达及临床意义

目的:检测长链非编码RNA结肠癌相关转录本2(CCAT2)在胃癌患者和正常对照组血清中的差异表达,探讨其对胃癌临床诊断的效能及意义。方法:通过实时荧光定量PCR方法检测胃癌和正常对照组血清CCAT2的表达,分析其与胃癌临床病理特征的相关性;通过受试者工作特征(ROC)曲线和危险分数分析法评估CCAT2对胃癌的诊断效能,并与肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原72-4(CA72-4)以及甲胎蛋白(AFP)的诊断效能进行比较。结果:胃癌患者血清中CCAT2的表达量明显高于正常对照组;其表达水平与年龄、性别、肿瘤临床分期、淋巴结转移以及肿瘤远处转移等均不相关,但与肿瘤细胞的分化程度呈负相关。CCAT2诊断胃癌的曲线下面积为0.619,敏感度和特异度分别为78.63%和53.00%,阳性预测值和阴性预测值分别为66.18%和67.95%。与CA19-9、CEA以及CA72-4相比,诊断的敏感度显著增高。结论:CCAT2在胃癌血清中高表达,有可能成为胃癌临床诊断的潜在生物标志物。

结肠癌病灶内Runt相关转录因子2与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子的相关性研究

目的:探讨结肠癌病灶内Runt相关转录因子2(RunX2)与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子的相关性。方法:90例原发性结肠癌患者作为结肠癌组、68例良性结肠息肉患者作为结肠息肉组,对比两组病灶组织中RunX2及增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量的差异,进一步采用Pearson检验评估结肠癌组织中RunX2表达量与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量的相关关系。结果:结肠癌组病灶中RunX2mRNA的表达量高于结肠息肉组。结肠癌组病灶中增殖基因GTPBP4、HOXB7、ZNF331、ADAM17、HSP60 mRNA的表达量高于结肠息肉组;抑癌基因ATF3、FOXN3、OTUD1、NDRG2mRNA的表达量低于结肠息肉组;血管新生分子Musashi 1、NF-κB、RegⅣ、STAT3mRNA的表达量高于结肠息肉组。结肠癌病灶中RunX2mRNA表达量与上述增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量直接相关。结论:结肠癌病灶内RunX2异常高表达,且具体表达量与癌细胞的增殖活性、血管新生活性均呈正相关,是导致结肠癌发生发展的重要分子靶点。

人Runt相关转录因子3、zeste基因增强子同源物2蛋白表达与局部进展期直肠癌新辅助化疗敏感性的关系

目的探究人Runt相关转录因子3(RUNX3)和zeste基因增强子同源物2(EZH2)在直肠癌中的表达情况和相关性,探究RUNX3和EZH2蛋白表达与局部进展期直肠癌患者XELOX方案新辅助化疗敏感性的关系。方法31例术前未经抗肿瘤治疗的直肠腺癌患者的癌组织和癌旁组织作为癌组和癌旁组,实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应检测两组中RUNX3和EZH2 mRNA相对表达量,同时采用免疫组织化学法检测两组中RUNX3和EZH2的蛋白表达情况,分析RUNX3和EZH2在癌组织和癌旁组织中的表达差异;将26例术前行3周期XELOX方案新辅助化疗的局部进展期直肠癌患者的治疗前活检蜡块作为治疗前组,其术后病理蜡块作为治疗后组,病理肿瘤缩退学分级评估患者新辅助化疗疗效,采用免疫组织化学法检测两组中RUNX3和EZH2的蛋白表达情况,分析两基因蛋白表达模式与新辅助化疗疗效的关系。结果与癌旁组相比,癌组RUNX3 mRNA的表达下调,蛋白的阳性表达率降低(P=0.001),EZH2 mRNA的表达上调,蛋白的阳性表达率升高(P=0.022);癌组中RUNX3和EZH2的mRNA表达呈负相关(r=-0.599,P=0.000);12例接受新辅助化疗的患者达到TRG0~TRG2级,新辅助化疗总体有效率为46.15%(12/26);与治疗前组相比,治疗后组RUNX3蛋白阳性表达率有上升趋势,但差异无统计学意义(P=0.163),EZH2蛋白阳性表达率有下降趋势,但差异无统计学意义(P=0.095);治疗前组RUNX3阳性表达的患者新辅助化疗有效率为75.00%(9/12),EZH2阴性表达的患者新辅助化疗有效率为77.78%(7/9),RUNX3+/EZH2-的患者新辅助化疗有效率为100%(7/7),高于其他蛋白表达模式(P=0.019),多因素Logistic回归显示RUNX3蛋白的表达情况是患者新辅助化疗疗效的影响因素。结论RUNX3在直肠癌组织中阳性表达率低于癌旁组织,EZH2在直肠癌组织中阳性表达率高于癌旁组织,二者在直肠癌中的表达呈负相关;XELOX方案新辅助化疗可能会对直肠癌中RUNX3和EZH2的表达产生影响;RUNX3高表达和EZH2低表达的局部进展期直肠癌患者XELOX方案新辅助化疗更敏感。

