不明原因复发性流产患者血清lncRNA-KCNQ1OT1、miR-29a-3p及SOCS3mRNA水平的表达及其相关性

复发性流产是指与同一性伴侣在妊娠28周之前,连续2次及以上发生自然流产的情况,其病因复杂,至今仍有50%以上的复发性流产病因尚未明确,即不明原因复发性流产(URSA)^([1-2])。有研究表明URSA患者子宫蜕膜存在明显的炎症微环境,可以引起性激素紊乱,与URSA的发生及发展密切相关^([3])。细胞因子信号传导抑制因子3 (SOCS3)是一个具有多项调节功能的蛋白质分子,可以调节机体免疫炎症反应,能够促进滋养细胞和T细胞增殖分化,从而影响着复发性流产的发生和发展^([4-5])。

lncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-132-5p对帕金森病细胞损伤的保护机制

目的探究长链非编码RNA KCNQ1OT1(lncRNA KCNQ1OT1)靶向调控微小RNA-132-5p(miR-132-5p)对帕金森病细胞损伤的保护机制。方法SH-SY5Y细胞通过1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MMP+)诱导建立帕金森病细胞模型,检测SH-SY5Y细胞中lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达,验证lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p的调控关系。结果与Con组相比,MMP+组lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达量较高(P<0.05)。低表达lncRNA KCNQ1OT1、干扰miR-132-5p表达均可减轻MMP+诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激及炎性损伤,抑制细胞死亡,lncRNA KCNQ1OT1靶向正调控miR-132-5p表达,miR-132-5p过表达逆转了lncRNA KCNQ1OT1低表达对MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤及凋亡。结论lncRNA KCNQ1OT1通过靶向抑制miR-132-5p表达减轻了MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤,抑制了细胞凋亡。

Role of oncogenic long noncoding RNA KCNQ1OT1 in colon cancer

The role of lncRNA KCNQ1 opposite strand/antisense transcript 1(KCNQ1OT1)in colon cancer involves various tumorigenic processes and has been studed widely.However,the mechanism by which it promotes colon cancer remains unclear.Retrovirnl vector pSEB61 was retroftted in established HCT116 siKCN and SW480-siKCN cells to silence KCNQ1 OT1.Cellular proliferation was measured using CCK8 assay,and flow cytometry(FCM)detected cell cydle changes.RNA sequencing(RNA Seq)analysis showed differentially expressed genes(DEGs).Gene ontology(GO)and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)pathway enrichment analyses were carried out to analyze enriched functions and signaling pathways.RT-qPCR,immunofluorescence,and western blotting were carried out to validate downstream gene expressions.The effects of tumorigenesis were evaluated in BALB/c nude mice by tumor xenografts.Our data revealed that the silencing of KONQ1OT1 in HCT116 and SW480 cells slowed cell growth and decreased the number of cells in the G2/M phase.RNA-Seq analysis showed the data of DEGs enriched in various GO and KEGG pathways such as DNA replication and cell cyde.RT qPCR,immunofluorescence,and western blotting confirmed downstream CCNE2 and PCNA gene expressions.HCT116 siKCN cells signifcantly suppressed tumorigenesis in BALB/c nude mice.Our study suggests that lncRNA KCNQ1OT1 may provide a promising therapeutic strategy for colon cancer.

