长链非编码RNA-AF289591调控SOST表达对成骨细胞分化的影响

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)-AF289591对间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSC)成骨分化的影响及其分子机制。方法收集骨质疏松症(osteoporosis,OP)患者以及健康人群的骨髓标本,通过lncRNA芯片分析hMSC中lncRNAs的表达,并通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,qPCR)验证lncRNA-AF289591在两类人群中的表达,ELISA检测骨髓组织中硬骨抑素(sclerostin)水平。分离hMSC并通过流式细胞技术进行细胞鉴定,qPCR检测hMSC骨形成相关基因COL、OPN、OCN表达以及SOST基因表达水平,试剂盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,免疫印迹法(Western blot)检测硬骨抑素和RUNX2蛋白表达水平,荧光素酶报告基因检测Wnt-1启动子活性。结果相比健康人群,OP患者骨髓组织中lncRNA-AF289591表达显著升高,伴随着SOST基因表达水平增加(P<0.05)。分离hMSC并通过流式细胞技术确定为阳性细胞(CD105、CD44和CD29表达百分率分别为99.9%、100%和99.8%),过表达lncRNA-AF289591后,抑制骨形成相关分子COL、OPN、OCN基因表达(P<0.05),降低ALP活性(P<0.05),促进SOST基因表达(P<0.05),抑制Wnt-1启动子活性以及减少RUNX2蛋白表达水平(P<0.05)。干扰lncRNA-AF289591表达后,结果与上述情况相反(P<0.05)。结论lncRNA-AF289591表达通过调控SOST基因表达而抑制hMSC成骨分化。