敲低Runt相关转录因子2(Runx2)表达抑制结肠癌细胞生长和迁移

目的构建稳定低表达Runt相关转录因子2(Runx2)的HCT-8结肠癌细胞,检测对结肠癌细胞生长和迁移等生物学行为的影响。方法首先采用Western blot法检测Runx2在不同结肠癌细胞系中表达,确定HCT-8结肠癌细胞高表达Runx2;将含有Runx2的慢病毒短发卡RNA(shRNA)的干扰载体与慢病毒包装辅助质粒共转染人胚肾HEK293FT细胞后,收集病毒上清,感染HCT-8结肠癌细胞。经嘌呤霉素筛选后,获得慢病毒介导的Runx2 shRNA的稳定表达细胞,利用实时定量PCR和Western blot法检测Runx2的shRNA的干涉效果;用CCK-8法检测细胞增殖活性、平板克隆形成实验检测癌细胞生长、Transwell^(TM)侵袭实验和划痕愈合实验检测Runx2 shRNA转染对癌细胞侵袭和迁移的影响。结果建立了稳定敲低Runx2水平的HCT-8结肠癌细胞;敲低HCT-8细胞Runx2表达水平后,癌细胞的生长、侵袭和迁移受到明显抑制。结论敲低Runx2抑制结肠癌细胞的生长、侵袭和迁移。

血清标志物MMP-2、MMP-9含量表达与结直肠癌转移相关性分析

结直肠癌是常见的一种恶性肿瘤,近年来其发病率呈逐年上升趋势（[1]）,本研究应用双抗体夹心法检测不同时期结直肠患者血清中MMP-2和MMP-9含量变化,旨在为结直肠癌的早期诊断,早期治疗,判断预后提供客观指标。

lncRNA XIST通过miR-32-5p/EZH2分子轴调控结直肠癌HCT-8细胞的恶性生物学行为

目的:探讨lncRNA XIST通过miR-32-5p/果蝇Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog2,EZH2)分子轴调控结直肠癌HCT-8细胞的恶性生物学行为。方法:收集2014年7月至2018年8月中南大学湘雅医院直肠肛门外科资料完整的结直肠癌患者28例癌组织和配对的癌旁组织标本,采用qPCR检测结直肠癌组织及细胞系中lncRNA XIST和miR-32-5p的表达水平,双荧光素酶报告基因验证1ncRNA XIST、miR-32-5p和EZH2的靶向关系,并进一步通过WB检测EZH2的表达水平。CCK-8、Transwell及Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测HCT-8细胞增殖、迁移及凋亡情况。结果:lncRNA XIST在结直肠癌组织及细胞系中高表达,且在HCT-8细胞中表达最高(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因证实,lncRNA XIST靶向负调控miR-32-5p(P<0.05),且EZH2是miR-32-5p的靶基因。敲降1ncRNA XIST抑制HCT-8细胞增殖和迁移并诱导其凋亡(P<0.05或P<0.01);进一步实验证明,敲降lncRNA XIST上调miR-32-5p的表达水平,从而下调EZH2表达水平,进而抑制HCT-8细胞增殖和迁移并诱导其凋亡。结论:lncRNA XIST通过miR-32-5p/EZH2分子轴促进HCT-8细胞增殖、迁移并抑制细胞凋亡。