LncRNA SOX2OT靶向SIRT1/自噬通路增强胆管癌细胞5-FU耐药

目的探讨LncRNASOX2OT靶向SIRT1/自噬通路调节胆管癌细胞5-FU耐药的机制。方法将未用5-FU处理HCCC-9810细胞和不同浓度(50、100、150、200μg/mL)5-FU处理的HCCC-9810细胞分为对照组和模型组,qRT-PCR检测LncRNA SOX2OT、SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1、Beclin1、LC3和p62蛋白表达。pcDNA3.1-SOX2OT和pcDNA3.1-NC转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞,CCK-8检测细胞耐药性,划痕实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR检测LncRNASOX2OT、SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1、Beclin1、LC3和p62表达。在以上基础上做了Rescue实验,将OV-SOX2OT(2μg/孔)和si-NC(75pmol/孔)、OV-SOX2OT(2μg/孔)和si-SIRT1(75pmol/孔)分别共转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞,分组为OV-SOX2OT+si-NC组和OV-SOX2OT+si-SIRT1组,以证明LncRNASOX2OT通过SIRT1影响自噬,并由此影响胆管癌细胞对5-FU的耐药性。RNAPulldown验证SOX2OT与SIRT1的靶向结合关系。结果不同浓度的5-FU均能抑制HCCC-9810细胞增殖(P<0.05)。与对照组相比,模型组SIRT1、Beclin1(P<0.001)和p62(P<0.01)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(P<0.001)、SIRT1和LncRNA SOX2OT mRNA水平(P<0.05)均明显增加。与OV-NC组相比,OV-SOX2OT组细胞迁移能力、SIRT1、Beclin1(P<0.001)和p62(P<0.05)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(P<0.001)、SIRT1和LncRNASOX2OTmRNA(P<0.05)水平均明显增加。沉默SIRT1表达导致LncRNASOX2OT过表达的HCCC-9810细胞对5-FU的耐药性显著降低。与OV-SOX2OT+si-NC组相比,OV-SOX2OT+si-SIRT1组SIRT1(P<0.001)、p62和Beclin1(P<0.01)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(P<0.01)、SIRT1 mRNA(P<0.05)水平均明显降低。RNA Pulldown检测结果显示SOX2OT能够直接与SIRT1结合。结论LncRNA SOX2OT通过上调SIRT1表达促进自噬来增强胆管癌HCCC-9810细胞5-FU耐药性。

lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-129-5p调控帕金森病细胞模型炎症和细胞凋亡的实验研究

目的 探讨lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-129-5p调控帕金森病(PD)细胞模型炎症和细胞凋亡的机制。方法 体外培养人SK-N-SH细胞,用1、2、4 mmol/L MPP+处理SK-N-SH构建PD细胞损伤模型。将si-NC、si-lncRNA KCNQ1OT1、miR-NC、miR-129-5p、si-lncRNA KCNQ1OT1与anti-miR-NC、si-lncRNA KCNQ1OT1与anti-miR-129-5p分别转染至MPP+处理SK-N-SH构建PD细胞中,记为si-NC+MPP+组、si-lncRNA KCNQ1OT1+MPP+组、miR-NC+MPP+组、miR-129-5p+MPP+组、si-lncRNA KCNQ1OT1+anti-miR-NC+MPP+组、si-lncRNA KCNQ1OT1+anti-miR-129-5p+MPP+组。酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞TNF-α、IL-6、IFN-γ水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞lncRNA KCNQ1OT1和miR-129-5p表达情况;双荧光素酶报告实验检测lncRNA KCNQ1OT1和miR-129-5p的靶向关系。结果 与NC组比较,1、2、4 mmol/L MPP+组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著升高(P <0.05)。与NC组比较,1、2、4 mmol/L MPP+组细胞lncRNA KCNQ1OT1表达,其水平明显较高,而miR-129-5p表达,明显更低(P <0.05)。与si-NC+MPP+组比较,si-lncRNA KCNQ1OT1+MPP+组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著降低(P <0.05)。与miR-NC+MPP+组比较,miR-129-5p+MPP+组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著降低(P <0.05)。si-lncRNA KCNQ1OT1+anti-miR-129-5p+MPP+细胞凋亡、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著升高(P <0.05)。结论 lncRNA KCNQ1OT1下调miR-129-5p表达抑制PD细胞模型炎症和细胞凋亡。

