白癜风患者血清LncRNA MALAT1及miR-211-5p表达水平与临床特征的相关性分析

目的探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(long non-coding RNA metastasis associated transcription factor 1 in lung adenocarcinoma,Lnc RNA MALAT1),微小核糖核酸(micro RNA,miR)-211-5p表达水平变化与临床特征的相关性。方法选取2022年1~6月河北省沧州中西医结合医院皮肤科收治的白癜风患者80例为研究对象(白癜风组),同期于该院进行体检的健康者80例为对照组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)法检测受试者血清中Lnc RNA MALAT1,mi R-211-5p表达水平;两组间比较采用独立样本t检验;多组间(不同临床分期、临床分型、皮损面积及病程)比较进行单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q检验;白癜风患者皮损面积及病程与血清中Lnc RNA MALAT1和mi R-211-5p表达水平的相关性采用Pearson法分析。结果白癜风组患者血清Lnc RNA MALAT1(1.90±0.25)表达水平高于对照组(1.02±0.13),血清mi R-211-5p(0.53±0.07)表达水平低于对照组(1.05±0.10),差异均有统计学意义(t=27.933,38.103,均P=0.000)。进展期及快速进展期血清Lnc RNA MALAT1水平均高于稳定期(2.29±0.42,2.47±0.31 vs 1.54±0.12),差异有统计学意义(t=15.000,16.766,均P<0.001)。血清mi R-211-5p水平均低于稳定期(0.28±0.09,0.22±0.06 vs 0.74±0.11),差异有统计学意义(t=24.748,25.217,均P<0.001)。寻常型血清Lnc RNA MALAT1(2.06±0.26)表达水平高于节段型(1.50±0.16),寻常型血清mi R-211-5p(0.39±0.11)表达水平低于节段型(0.86±0.21),差异有统计学意义(t=9.768,13.127,均P<0.001)。泛发型血清Lnc RNA MALAT1相对表达水平高于肢端型、局限型及散发型(2.59±0.38 vs 2.02±0.19,1.98±0.44,1.89±0.30),差异有统计学意义(t=5.559,6.038,7.375,均P<0.001)。血清mi R-211-5p水平低于肢端型、局限型及散发型(0.17±0.04 vs 0.39±0.09,0.43±0.11,0.45±0.10),差异有统计学意义(t=7.651,9.177,10.520,均P<0.001)。皮损面积<1%,1%~50%和>50%的白癜风患者血清Lnc RNA MALAT1表达水平依次升高(1.69±0.19,1.92±0.21,2.56±0.26),差异有统计学意义(t=6.424,17.408,12.312,均P<0.001);皮损面积<1%,1%~50%和>50%的白癜风患者血清mi R-211-5p表达水平依次升高(0.70±0.09,0.41±0.10,0.21±0.03),差异有统计学意义(t=18.972,22.964,9.012,均P<0.001)。Pearson相关性分析显示,白癜风患者血清Lnc RNA MALAT1与皮损面积呈正相关(r=0.576,P<0.001),血清mi R-211-5p与皮损面积呈负相关(r=-0.475,P<0.001)。病程<1年、1~3年和>3年的白癜风患者血清Lnc RNA MALAT1表达水平依次降低(1.65±0.18,1.88±0.22,2.48±0.23),差异有统计学意义(t=5.984,20.581,13.291,均P<0.001);病程<1年、1~3年、>3年的白癜风患者血清mi R-211-5p表达水平依次降低(0.68±0.11,0.53±0.10,0.21±0.04),差异有统计学意义(t=8.352,24.942,15.170,均P<0.001)。Pearson相关性分析表明,血清Lnc RNA MALAT1与病程呈正相关(r=0.344,P<0.001),血清mi R-211-5p与病程呈负相关(r=-0.433,P<0.001)。结论白癜风患者血清中Lnc RNA MALAT1表达上调,mi R-211-5p表达下调,且与皮损面积及病程等临床特征显著相关。

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1表达影响裸鼠骨肉瘤增殖的病理改变

目的探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(MALAT-1)表达对裸鼠皮下植入的骨肉瘤增殖和病理学形态的影响。方法使用慢病毒感染构建MALAT-1稳定低表达的骨肉瘤U2OS细胞系,qPCR法验证MALAT-1表达的改变。将12只4~6周龄的雄性裸鼠随机平均分为实验组和对照组,实验组皮下植入MALAT-1稳定低表达的骨肉瘤U2OS细胞,对照组皮下植入空载慢病毒处理的骨肉瘤U2OS细胞。分别在植入后第3、6、9、12、15、18、21天测定并记录两组裸鼠皮下骨肉瘤的体积。植瘤后第21天处死裸鼠,完整取出骨肉瘤称重,通过H-E染色观察骨肉瘤病理学形态,免疫组织化学染色观察增殖细胞核抗原(PCNA)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果与对照组相比,实验组的肿瘤生长更慢,植瘤21 d后的体积、质量均小于对照组(P均<0.01)。H-E染色结果显示,实验组肿瘤基质成分增多,肿瘤细胞密集程度降低。免疫组织化学染色结果显示,实验组PCNA阳性染色积分光密度(IOD)中位数为8531.03、阳性细胞占比为29.3%(1758/6000),对照组IOD中位数为27548.23、阳性细胞占比为56.5%(3392/6000),实验组PCNA表达程度较对照组下降,差异均有统计学意义(P均<0.05);实验组VEGF阳性染色IOD为18179.490±18299.433、阳性细胞占比为51.0%(3063/6000),对照组IOD为15850.632±9341.063、阳性细胞占比为50.0%(3001/6000),两组VEGF表达程度差异无统计学意义(P均>0.05)。结论抑制骨肉瘤中长链非编码RNA MALAT-1的表达可以延缓肿瘤的生长,降低肿瘤的侵袭性,促进实体瘤中肿瘤细胞的坏死。

