lncRNA-ADAMTS9-AS2与胶质瘤预后的相关性

目的探讨长链非编码RNA-ADAMTS9-AS2(lncRNA-ADAMTS9-AS2)在神经胶质瘤组织中的表达情况及其与胶质瘤病人预后的相关性。方法收集2009年6月至2013年6月手术治疗的原发性神经胶质瘤57例(WHOⅠ～Ⅱ级27例,Ⅲ～Ⅳ级30例)。应用qRT-PCR法分别检测神经胶质瘤组织以及瘤旁正常脑组织lncRNA-ADAMTS9-AS2的表达水平。所有入选病人术后均进行5年随访或直到死亡,根据Kaplan-Meier方法进行生存曲线分析,采用多因素Cox比例风险回归模型分析死亡的风险因素。结果与瘤旁正常脑组织相比,胶质瘤组织lncRNA-ADAMTS9-AS2的表达水平明显降低(P<0.001);而且,高级别(WHOⅢ～Ⅳ级)胶质瘤表达水平明显低于低级别(WHOⅠ～Ⅱ级)胶质瘤(P<0.05)。57例中,lncRNA-ADAMTS9-AS2呈低表达31例(低表达组),高表达26例(高表达组)。57例中,死亡30例,其中低表达组21例(67.7%),高表达组10例(38.5%)。生存曲线分析显示,低表达组病人生存时间较高表达组明显缩短(P<0.05)。多因素Cox比例风险回归模型分析结果显示,lncRNAADAMTS9-AS2低表达是预测胶质瘤病人预后不良的独立风险因素(HR=2.413;95%CI 1.462～4.421;P=0.004)。结论 lncRNAADAMTS9-AS2在神经胶质瘤中表达下调,其可作为胶质瘤病人预后不良的肿瘤标志物。

miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的:探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法:采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果:与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05);抑制组转染后的细胞中miR-223-3p和LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均降低(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均升高(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力均增加(P<0.05)。转染72 h后,TGFBR3蛋白表达水平及mRNA的表达水平细胞增殖与迁移能力:抑制组>观察组>过表达组(P<0.01)。3组miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2 mRNA表达水平逐渐降低,抑制组<对照组<过表达组(P<0.01)。结论:miR-223-3p抑制肺癌H1299细胞的增殖和迁移,靶向下调TGFBR3和上调LncRNA ADAMTS9-AS2表达可能为其作用机制。

结直肠癌组织中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌组织中高迁移率族蛋白B2(HMGB2)、黑色素瘤相关抗原-A9(MAGE-A9)、DNA错配修复基因(MMR)蛋白表达情况,以及其在评估患者预后中的临床价值。方法选取52例结直肠癌患者作为研究对象,术中采集所有患者肿瘤标本及癌旁组织标本,检测HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达水平,并分析各指标表达情况与病理特征、预后间的关系。结果肿瘤组织内HMGB2、MAGE-A9、MMR阳性表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤分期Ⅲ期、分化程度低分化、淋巴结转移患者HMGB2、MAGE-A9、MMR阳性表达率高于Ⅰ期、Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。随访3年,52例患者存活率为71.15%(37/52);HMGB2阳性组存活率[61.76%(21/34)]低于HMGB2阴性组[88.89%(16/18)],差异有统计学意义(χ^(2)=4.219,P=0.040);MAGE-A9阳性组存活率[58.62%(17/29)]低于MAGE-A9阴性组[86.96%(20/23)],差异有统计学意义(χ^(2)=5.018,P=0.025);MMR阳性组存活率[52.00%(13/25)]低于MMR阴性组[88.89%(24/27)],差异有统计学意义(χ^(2)=8.606,P=0.003)。结论HMGB2、MAGE-A9、MMR在结直肠癌中呈高表达状态,其表达与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移关系密切,且不同表达患者存活率存在较大差异,可作为评估预后的重要指标。