宫颈癌患者组织中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平及其临床意义

目的探讨lncRNA KCNQ1OT1在宫颈癌组织及癌旁组织中的表达水平及临床意义。方法收集2017年9月至2018年9于我院行手术切除的83例宫颈癌患者的癌组织及癌旁组织,测定其lncRNA KCNQ1OT1的表达,术后对患者进行3年随访,并分析其与患者预后的关系。结果LncRNA KCNQ1OT1在宫颈癌组织中的相对表达量为(3.47±0.38),显著高于其在癌旁组织中的相对表达量(1.06±0.15),差异有统计学意义(t=3.798,P<0.05)。宫颈癌组织中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平与FIGO分期、组织分化程度、肿瘤浸润深度及淋巴结转移显著相关(χ^(2)值分别为6.181、3.927、9.863、4.571,P<0.05),与年龄和肿瘤直径无明显相关性(χ^(2)值分别为0.287和0.113,P>0.05)。LncRNA KCNQ1OT1高表达组宫颈癌患者的3年生存率为68.09%,显著低于lncRNA KCNQ1OT1低表达组的生存率(91.67%),差异有统计学意义(χ^(2)=6.675,P=0.010)。单因素分析显示FIGO分期、组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和lncRNA KCNQ1OT1水平均是影响患者预后的因素(HR值分别为2.671、1.771、2.459、2.664、2.175,P<0.05);Cox多因素回归分析后发现高FIGO分期、肿瘤浸润深度≥1/2肌层、发生淋巴结转移和lncRNA KCNQ1OT1高表达是影响患者预后的独立危险因素(HR值分别为1.736、2.146、2.168、1.884,P<0.05)。结论LncRNA KCNQ1OT1在宫颈癌组织中高表达,且与患者的预后相关。

miR-452、LncRNA KCNQ1OT1在肝癌组织中的表达情况及与预后间关系分析

目的探讨微小RNA(miR)-452、长链非编码RNA KCNQ1OT1(LncRNA KCNQ1OT1)在肝癌患者瘤组织中的表达情况及预后的关系。方法选取2017年9月至2021年6月邯郸市第一医院收治的肝癌患者92例作为研究对象。对比患者肝癌组织及癌旁组织miR-452、LncRNA KCNQ1OT1水平,随访至2022年2月,统计患者预后生存情况,Cox比例风险回归模型分析预后的影响因素,绘制不同miR-452、LncRNA KCNQ1OT1表达患者Kaplan-Meier生存曲线。结果肝癌组织miR-452、LncRNA KCNQ1OT1水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);患者1年、3年生存率分别为64.37%(56/87)、42.53%(37/87);校正原发疾病、临床分期、肿瘤最大径、肿瘤数量、分化程度、Child Pugh分级、合并肝硬化、血管侵犯后,miR-452及LncRNA KCNQ1OT1表达仍是肝癌患者预后的独立影响因素(P<0.05);拟合模型:h(t,X)=h0(t)exp(1.188X1+1.326X2),X1为miR-452,X2为LncRNA KCNQ1OT1,构建个体PI方程:PI=1.188X1+1.326X2;不同miR-452、LncRNA KCNQ1OT1表达患者生存曲线率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝癌患者组织miR-452、LncRNA KCNQ1OT1水平均呈异常高表达,且高表达情况与3年内高病死风险有关。

长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1重叠转录物1靶向抑制miR-628-5p在高糖诱导的视网膜色素上皮细胞损伤中的作用

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)靶向抑制miR-628-5p在高糖诱导的视网膜色素上皮细胞损伤中的作用。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测糖尿病视网膜病变(DR)、2型糖尿病(T2DM)、葡萄膜炎患者血清和房水KCNQ1OT1表达水平。用不同浓度葡萄糖处理人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19),并检测KCNQ1OT1表达情况,选择最佳作用浓度。将ARPE-19细胞分为对照组(CON组)、高糖组(HG组)、HG+抑制物对照(si-NC)组、HG+KCNQ1OT1抑制物(si-KCNQ1OT1)组、HG+模拟物对照(miR-NC)组、HG+miR-628-5p组、HG+si-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组、HG+si-KCNQ1OT1+anti-miR-628-5p组。RT-qPCR检测各组细胞KCNQ1OT1、miR-628-5p表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA检测各组细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot检测各组细胞活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验检测KCNQ1OT1、miR-628-5p靶向关系。结果血清和房水中KCNQ1OT1表达水平:DR患者>T2DM患者>葡萄膜炎患者(均为P<0.05)。ARPE-19细胞中KCNQ1OT1表达水平:0 mmol·L^(-1)葡萄糖组<5 mmol·L^(-1)葡萄糖组<15 mmol·L^(-1)葡萄糖组<30 mmol·L^(-1)葡萄糖组(均为P<0.05),故选择30 mmol·L^(-1)葡萄糖进行实验。与CON组比较,HG组细胞KCNQ1OT1表达水平、细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达、MDA含量均显著升高,SOD活性、miR-628-5p显著降低(均为P<0.05)。与HG+si-NC组比较,HG+si-KCNQ1OT1组细胞KCNQ1OT1表达水平、细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达、MDA含量均显著降低,SOD活性显著升高(均为P<0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-628-5P组细胞miR-628-5p、SOD活性均显著升高,细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达、MDA含量均显著降低(均为P<0.05)。与HG+si-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组比较,HG+si-KCNQ1OT1+anti-miR-628-5p组细胞miR-628-5p、SOD活性均显著降低,细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达、MDA含量均显著升高(均为P<0.05)。结论lncRNA KCNQ1OT1通过靶向抑制miR-628-5p可以减轻高糖诱导的ARPE-19细胞凋亡和氧化损伤。

