长链非编码RNA Beta2.7通过上调eNOS/NO通路影响内皮细胞功能

目的探索在内皮细胞中调控内皮型—氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)表达及其磷酸化的长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)分子及其对内皮细胞功能的影响。方法培养原代小鼠主动脉内皮细胞,构建LncRNA-Beta2.7过表达质粒、LincRNA-p21干扰质粒、LncRNA-ANRIL干扰质粒、LncRNA-H19过表达质粒,通过慢病毒载体实现稳定转染。稳定转染后,收集内皮细胞及其培养基上清,PCR检测eNOSmRNA表达水平,Western blot检测eNOS、p-eNOS表达水平,还原比色法检测细胞内及培养基上清的NO含量;稳定转染的内皮细胞通过划痕实验和小管形成实验验证LncRNA对内皮细胞功能的影响。结果过表达LncRNA-Beta2.7上调内皮细胞eNOSmRNA与蛋白的表达水平,且p-eNOS/eNOS比值保持不变;过表达LncRNA-Beta2.7后,内皮细胞NO分泌增多,其划痕愈合速率以及在形成血管过程中的分支数和小管总长度均显著升高。而其余3种LncRNA的作用并不显著。结论LncRNA-Beta2.7在内皮细胞中通过上调eNOS的表达激活eNOS/NO信号通路,增强血管内皮功能。