ADAMTS9-AS2在乳腺癌患者血浆中的表达及其意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)ADAMTS9-AS2在乳腺癌患者血浆中的表达情况及其临床意义。方法收集44例乳腺癌初诊患者、48例乳腺良性病变患者的血浆标本,以同期50例年龄相仿的门诊健康体检女性血浆标本作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血浆ADAMTS9-AS2的相对表达量;对44例乳腺癌患者标本进行统计学分析,研究血浆ADAMTS9-AS2表达水平与患者年龄、病理类型、淋巴结转移、雌激素受体、孕激素受体、增殖细胞核抗原(Ki67)、人表皮生长因子-2等临床病理特征的关系。结果血浆ADAMTS9-AS2的相对表达量在48例乳腺良性病变患者中,除2例降低外,其余均升高,在44例乳腺癌初诊患者中均升高,且血浆ADAMTS9-AS2在乳腺癌中的表达水平明显高于乳腺良性病变,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者血浆高表达的ADAMTS9-AS2与Ki67有关(P=0.033 8)。结论 ADAMTS9-AS2在乳腺癌患者血浆中高表达,可作为乳腺癌早期诊断的潜在新型生物标志物。

长非编码RNA lncRNA ADAMTS9-AS2促进唾液腺腺样囊性癌侵袭转移的研究

目的检测不同转移能力的唾液腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞中差异表达的长非编码RNA(lncRNA),探讨lncRNA在唾液腺腺样囊性癌侵袭转移中的作用。方法以腺样囊性癌高转移细胞株SACC-LM为实验组,低转移细胞株SACC83为对照组,采用lncRNA芯片初步筛选差异表达的lncRNA,通过qRT-PCR进一步验证差异表达的lncRNA。通过侵袭迁移实验检测转染差异表达的lncRNA siRNAs前后腺样囊性癌细胞株侵袭迁移能力的变化。并对差异表达的lncRNA与SACC患者的临床病理特征和预后进行分析。结果芯片筛选出ADAMTS9-AS2在高转移细胞系(SACC-LM)中高表达,实时定量RT-PCR进一步验证了其在高转移细胞系(SACC-LM)显著上调,通过侵袭迁移实验发现在转染后下调ADAMTS9-AS2的表达水平后侵袭迁移能力明显降低(P<0.001)。临床病理资料分析表明,ADAMTS9-AS2在SACC组织中高度表达。高表达的ADAMTS9-AS2与SACC患者预后不良和肿瘤转移率高有关。结论高表达ADAMTS9-AS2促进SACC细胞迁移和侵袭,ADAMTS9-AS2在SACC组织中上调,并且与高转移率和不良预后相关。

LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制结直肠癌的增殖和转移

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)ADAMTS9-AS2在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的表达、临床意义和生物学作用。方法:利用基因芯片数据分析CRC中ADAMTS9-AS2的表达情况,并利用real-time PCR技术在20例CRC组织和癌旁正常组织及细胞系中进行验证。利用基因芯片提供的临床数据进行临床病理特征相关性分析、Kaplan-Meier生存分析和Cox回归分析。利用CCK-8、克隆形成和Transwell迁移和侵袭实验检测ADAMTS9-AS2对CRC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:ADAMTS9-AS2在CRC组织和细胞中显著低表达(P<0.05),其表达高低与早期CRC患者的年龄、性别、分期、病灶位置和错配修复状态均无明显相关性(P>0.05)。在早期CRC患者中,ADAMTS9-AS2高表达组患者的5年无复发生存率高于低表达组(83.8%vs 73.5%,P=0.041),ADAMTS9-AS2高表达是CRC患者无复发生存的独立保护因素(风险比=0.528,95%CI:0.299~0.932;P=0.028)。ADAMTS9-AS2表达上调能明显抑制CRC细胞的增殖和转移(P<0.05),表达下调则导致相反的结果(P<0.05)。结论:ADAMTS9-AS2通过抑制CRC细胞的增殖和转移发挥抑癌基因的作用,是CRC重要的预后因素。