慢性乙型肝炎患者血清β-catenin和lncRNA KCNQ1OT1表达及其在肝纤维化诊断中的应用价值

目的分析β-连环蛋白(β-catenin)、长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1OT1在慢性乙型肝炎患者血清中的表达变化及其在肝纤维化诊断中的应用价值。方法选取2020年1月—2021年1月空军军医大学第一附属医院消化内科收治慢性乙型肝炎患者90例,根据患者的肝纤维化程度分为无肝纤维化23例(S0组)、轻度肝纤维化42例(S1~S2组)、中重度肝纤维化25例(S3~S4组);另选取同期医院健康体检者30例为健康对照组。比较各组血清β-catenin、lncRNA KCNQ1OT1表达水平及肝纤维化指标;分析β-catenin、lncRNA KCNQ1OT1表达水平与肝纤维化程度及其指标的相关性;Logistic回归分析慢性乙型肝炎患者发生肝纤维化的影响因素;受试者工作特征曲线(ROC)分析血清β-catenin、lncRNA KCNQ1OT1水平对慢性乙型肝炎患者发生肝纤维化的预测价值。结果健康对照组、S0组、S1-S2组、S3-S4组血清β-catenin、lncRNA KCNQ1OT1水平依次升高(F/P=28.066/<0.001、25.173/<0.001);肝纤维化指标透明质酸(HA)、前胶原N端肽(PⅢP)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层黏连蛋白(LN)水平逐次升高(F/P=79.414/<0.001、119.630/<0.001、104.574/<0.001、96.631/<0.001)。血清β-catenin、lncRNA KCNQ1OT1水平均与肝纤维化程度呈显著正相关(r/P=0.598/0.001、0.643/0.009),血清β-catenin、lncRNA KCNQ1OT1水平与肝纤维化指标HA、PⅢP、CⅣ、LN呈显著正相关(β-catenin:r/P=0.483/0.016、0.456/0.013、0.641/0.006、0.519/0.008;lncRNA KCNQ1OT1:r/P=0.496/0.014、0.604/0.007、0.523/0.014、0.611/0.002)。血清β-catenin、lncRNA KCNQ1OT1、HA、PⅢP、CⅣ、LN升高是慢性乙型肝炎患者发生肝纤维化的危险因素[OR(95%CI)=1.564(1.205~2.030)、2.213(1.449~3.379)、1.816(1.261~2.615)、2.315(1.380~3.884)、1.564(1.161~2.107)、3.013(1.491~6.090)]。血清β-catenin、lncRNA KCNQ1OT1及二者联合预测慢性乙型肝炎患者发生肝纤维化的AUC为0.784、0.775、0.857,二者联合优于各自单独预测(Z/P=2.617/0.028、2.897/0.014)。结论慢性乙型肝炎患者血清β-catenin、lncRNA KCNQ1OT1水平与肝纤维化程度密切相关,二者联合检测对慢性乙型肝炎患者是否发生肝纤维化有较好参考价值。