前列腺癌细胞系中结肠癌相关转录因子2与雄激素受体基因的转录调控关系

雄激素受体(androgen receptor,AR)是经典的前列腺癌主效基因。结肠癌相关转录因子2(colon cancer associated transcript 2,CCAT2)是基于GWAS大数据结果发现的前列腺癌相关长链非编码基因,二者关系尚未见报道。依据AR表达模式的不同,前列腺癌(prostate cancer,PCa)可以划分为普通前列腺癌以及恶性程度更高的去势抵抗性前列腺癌(castration-resistance prostate cancer,CRPC)两种截然不同的发展阶段,其机制尚不明确。AR与CCAT2是否存在调控关系以及是否在其中发挥作用是本研究的切入点。本文采用雄激素依赖型与非依赖型的前列腺癌细胞研究模型LNCaP与DU145细胞系,研究发现了CCAT2与AR存在转录调控关系。首先,采用过表达与敲低的分子生物学研究策略,发现二者的RNA水平存在相互调控。在DU145细胞中,G型CCAT2激活AR mRNA水平到2.6倍,T型CCAT2抑制AR mRNA水平至0.2(P<0.05);在LNCap细胞中,G型CCAT2激活AR mRNA水平1.5倍,T型CCAT2对AR mRNA水平变化无显著意义(P<0.05)。在DU145细胞中过表达AR,CCAT 2的表达量上升2.9倍(P<0.05);在LNCaP细胞中沉默AR的表达,CCAT 2的表达水平下降至0.48(P<0.05)。报告基因分析结果显示,CCAT2对AR启动子相对活性影响与RNA水平改变相一致。由于CCAT2研究的缺乏,本文进一步研究了其与细胞活性以及对AR蛋白质水平的影响,数据显示与转录水平的结果基本一致。最后,本文初步分析了AR与CCAT2可能相关的靶基因,包括CTNNB1,MYC和TCF7L 2,初步探讨可能的机制并验证了转录水平的发现。结果表明,在LNCaP细胞中G型CCAT2分子激活AR的转录,U型CCAT2无作用。在DU145细胞中,G型CCAT2激活AR转录,U型CCAT2抑制AR的转录。在2个细胞系中,AR都激活CCAT 2整体的转录活性,提示二者存在反馈调节机制。研究发现,CCAT2与AR的转录调控关系,为真核基因表达与调控的机制研究以及前列腺癌的发病机制与治疗提供了理论与实验数据。

LncRNA-CCAT2在结直肠癌患者中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA结肠癌相关转录物2(LncRNA-CCAT2)在结直肠癌(CRC)患者中的表达及其临床意义。方法收集2017年1月至2017年7月汉中市中心医院治疗的40例CRC患者的癌组织、癌旁组织、血清标本及40例无瘤患者的血清标本。运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法分别检测标本中LncRNA-CCAT2的表达量;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CCAT2对CRC的诊断价值;采用Kaplan-Meier分析CCAT2对CRC患者生存的影响。结果相较于癌旁正常组织标本,CCAT2在癌组织标本中表达明显上调(P<0.05);相较于无瘤患者的血清标本,CCAT2在CRC患者血清标本中表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。当CCAT2联合CEA用于诊断CRC时,灵敏度、特异度、AUC分别为67.5%、87.5%、0.849。结论CCAT2可作为诊断及预测CRC预后的生物学标记物。