长链非编码RNA DOCK9-AS2对甲状腺乳头状癌细胞增殖和迁移的影响

目的检测长链非编码RNA DOCK9-AS2在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达水平及对PTC细胞增殖、迁移能力的影响。方法收集2016年6月至2017年6月间在南京医科大学第一附属医院手术切除的PTC标本及对应的癌旁组织,采用qRT-PCR检测62对组织中DOCK9-AS2的表达,并分析其与患者临床病理资料的关系。通过细胞转染技术构建沉默DOCK9-AS2的甲状腺癌BCPAP细胞株,用CCK8方法检测DOCK9-AS2对PTC细胞增殖能力的影响;划痕实验观察沉默下调DOCK9-AS2的表达对细胞侵袭转移能力的影响。结果 DOCK9-AS2在PTC的mRNA表达水平(0.009 7±0.004 4)高于癌旁组织(0.002 6±0.001 0),差异具有统计学意义(P<0.05)。DOCK9-AS2在PTC组织中的表达与淋巴结转移、腺外侵犯有关(P<0.05)。在BCPAP细胞中下调DOCK9-AS2的表达时,PTC细胞的增殖和侵袭转移能力减弱(P<0.05)。结论 DOCK9-AS2在PTC中表达显著增高,沉默DOCK9-AS2的表达可抑制PTC细胞的增殖、侵袭和转移。

应用CLSI EP9-A2文件对不同血细胞分析仪进行比对

目的通过对不同血细胞分析仪检测结果的方法学比对,探讨不同检测系统各参数测定结果间的可比性。方法参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)的EP9-A2文件,以SYSMEX XE-2100血细胞分析仪为参比仪器,2台迈瑞BC-5380仪器为待评仪器,用临床新鲜抗凝全血对白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)进行检测,计算相关系数(r)和回归方程,以及各项目在不同医学决定水平(Xc)处的偏差,以1/2CLIA′88相对允许误差(TEa%)作为标准判断偏差是否可接受。结果 2台BC-5380分别与XE-2100仪器间测定结果的相关系数r>0.975。在不同的Xc处,其中WBC为2.0×10~9/L和4.0×10~9/L;RBC为3.5×10^(12)/L、5.5×10^(12)/L、6.0×10^(12)/L;Hb为160g/L,偏差均大于1/2CLIA′88 TEa%;但这些项目1/2CLIA′88绝对允许误差(TEa)均落在偏差的95%可信区间内,说明是由抽样误差所引起,表明待评方法的偏差可接受;其余项目偏差均可接受。结论 2台迈瑞BC-5380血细胞分析仪分别与XE-2100在WBC、RBC、Hb、PLT等4个项目的检测结果具有可比性。

应用NCCLS Ep9-A2对两种血糖仪的血糖检测结果进行比较

目的:通过对强生SureStep稳步系统血糖仪和拜安康TM血糖监测仪进行比对,评价两种血糖仪检测血糖结果的一致性。方法:按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A2文件的要求,以强生SureStep血糖分析仪为比较仪器,拜安康TM血糖分析仪为待评仪器,两台血糖仪分别测定44例患者静脉全血的血糖值,并对两仪器进行方法比对和偏倚估计。结果:强生和拜安康的血糖结果具有较好的相关性,其回归式方程为 ,相关系数。两种血糖仪器测定结果的预期偏倚在Xc为2.8mmo1/L、7.0mmo1/L和11.2mmol/L时分别是0.178、-0.435和-1.408,预期偏倚95%的可信区间包含了规定的可接受偏倚。结论:强生和拜安康两种血糖仪测定静脉血样本时,测定结果的预期偏倚可以接受。检测血糖可以在强生和拜安康两种血糖仪上任意检测。

应用NCCLSEp9-A2对两种仪器的血糖测定结果进行比较及偏倚评估

目的通过对雅培ARCHITECTC8000生化仪和拜安康TM血糖监测仪测定的血糖值进行比对,评价两种方法检测血糖结果的一致性。方法按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A2文件的要求,以C8000生化仪为比较仪器,拜安康血糖仪为待评仪器,两台仪器分别测定44例患者静脉全血的血糖值,并对两仪器进行方法比对和偏倚估计。结果 C8000和拜安康测定血糖结果具有较好的相关性,相关系数r0.990,其回归式方程为=0.818X+0.38。两仪器测定结果的预期偏倚在当Xc为2.78mmol/L时,允许误差(TEa)值大于预期偏倚95%可信区间的上限,而Xc为6.99mmol/L、11.00mmol/L及检测极值33.33mmol/L时,允许误差(TEa)值小于预期偏倚95%可信区间的下限,且相对偏倚随检测浓度的增加而增加。结论与C8000比较,拜安康TM血糖监测仪测定正常人和高血糖病人的静脉血样本时,其测定结果的预期偏倚大于允许误差,不可接受。