LncRNA KCNQ1OT1调节miR-145/PAK4轴对结直肠癌SW480细胞恶性发展的影响

目的:探究LncRNA KCNQ1OT1在结直肠癌SW480细胞中的作用及其潜在的分子机制。方法:miRanda与TargetScan分别分析LncRNA KCNQ1OT1与miR-145的作用靶点。通过双荧光素酶报告基因实验验证相关的分子间靶标关系。qRT-PCR实验分析KCNQ1OT1、miR-145和PAK4在结直肠癌组织、癌旁组织、SW480细胞和CCC-HIE-2细胞中的基因表达量。将SW480细胞分为siRNA NC组、KCNQ1OT1 siRNA组、PAK4 siRNA组、inhibitor NC组、miR-145 inhibitor组、pcDNA-3.1(+)+mimics NC组、pcDNA-KCNQ1OT1+mimics NC组、pcDNA-3.1(+)+miR-145 mimics组、pcDNA-KCNQ1OT1+miR-145 mimics组,分别敲低KCNQ1OT1、miR-145和PAK4表达,MTT实验分析细胞活力,细胞克隆形成实验分析细胞克隆数目,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测SW480细胞EMT能力。结果:与癌旁组织相比(1.37±0.27),结直肠癌组织中LncRNA KCNQ1OT1表达上调(2.32±0.89)(t=23.84,P<0.01);与癌旁组织相比(1.21±0.09),结直肠癌组织中PAK4表达上调(2.03±0.54)(t=20.75,P<0.01);与癌旁组织相比(1.26±0.35),结直肠癌组织中miR-145表达显著下调(0.45±0.13)(t=18.76,P<0.01);与CCC-HIE-2细胞相比(1.05±0.21),SW480细胞中LncRNA KCNQ1OT1表达上调(2.09±0.27)(t=18.79,P<0.01);与CCC-HIE-2细胞相比(1.18±0.62),SW480细胞中PAK4表达上调(2.58±0.82)(t=22.17,P<0.01);与CCC-HIE-2细胞相比(1.46±0.28),SW480细胞中miR-145表达显著下调(0.58±0.23)(t=17.86,P<0.01)。LncRNA KCNQ1OT1靶向miR-145,miR-145靶向PAK4。KCNQ1OT1或PAK4表达降低后,SW480细胞活力,克隆数目与EMT能力显著降低,上调了细胞凋亡率;上调KCNQ1OT1靶向miR-145促进了SW480细胞增殖和EMT,下调了细胞凋亡率。结论:下调LncRNA KCNQ1OT1通过miR-145/PAK4轴抑制了SW480细胞增殖和EMT,促进了癌细胞凋亡。

KCNQ1OT1基因敲除联合鸦胆子素D对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨KCNQ1OT1基因敲除联合鸦胆子素D对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制。方法CCK8、划痕和Transwell侵袭实验分别检测鸦胆子素D和siKCNQ1OT1对MDA-MB-231细胞活力、迁移和侵袭能力的影响;qRT-PCR检测鸦胆子素D、siKCNQ1OT1对MDA-MB-231细胞中KCNQ1OT1表达的影响;Western blot法检测EMT相关蛋白及CDC42、p-MKK7、MKK7蛋白的表达情况。结果鸦胆子素D和si KCNQ1OT1处理的MDA-MB-231细胞活力、迁移和侵袭能力受到显著抑制,且二者联用时抑制作用更强(均P<0.05);鸦胆子素D处理后KCNQ1OT1在MDA-MB-231细胞中的表达下调(均P<0.05);鸦胆子素D联合si KCNQ1OT1处理组MDAMB-231细胞中CDC42、p-MKK7、N-c adherin和Vimentin的表达显著下调,E-cadherin的表达上调(均P<0.05)。结论鸦胆子素D联合si KCNQ1OT1抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,其分子机制可能与CDC42/MKK7信号通路的阻断有关。

lncRNA KCNQ1OT1通过miR-499a-5p/TXNIP调控缺氧心肌细胞活性和凋亡的机制

目的探讨长链非编RNA(lncRNA)、KCNQ1重叠转录物(KCNQ1OT)1对缺氧心肌细胞活性和凋亡的影响及分子机制。方法将心肌细胞随机分为对照(NC)组、缺氧预处理(HPC)组、si-NC+HPC组、si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组、miR-NC+HPC组、miR-499a-5p+HPC组、si-硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)+HPC组、pcDNA-NC+si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组、pcDNA-TXNIP+si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组;用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-499a-5p和TXNIP mRNA的表达水平;Western印迹法检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别检测MDA含量和细胞SOD活性;双荧光素酶报告实验检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-499a-5p、TXNIP之间的靶向关系。结果心肌梗死患者血清及缺氧诱导的心肌细胞中lncRNA KCNQ1OT1表达水平显著升高(P<0.05)。下调lncRNA KCNQ1OT1、下调TXNIP或上调miR-499a-5p后,心肌细胞H9C2中CyclinD1表达、细胞活性、SOD活性显著升高,Cleaved-caspase-3表达、细胞凋亡率、MDA含量显著降低(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1通过靶向miR-499a-5p调控TXNIP表达。过表达TXNIP可以逆转lncRNA KCNQ1OT1下调对缺氧诱导的心肌细胞H9C2的影响。结论下调lncRNA KCNQ1OT1可能通过miR-499a-5p/TXNIP轴抑制缺氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激,促进细胞存活。