IKBKE、YAP1和TEAD2在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨核因子κb激酶亚基ε的抑制剂(IKBKE)、Yes相关蛋白1(YAP1)和转录增强结构域转录因子2(TEAD2)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其临床意义。方法收集2016年1月至2017年12月在蚌埠医科大学第一附属医院手术切除的142例CRC组织及对应癌旁组织,采用免疫组化法检测标本中IKBKE、YAP1和TEAD2的表达情况。分析3种蛋白在CRC组织中表达的相关性,分析蛋白阳性率与患者临床病理参数及预后的关系;绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较这些蛋白不同表达情况患者的生存差异。采用Cox回归分析影响患者预后的危险因素。结果CRC组织中IKBKE、YAP1和TEAD2的阳性率均显著高于癌旁组织(65.5%比9.9%,73.9%比14.1%,66.9%比8.5%,均P<0.05)。IKBKE的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤-淋巴结-远处转移(TNM)分期有关,YAP1和TEAD2的表达均与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关。Spearman秩相关分析显示CRC组织中IKBKE与YAP1、TEAD2表达均呈正相关(均P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析显示IKBKE、YAP1和TEAD2阳性表达组的总生存率降低。Cox回归分析显示IKBKE、YAP1和TEAD2阳性、肿瘤分化程度高、TNM分期高是CRC患者预后的独立危险因素。结论CRC中IKBKE、YAP1和TEAD2阳性表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、转移等因素有关,可能成为CRC治疗的潜在靶点;检测这3个蛋白的表达有助于评估预后。

敲低转录因子Runx2调节结肠癌移植瘤体外生长的实验研究

目的:研究敲低转录因子Runx2对结肠癌移植瘤体外生长的影响。方法:培养结肠癌细胞株HT29并分别转染阴性对照(NC)-shRNA的质粒、Runx2-shRNA的质粒,将转染shRNA的结肠癌细胞注射进入C57裸鼠的皮下,分别作为NC组和Runx2敲低组。建立模型1、2、3周后,采集血清并测定肿瘤标志物的含量,采集肿瘤病灶并测定增殖、凋亡基因的表达量。结果:模型建立后1、2、3周时,Runx2敲低组小鼠血清中CCSA-2、CEA、CA19-9的含量以及移植瘤病灶中Rac1、Wnt3a、PLD2、FAM96B的蛋白表达量均显著低于NC组,Runx2敲低组移植瘤病灶中MS4A12、ASPP2、Fas的蛋白表达量均显著高于NC组。结论:敲低转录因子Runx2能够抑制结肠癌移植瘤的体外生长。

高糖培养条件下lncRNA CCAT2调控心肌细胞损伤和凋亡的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录本2(CCAT2)在高糖培养条件下心肌细胞中的表达变化及通过Wnt/β-catenin信号通路调控心肌细胞损伤和凋亡的机制。方法 体外培养人心肌细胞AC16,将细胞分为4组,对照组、高糖组、高糖+干扰RNA阴性对照组、高糖+干扰RNA组(干扰RNA的靶标为lncRNA CCAT2)。采用CCK8法及流式细胞术检测细胞增殖和凋亡率;实时荧光定量PCR(qPCR)检测lncRNA CCAT2、β-catenin、转录因子7类似物2(TCF7L2)、Caspase-3、c-Myc、细胞周期蛋白(Cyclin)D1基因的表达;Western blot检测β-catenin、TCF7L2、CyclinD1蛋白表达;检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性。结果 高糖培养条件下的AC16心肌细胞lncRNA CCAT2的基因表达显著高于对照组(P<0.05),同时β-catenin、TCF7L2、Caspase-3、c-Myc、CyclinD1基因表达显著上调(P<0.05),细胞增殖受到抑制(P<0.05),凋亡率增加(P<0.05),细胞培养液中LDH和AST活性显著升高(P<0.05),细胞中SOD活性显著降低(P<0.05)。高糖培养条件下,RNA干扰lncRNA CCAT2表达后,细胞增殖增加(P<0.05),细胞凋亡率显著下降(P<0.05),β-catenin、TCF7L2、Caspase-3、c-Myc、CyclinD1基因的表达下调(P<0.05),β-catenin(细胞核)、TCF7L2、CyclinD1蛋白表达显著下调(P<0.05),β-catenin(细胞质)蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论 高糖条件下,lncRNA CCAT2可通过Wnt/β-catenin信号通路调控心肌细胞损伤和凋亡。

结肠炎相关结直肠癌的发病机制研究进展

炎症性肠病与结直肠癌的发生密切相关。核因子κB和环氧合酶2、前列腺素通路的持续激活,释放促炎细胞因子,增强活性氧和活性氮水平导致炎症反复发作。炎症信号进一步增加氧化应激,促进DNA诱变,导致肿瘤的发生;激活上皮细胞促存活和抗凋亡途径,促进肿瘤的发展;创造肿瘤微环境,支持血管生成、迁移与肿瘤细胞浸润,促进肿瘤进展和转移。本文通过复习文献,主要综述了结肠炎相关结直肠癌的可能发病机制。

