表面活性素、杆菌霉素L、罗克霉素和泛革素4种脂肽类抗生素高效制备方法及其生物学活性

【目的】建立一种从枯草芽胞杆菌中高效快速制备4种脂肽类抗生素的方法,初步阐明制备脂肽类抗生素的生物学活性。【方法】通过构建脂肽类抗生素突变株,采用酸沉淀、有机溶剂抽提和固相萃取的方法从枯草芽胞杆菌Bs916及其突变株的发酵液中提纯表面活性素、杆菌霉素L、泛革素和罗克霉素4种脂肽类抗生素;运用HPLC-MS、SDS-PAGE电泳对制备脂肽类抗生素的纯度进行检测;最后采用西瓜枯萎病菌、金黄色葡萄球菌和绵羊血红细胞测定4种脂肽类抗生素的抗真菌、抗细菌和溶血活性。【结果】蛋白凝胶电泳和液相色谱联用质谱检测结果表明,制备的脂肽类抗生素均达到了电泳纯和色谱纯;生物活性分析实验结果表明,表面活性素和杆菌霉素L具有较强的溶血活性,泛革素和罗克霉素的溶血活性较弱,杆菌霉素L和泛革素具有较强的抗真菌活性,而表面活性素和罗克霉素具有较强的抗细菌活性。【结论】建立快速从芽胞杆菌中提纯4种脂肽类抗生素色谱方法,测定了4种脂肽类化合物的生物活性,为进一步探究脂肽类抗生素的构效关系、生物合成和开发应用奠定基础。

新环脂肽罗克霉素操纵子中的启动子活性研究

利用生物信息学和启动子连接报告基因方法阐明罗克霉素的启动子活性和转录因子作用区域,并对ploc启动子区域序列可能存在的调控蛋白进行生物学分析和预测。生物信息学分析发现ploc启动子可能存在11个调控蛋白(SigE、ResD、SpoⅢD、SigB、DegU、SigX、Spo0A、Hpr、AbrB、SigH、GerE)的结合位点。通过比较16个重组和对照菌株Bs916之间木聚糖酶活的差异,当切除启动子ResD和Hpr两个调控因子预测结合位点时,木聚糖酶活下降较明显;切除SpoⅢD和Spo0A调控因子预测结合位点时,木聚糖酶上升较明显。ResD及Hpr这两个蛋白调控因子在ploc启动子中起关键性的正调控作用;SpoⅢD和SpoAⅡ这两个蛋白调控因子在ploc启动子中起非常关键的负调控作用。对其分子调控机理及关键调控蛋白调控罗克霉素合成的具体作用方式需要进一步探索。