LncRNA KCNQ1OT1在急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义

目的:探讨LncRNA KCNQ1OT1在急性髓系白血病(AML)患者中的表达,分析其与临床预后的相关性。方法:收集68例AML患者,其中48例急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者和20例达到完全缓解(complete response,CR)的AML患者及30例性别年龄相匹配的缺铁性贫血患者(作为对照组)的外周血液标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA KCNQ1OT1的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果:LncRNA KCNQ1OT1在AML患者中的表达较完全缓解者及缺铁性贫血患者均明显增高(F=14.67,P<0.001),而LncRNA KCNQ1OT1在20例AML-CR组患者与30例对照组患者中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。LncRNA KCNQ1OT1的表达与患者的NCCN风险分级及生存状态相关;高表达LncRNA KCNQ1OT1患者的中位总生存时间较低表达者明显缩短(P<0.05)。结论:LncRNA KCNQ1OT1参与调节AML的发生和发展,可作为AML患者潜在的预后标志物和治疗靶点。

lnc-KCNQ1OT1在胃癌组织和细胞中的表达及其临床意义

目的:探讨长链非编码RNA-KCNQ1OT1(lnc-KCNQ1OT1)在胃癌组织和细胞中的表达及临床意义。方法:收集2010年1月1日至2011年12月31日期间在哈尔滨医科大学附属肿瘤医院行手术治疗的163例胃癌患者的临床资料,选取组织和细胞通过RT-PCR法检测lnc-KCNQ1OT1的表达情况,根据其表达情况及临床病例数据分析lnc-KCNQ1OT1在胃癌组织和细胞中的临床意义。结果:与癌旁组织比较,lnc-KCNQ1OT1在胃癌组织中的表达水平明显增高(P <0. 05)。在胃癌细胞株HGC-27、MGC-803中,lncKCNQ1OT1表达水平较胃永生化上皮细胞株GES-1明显升高(P <0. 05)。单因素分析显示lnc-KCNQ1OT1的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小无关(P> 0. 05),与淋巴结转移(P <0. 001)明显相关。K-M生存分析显示胃癌患者中lnc-KCNQ1OT1高表达者预后不良(P <0. 05)。结论:在胃癌组织和细胞中lncKCNQ1OT1的表达量高,其高表达与胃癌患者淋巴结转移相关,并可导致胃癌患者预后不良。lnc-KCNQ1OT1可作为潜在的胃癌预后预测的分子标志物。

长链非编码RNA Kcnq1ot1对小鼠糖尿病心肌病的作用

目的研究长链非编码RNA Kcnq1ot1在糖尿病心肌病中的作用及机制。方法C57BL/6小鼠分为对照组和糖尿病(DM)组,注射链脲佐菌素建立DM模型后喂养8周建立糖尿病心肌病模型。DM组小鼠注射慢病毒干扰Kcnq1ot1表达。qRT-PCR检测小鼠左心室Kcnq1ot1表达。超声心动图、HE和Masson染色评价小鼠左心室结构和功能,Western blot检测collagenⅠ、Ⅲ和TGF-β1/Smads通路表达水平。免疫组化、qRT-PCR和Western blot检测左心室NLRP3、caspase-1、IL-1β和GSDMD-N表达。结果与对照组相比,Kcnq1ot1在DM小鼠左心室中明显升高,注射Kcnq1ot1-shRNA慢病毒后被抑制。DM组小鼠心脏收缩和舒张功能明显下降,出现心肌细胞肥大及纤维化;干扰Kcnq1ot1后DM小鼠心脏功能和结构明显改善。此外,干扰Kcnq1ot1后胶原表达下调,TGF-β1/Smads通路被抑制,焦亡相关分子表达下调。结论LncRNA Kcnq1ot1在糖尿病心肌病小鼠中表达升高,干扰Kcnq1ot1能够通过抑制心肌焦亡,抑制TGF-β1/Smads通路,减轻糖尿病心肌间质纤维化,改善心脏结构和功能。