人前梯度蛋白2在结肠癌组织中的表达及其意义

目的:检测人前梯度蛋白2(anterior gradient-2,AGR2)在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌临床病理参数之间关系.方法:采用半定量反转录-聚合酶链反应(semiquantitative RT-PCR)检测结肠癌及癌旁正常组织中AGR2 mRNA表达情况,应用蛋白质印迹(Western blot)、免疫组织化学S-P法检测结肠癌及癌旁正常组织中AGR2蛋白的表达情况,并结合临床病理参数进行分析.结果:半定量PCR及Western blot结果显示,AGR2 mRNA及蛋白在结肠癌的表达水平均明显高于癌旁正常组织(mRNA:0.95±0.03vs 0.21±0.06,P<0.05;蛋白:0.93±0.03 vs0.31±0.02,P<0.05);免疫组织化学结果显示,AGR2在结肠癌组织中阳性表达率明显高于癌旁正常组织(75%vs 29.4%,P<0.05),AGR2在结肠癌组织中的表达与年龄、性别无相关性(P>0.05),与Dukes分期、组织学分级、淋巴结转移均显著相关(P<0.05).结论:AGR2在结肠癌组织中的表达上调可能与结肠癌的发生、发展、转移相关,有望成为结肠癌的早期诊断指标.

结核分枝杆菌感染的肺癌患者血清中lncRNA CCAT2、miR-20a的表达及其临床意义

目的:检测结核分枝杆菌(MTB)感染肺癌患者血清结肠癌相关转录因子2(lncRNA CCAT2)、miR-20a的表达,分析其临床意义。方法:选取2013年6月至2015年1月本院收治的肺癌患者104例为研究对象,其中MTB感染患者54例,未感染患者50例,同期选取本院健康体检者55例为对照组;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测所有受试者血清lncRNA CCAT2、miR-20a表达水平;并对所有肺癌患者进行5年内随访,记录患者生存状态;Kaplan-Meier生存曲线分析lncRNA CCAT2、miR-20a与MTB感染肺癌患者及非MTB感染肺癌患者预后的关系;COX回归分析肺癌患者预后的危险因素。结果:与对照组比较,肺癌患者血清lncRNA CCAT2、miR-20a表达水平均显著升高(P<0.05),与非MTB感染肺癌患者比较,MTB感染患者lncRNA CCAT2、miR-20a表达水平均显著升高(P<0.05);肺癌患者血清lncRNA CCAT2和miR-20a表达与患者MTB感染、临床分期及组织分级有关;多因素COX分析表明,MTB感染、临床分期、组织分级、血清lncRNA CCAT2、miR-20a表达水平是影响肺癌患者预后的危险因素(P<0.05);对肺癌患者出院后随访,MTB感染患者和非MTB感染患者lncRNA CCAT2高表达组5年内生存率(12.9%、17.9%)均低于低表达组(21.7%、36.4%),miR-20a高表达组5年内生存率(13.8%、18.5%)均低于低表达组(20.0%、34.8%),MTB感染肺癌患者累积生存率(16.7%)低于非MTB感染肺癌患者(26.0%)。结论:lncRNA CCAT2、miR-20a可能参与MTB感染肺癌患者的预后,可能是MTB感染肺癌患者预后的生物标志物。