EP9-A2对两种发光免疫分析法的一致性分析

目的对EP9-A2法在微粒子化学发光免疫分析法和电化学发光免疫分析法的一致性研究中的应用情况进行分析探讨。方法抽取在2011年3月至2013年3月间我院收集的血清标本63份,对其采取微粒子化学发光免疫分析法和电化学发光免疫分析法对IgE水平进行检测,而后采取EP9-A2法并对检测结果一致性进行分析。结果微粒子化学发光免疫分析法和电化学发光免疫分析法的检测结果存在显著线性关系,结果偏差在允许范围内。结论 EP9-A2法在微粒子化学发光免疫分析法和电化学发光免疫分析法的一致性研究中具有重要价值,值得关注。

CLSI-EP9-A2标准在两种不同尿素试剂间的应用

目的 通过对两种不同尿素试剂进行方法学比对分析,探讨各试剂测定血清尿素是否具有可比性.方法 依据美国临床和实验室标准研究所（CLSI）EP9-A2文件要求,每天随机从临床样本中抽取8份不同尿素浓度的血清样本,分别用两种试剂进行尿素的测定,共测定5天,记录检测结果,将结果进行相关回归分析.根据直线方程计算在医学决定水平处的预期偏倚（c）和预期偏倚的95%可信区间,并判断偏倚是否可以接受.结果 两种试剂对血清尿素测定结果的相关系数（r）=0.998,截距（a）=0.048,斜率（b）=0.987,回归方程：Y=0.987X＋0.048.无方法内、间的离群点,两者结果具有可比性.结论 当用两种或两种以上以上试剂检测同一检验项目时,应进行方法比对和偏倚评估,判断其临床可接受性能,以保证检验结果的可比性.

9,9-二甲基-2-(4-甲氧基苯基)-4-苯基-9H-吡啶并[1,2-a]吲哚高氯酸盐的微波合成及晶体结构

利用2,3,3-三甲基-3H-吲哚高氯酸盐、1-苯基-3-(4-甲氧基苯基)-2-丙烯-1-酮与哌啶在微波辐射条件下合成了9,9-二甲基-2-(4-甲氧基苯基)-4-苯基-9H-吡啶并[1,2-a]吲哚高氯酸盐,在甲醇中培养出单晶,通过X射线单晶结构分析法测定分子结构和晶体结构,晶体属于正交晶系,Pca21空间群,晶胞参数为:a=2.7923(6)nm,b=0.92126(17)nm,c=1.8345(4)nm,V=4.7190(16)nm3,Dc=1.345g/cm3,μ=0.201mm-1,F(000)=2000,Z=8,R1=0.0566,wR2=0.1320.

基于Excel VBA的EP9-A2文件数据处理模板的建立与应用

Microsoft Excel 2003具有数据输入与处理、图表制作、报表设计、统计分析等功能,用Excel软件VBA程序语言对EP9-A2文件方法比对实验中的公式、函数、图表、统计、打印等编程,经固化、隐藏、加密、自动化运行等处理后制作安全快捷的数据处理模板。使用该模板时只要录入实验数据,可自动实现相关数据处理,如筛选离群值、绘制偏移图及线性回归方程、计算相关系数、检查并判定X值合适范围、计算与判定预期偏移及其可信区间、打印报告等。

EP9-A2文件在评价两种碱性磷酸酶试剂中的应用

目的 应用美国临床和实验室标准研究所（CLSI）EP9-A2评价文件对两种碱性磷酸酶（ALP）试剂进行方法学比对分析,探讨两种试剂测定ALP是否具有可比性.方法 依据EP9-A2文件要求,每天随机从临床样本中抽取8份不同浓度水平的血清样本,分别用两种试剂进行ALP测定,共测定5天,记录检测结果,将结果进行相关回归分析.根据直线方程计算在某医学决定水平处的预期偏倚（BAK^C）和预期偏倚的95%可信区间,并判断偏倚是否可以接受.结果 不同试剂对ALP测定结果的偏倚在允许误差范围内,两者结果具有可比性.结论 在实验室用两种以上试剂检测同一项目时,可参照EP9-A2文件进行方法学比对和偏倚分析,判断其临床可接受性能,以保证实验室检测结果的准确性和可比性.