LncRNA KCNQ1OT1通过调控miR-506-3p表达调节喉鳞状细胞癌细胞的生物学行为

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对喉鳞状细胞癌细胞生物学的影响及作用机制。方法于2019年5月至2020年2月,采用RT-qPCR法检测了45例来自山东大学齐鲁医院桓台分院喉鳞状细胞癌病人的癌组织和癌旁组织及购自上海研生实业有限公司的人胚肺成纤维细胞WI-38和购自中国科学院上海细胞库的喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1和miR-506-3p表达。以HCC345细胞为研究对象,转染KCNQ1OT1小干扰RNA或共转染KCNQ1OT1小干扰RNA与miR-506-3p抑制剂至HCC345细胞后,MTT法、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-506-3p的调控关系。结果喉鳞状细胞癌组织中KCNQ1OT1表达高于癌旁组织[(0.81±0.09)比(0.27±0.08)],miR-506-3p表达低于癌旁组织[(0.24±0.08)比(0.83±0.09)]。喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1表达均高于WI-38细胞[(2.44±0.22)、(2.69±0.21)、(3.61±0.24)比(1.00±0.13)],miR-506-3p表达均低于WI-38细胞[(0.41±0.13)、(0.30±0.12)、(0.22±0.11)比(1.00±0.12)]。与未敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞比较,敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞活力[(0.41±0.06)比(0.81±0.12)]、迁移数[(86.32±15.21)个比(162.31±20.23)个]和侵袭数[(65.23±12.05)个比(140.26±18.27)个]均降低,细胞凋亡率升高[(34.13±3.60)%比(3.79±2.37)%]。KCNQ1OT1在HCC345细胞中负调控miR-506-3p表达。敲减miR-506-3p逆转敲减KCNQ1OT1对HCC345细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论KCNQ1OT1在喉鳞状细胞癌组织和细胞系中表达升高,其通过靶向miR-506-3p促进喉鳞状细胞癌细胞的恶性生物学行为。

糖尿病肾病患者外周血LncRNA KCNQ1OT1表达与氧化应激水平及TGF-β1/p38MAPK通路的关系

目的探讨分析糖尿病肾病(DN)患者外周血长链非编码RNA(LncRNA)、电压门控钾通道亚家族Q1重叠转录物(KCNQ1OT)1表达与氧化应激水平及转化生长因子(TGF)-β1/p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)通路的关系。方法选择2型糖尿病患者162例,其中2型糖尿病合并DN患者75例作为DN组,其余单纯2型糖尿病患者87例作为DM组;选择同期医院健康体检人员80例作为对照组。采用qRT-PCR检测3组受试者外周血LncRNA KCNQ1OT1、TGF-β1、P38MAPK、半胱天冬酶(Caspase)-3 mRNA相对表达及血清氧化应激指标,分析LncRNA KCNQ1OT1表达与TGF-β1/p38MAPK通路及氧化应激指标相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA KCNQ1OT1对DN诊断价值。结果糖尿病患者外周血LncRNA KCNQ1OT1相对表达量显著高于对照组(P<0.05),其中DN组外周血LncRNA KCNQ1OT1相对表达量显著高于DM组(P<0.05)。糖尿病患者外周血TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.05),其中DN组外周血TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA相对表达量显著高于DM组(P<0.05)。糖尿病患者血清丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)显著高于对照组(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)显著低于对照组(P<0.05),其中DN组血清MDA、ROS显著高于DM组(P<0.05),DN组血清SOD显著低于DM组(P<0.05)。DN患者外周血LncRNA KCNQ1OT1表达与TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA、MDA、ROS呈显著正相关关系(P<0.05),外周血LncRNA KCNQ1OT1表达与SOD呈显著负相关关系(P<0.05)。采用ROC曲线分析2型糖尿病患者中LncRNA KCNQ1OT1对DN的诊断价值,ROC曲线下面积为0.875。结论DN患者可出现外周血LncRNA KCNQ1OT1异常表达,且其表达情况与患者氧化应激水平及TGF-β1/p38MAPK信号转导通路激活有关,LncRNA KCNQ1OT1对DN具有良好的诊断价值。