结直肠癌根治术患者Nrf2、HO-1因子变化及在预后判断中的应用

目的探讨结直肠癌根治术患者转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)因子变化及在预后判断中的应用价值。方法选择2017年3月至2020年1月于该院接受结直肠癌根治术治疗的结直肠癌患者84例为研究对象,术中收集癌组织及其配对癌旁正常组织,采用免疫组织化学染色测定患者不同组织中Nrf2、HO-1的表达情况,分析不同临床病理特征患者Nrf2、HO-1表达的差异。根据Nrf2、HO-1界值分层,采用Kaplan-Meier生存函数计算不同分层患者无病生存期(DFS)和总生存期(OS),同时采用Cox回归模型分析结直肠癌患者DFS和OS的独立危险因素。结果结直肠癌组织中Nrf2、HO-1的评分比癌旁组织低(P<0.05);结直肠癌组织中Nrf2、HO-1的低表达率分别为63.95%(55/86)、66.28%(57/86),进一步分析发现,Nrf2、HO-1低表达患者肿瘤浸润深度T3~T4、脉管浸润及TNM分期Ⅲ期例数均高于高表达患者(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,结直肠癌组织中Nrf2、HO-1低表达组患者的DFS率和OS率均低于高表达组(P<0.05)。Cox单因素分析结果显示,结直肠癌患者TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移分级N2~N3、有脉管浸润、浸润深度T3~T4及组织中Nrf2低表达、HO-1低表达为患者DFS和OS的危险因素(P<0.05)。多因素分析结果显示,TNM分期Ⅲ期及组织中Nrf2低表达、HO-1低表达均为患者DFS和OS的独立危险因素(P<0.05)。结论Nrf2、HO-1在结直肠癌组织中的表达明显低于癌旁组织,其低表达与不良临床病理特征及预后关系紧密,是结直肠癌根治术患者DFS和OS的影响因素,可作为预测术后死亡及复发转移风险的可靠生物标志物。

lncRNA CCAT2在胃癌患者血清中的表达及其临床诊断意义

目的探讨血清中长链非编码RNA(lncRNA)结直肠癌相关转录本2(CCAT2)的相对表达水平在胃癌(GC)早期诊断和预后监测中的临床意义及应用价值。方法收集经过南通大学附属医院病理科确诊的40例GC患者术前与术后血清,30例胃良性病变(胃溃疡及胃息肉)患者血清,并收集同期43名年龄相仿体检健康者血清。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)定量检测血清CCAT2的相对表达量;用化学发光免疫分析法检测血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19-9(CA19-9)的水平。用受试者工作特征(ROC)曲线评价CCAT2对GC的诊断效能。结果初诊GC患者血清CCAT2的相对表达量升高,且显著高于胃良性病变患者和健康对照者(P<0.01),而胃良性病变患者与健康对照者之间差异无统计学意义(P>0.05)。GC患者术前CCAT2的表达量高于术后,差异有统计学意义(P<0.01);初诊GC患者血清CCAT2的高表达与肿瘤大小(P=0.028)、TNM分期(P=0.012)、淋巴结转移(P=0.034)相关,与GC患者的年龄和性别不相关(P>0.05)。在诊断效能上,以0.985作为CCAT2诊断GC的临界值,其曲线下面积(AUC)为0.851[95%可信区间(CI)0.772~0.930,P<0.05];在鉴别GC患者与胃良性病变患者时,以1.125作为临界值,其AUC为0.808(95%CI 0.701~0.916,P<0.05)。血清CCAT2与CEA、CA19-9联合检测诊断GC的敏感性为98%,但各指标表达量间没有明显的相关性。结论CCAT2可作为一种新的生物学标志物,在GC的诊断、预后判断中有一定的价值,且与CEA和CA19-9联合检测可提高对GC的诊断效能。

长链非编码RNA CCAT2与胃癌临床病理特征及自噬的相关性

目的探讨长链非编码RNA结肠癌相关转录本2(CCAT2)在胃癌中的表达及临床意义。方法收集接受手术治疗的胃腺癌患者40例,qRT-PCR法检测胃癌或正常胃壁组织CCAT2及Beclin-1基因表达,分析CCAT2表达与患者临床病理特征及胃癌自噬水平之间的相关性。结果胃癌组织中CCAT2的表达水平显著高于正常胃组织(P<0.05),同时,胃癌CCAT2表达水平与胃癌细胞增殖指数、肿瘤淋巴结转移程度及肿瘤临床分期明显相关(P<0.05),而CCAT2表达水平与Beclin-1表达呈负相关(P<0.05)。结论 CCAT2在胃癌组织中表达明显上调,并可能进一步诱导胃癌细胞增殖转移并抑制胃癌细胞自噬。