用EP9-A2法评价两种血凝检测系统间结果的一致性

随着检验医学的迅速发展，检验技术、检测项目的不断更新，不同型号不同检测原理的血凝仪在国内得到广泛使用。沃芬公司近年来推出了ACLTOP700血凝仪，为验证该仪器与常见CA1500血凝仪对同一项目在不同仪器上检测结果的一致性，本研究参照美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）颁布的EP9-A2文件，即《用患者样本进行方法学比对及偏倚评估》的要求，对两套检测系统测定凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）的结果进行比对和偏倚评估分析，现将结果报告如下。

极差法比对和EP9-A2指南在不同仪器系统间可比性的联合应用

目的:探讨不同仪器系统间检验结果的可比性,为确保检验结果的准确性提供科学依据。方法:对检验科生化室内所有全自动生化分析仪的钾(K)、钠(Na)、氯(Cl)、钙(Ca)等生化检验结果进行极差法比对,对总胆红素(TB)生化检验结果运用EP9-A2文件规定方法———用患者样本进行方法比对及偏倚评估。结果:2种方法均显示在不同比对仪器系统间的检验结果具有可比性。结论:2种比对方法具有各自的优缺点,极差法比对操作简单,样本准备个数少,可运用于最多10台仪器的检验结果间的可比性验证。但是要求苛刻,室内质控物同一批号至少应使用6个月以上,不同仪器系统精密度(CV)的比值应小于2,否则不适用。可接受标准也不易确定;EP9-A2比对方法可随时进行,可接受标准参照美国临床检验修正法规CLIA'88的允许误差标准,但操作复杂,计算烦琐,样本收集多,对于仪器较多的科室成本也高。临床实验室应根据自身情况选择合适的方法。

参照EP9-A2对血糖两种检测系统进行方法学比对研究

目的评价血糖的日立-新成检测系统与罗氏检测系统有无明显差异。方法参照EP9-A2文件的规定，对血搪的两个检测系统进行方法学比对试验。结果两个检测系统测定结果的均值进行相关回归分析：y=0．993x—0．1339，R2：0．9963，医学决定水平上的系统误差（SE％）在可接受范围内。结论本实验室建立的血糖日立一新成检测系统与罗氏检测系统无明显差异。

“简捷法”与EP9-A2“标准法”比对分析偏倚评估结果的比较研究

目的比较EP9-A2"标准法"与"简捷法"(称"两法")在不同检测系统20项生化比对偏倚评估结果的一致性,探讨简捷实用、结果可靠的实验室常规比对偏倚评估法。方法参照EP9-A2方案共40份样本;"简捷法"收集当日检测范围内高中低不同浓度均匀分布的新鲜血清样本5份(A法),连续两日10份(B法);其他方法步骤同EP9-A2方案,以OLYMPUS-2700型自动生化分析仪为比对系统(X),OLYMPUS-AU400型生化仪,做待测系统(y),分别对20项常规生化进行每样本的双份测定。并作系统地比较。结果除"标准法"中少数项目剔除一个(对)离群值样本外,"简捷法"组内与组间均未检出离群值;"两法"的不同检测系统GGT、Cr、Mg间均存在明显偏倚,不可比;在取值范围内相关系数(r)】0.99时,"简捷法"A、B与"标准法"偏倚可接受性的符合率均≥98%,,具高度一致性(Kappa值分别为1.0、0.8,P=0.000);平均偏差法(SE%)不能检出离群值,结果信度不高(符合率86%,Kappa值0.39～0.54)。结论 "简捷法"与EP9-A2"标准法"可接受性结果具高度一致性,具简便、经济、可信、操作性强特点;可做为日常比对试验偏倚评估的辅助法在国内推广使用。

EP9-A2对两种发光免疫分析法的一致性研究

目的采取EP9-A2法对两种发光免疫分析法的一致性的评价结果进行分析探讨。方法抽取在2011年1月-2012年12月间我院收集的血清标本60份,采取Access分析仪与Elecsys2010分析仪两种方法对IgE水平进行检测,并利用EP9-A2法对两种方法的检测结果一致性进行评价分析。结果研究证实,Access分析仪与Elec-sys2010分析仪对IgE的检测结果间存在良好相关性(r=0.997),两组结果间存在的偏差在误差允许范围内。结论在今后的血清检验工作中,若是严格按规程执行操作,在相同实验室的相同条件下可以采取上述两种方法检测相同的项目。