LncRNA KCNQ1OT1在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(Lnc RNA KCNQ1OT1)在卵巢癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法实时荧光定量PCR法检测卵巢癌组织、癌旁组织及细胞中Lnc RNA KCNQ1OT1表达,分析其表达与患者临床病理特征和预后的关系。通过转染si RNA下调Lnc RNA KCNQ1OT1的表达,检测细胞增殖和侵袭能力的变化。结果卵巢癌组织及细胞株中Lnc RNA KCNQ1OT1的表达水平显著高于正常卵巢上皮细胞及正常卵巢组织。高表达Lnc RNA KCNQ1OT1的患者的总生存期(P<0.001)和无进展生存时间(P<0.001)较低表达者缩短。Lnc RNA KCNQ1OT1的表达与FIGO分期、肿瘤分级和远处转移相关。下调Lnc RNA KCNQ1OT1的表达能够明显抑制细胞的增殖和侵袭。结论 Lnc RNA KCNQ1OT1参与了调节卵巢癌的发生、发展,可能作为卵巢癌患者预后的一个潜在生物标志物和治疗靶点。

非线性对流扩散方程的非协调EQ_1^(rot)元解的渐近展开

首先给出了发展型非线性对流扩散方程的非协调EQr1ot元的最优ε一致收敛性结果,并且根据Bram-ble-Hilbert引理得到了高精度的积分恒等式;最后得到了新的渐近展开式.

LncRNA KCNQ1OT1降表达对顺铂耐药卵巢癌细胞耐药性的影响及其作用机制

目的观察长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1OT1降表达对顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞耐药性的影响并分析其作用机制。方法选用SKOV-3人卵巢癌细胞,经DDP反复间歇冲击诱导法构建DDP耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP;以不同浓度DDP作用SKOV3、SKOV3/DDP细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况得到50%细胞生长的药物浓度(IC50)并计算SKOV3/DDP细胞耐药指数(RI);采用qRT-PCR法检测SKOV-3、SKOV3/DDP细胞中的KCNQ1OT1。将SKOV3/DDP细胞分为三组,KCNQ1OT1降表达组和转染对照组中分别转染KCNQ1OT1 siRNA、NC-siRNA 48 h,对照组不转染,采用qRT-PCR法检测KCNQ1OT1观察转染效果;以不同浓度DDP作用各组细胞,以CCK-8法检测细胞增殖情况得到IC50并计算RI观察耐药性变化;取转染后的三组细胞,采用流式细胞术检测细胞周期,Western blotting法检测细胞p-AKT、p-mTOR蛋白。结果DDP对SKOV-3、SKOV-3/DDP细胞IC50分别为1.224、4.920μg/mL,SKOV-3/DDP细胞RI为4.020。与SKOV-3细胞比较,SKOV-3/DDP细胞KCNQ1OT1表达量增高(P<0.05)。KCNQ1OT1降表达组细胞中KCNQ1OT1表达量均低于转染对照组及对照组(P均<0.05),转染对照组与对照组间差异无统计学意义。随DDP浓度增加,各组细胞增殖抑制率均升高(P均<0.05);在相同DDP浓度下,KCNQ1OT1降表达组细胞增殖抑制率均高于转染对照组和对照组(P均<0.05)。DDP对KCNQ1OT1降表达组细胞IC50为3.613μg/mL,RI为0.734;DDP对转染对照组、对照组细胞IC50分别为9.737、8.461μg/mL,RI分别为1.979、1.720。与转染对照组和对照组比较,KCNQ1OT1降表达组G0/G1期细胞比例、p-mTOR蛋白表达量升高,S期和G2/M期细胞比例、p-AKT蛋白表达量降低(P均<0.05);转染对照组与对照组各期细胞比例及p-AKT、p-mTOR蛋白表达量差异均无统计学意义。结论干扰KCNQ1OT1表达可有效逆转卵巢癌细胞对DDP的耐药,其机制可能与阻滞耐药细胞于G0/G1期并调控AKT/mTOR信号通路活性有关。