长链非编码RNA MALAT1对氧糖剥夺/复氧诱导的人脑微血管内皮细胞血管生成的影响

目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1 (MALAT1)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)血管生成的影响,并阐明其潜在的分子机制。方法:采用生物信息学方法预测MALAT1、不均一核糖核蛋白K (hnRNPK)和血管内皮生长因子A (VEGFA)的结合位点。HBMECs进行OGD/R处理构建脑缺血细胞模型,分为对照组、OGD/R模型组、OGD/R+siNC组、OGD/R+沉默MALAT1 (OGD/R+siMALAT1)组和OGD/R+siMALAT1+过表达VEGFA (OGD/R+siMALAT1+VEGFA)组。采用小干扰RNA (siRNA)沉默MALAT1的表达,采用pcDNA载体构建VEGFA过表达载体,将构建的siMALAT1和pcDNA VEGFA载体分别或同时转染至HBMECs中。利用管形成实验检测各组细胞血管形成能力,Western blotting法检测各组细胞中VEGFA蛋白表达水平。6周龄健康雄性C57BL/6 J小鼠20只,随机分为假手术组、大脑中动脉闭塞(MCAO)模型组、MCAO+NC空载体(MCAO+NC)组和MCAO+过表达MALAT1 (MCAO+MATAL1)组,每组5只,除假手术组外,其余各组小鼠利用线栓法构建MCAO小鼠模型,MCAO+NC组和MCAO+MATAL1组小鼠右脑室内分别注射NC空载体和MALAT1过表达载体。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组小鼠脑梗死面积百分率,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中VEGFA蛋白表达水平。结果:生物信息学预测,MALAT1与hnRNPK及hnRNPK与VEGFA均存在结合位点。管形成实验和Western blotting法检测,与对照组比较,OGD/R模型组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与OGD/R模型组比较,OGD/R+siMALAT1组细胞成管数明显减少(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与OGD/R+siMALAT1组比较,OGD/R+siMALAT1+VEGFA组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。在MCAO模型小鼠实验中,TTC染色和Western blotting法检测,与假手术组比较,MCAO模型组小鼠脑梗死面积百分率和脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与MCAO模型组比较,MCAO+MALAT1组小鼠脑梗死面积百分率明显降低(P<0.01),脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:LncRNA MALAT1可增强靶基因VEGFA的稳定性并上调其表达,进而促进缺血性脑卒中小鼠的脑血管生成,为缺血性脑卒中的治疗提供了新的思路。

LncRNA-MALAT1通过miR-142-3p/TEAD1分子轴调控结直肠癌细胞增殖与凋亡

目的探讨长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录子1(LncRNA-MALAT1)对结直肠癌细胞增殖与凋亡的影响及相关作用机制。方法通过Real-time PCR与Western blot实验检测结直肠癌细胞株与人正常结肠上皮细胞中LncRNA-MALAT1、miR-142-3p基因以及TEA结构域转录因子1(TEAD1)蛋白的表达;使用si-MALAT1转染HCT116细胞,在此基础上共转染miR-142-3p inhibitor,利用Real-time PCR与Western blot检测细胞中LncRNAMALAT1与miR-142-3p基因以及TEAD1、Bax、Bcl-2与Cyclin D1蛋白的表达,通过CCK-8实验检测细胞的增殖水平,通过流式细胞术检测细胞的凋亡水平,通过双荧光素酶实验检测LncRNA-MALAT1与miR-142-3p以及miR-142-3p与TEAD1的结合。结果与人正常结肠上皮细胞相比,结直肠癌细胞株中LncRNA-MALAT1基因与TEAD1蛋白呈高表达,miR-142-3p基因呈低表达(P<0.05);沉默LncRNA-MALAT1能够促进miR-142-3p基因与Bax蛋白表达,抑制LncRNA-MALAT1基因以及Bcl-2、Cyclin D1与TEAD1蛋白表达,抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡;在此基础上沉默miR-142-3p能够对上述调控作用实现部分逆转;双荧光素酶实验结果显示,LncRNA-MALAT1与miR-142-3p以及miR-142-3p与TEAD1能够结合。结论 LncRNA-MALAT1能够结合miR-142-3p,促进miR-142-3p靶基因TEAD1表达,进而促进结直肠癌细胞增殖,抑制其细胞凋亡,促进结直肠癌的病理进程。

lncRNA-MALAT1基于p-PI3K/p-AKT通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响

目的探究血浆长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,lncRNA-MALAT1)基于磷酸化-磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)/磷酸化-苏氨酸蛋白激酶(phosphorylated threonine-protein kinase,p-AKT)通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法将培养的U87脑胶质瘤细胞分为脑胶质瘤组、空白组和转染组。采用PCR法检测lncRNA-MALAT1表达量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT检测细胞增殖率,Transwell检测细胞侵袭,Western blot法检测p-PI3K/p-AKT通路相关蛋白、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)蛋白水平。结果与脑胶质瘤组相比,空白组、转染组lncRNA-MALAT1表达量较低;与空白组相比,转染组lncRNA-MALAT1表达量较低。与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞凋亡率较高;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞增殖率较低;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞侵袭个数较少;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组p-PI3K/p-AKT通路相关蛋白表达量较低;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组MMP2、MMP9蛋白表达量较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA-MALAT1可有效降低p-PI3K/p-AKT信号通路相关蛋白的表达,继而有效抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭,促进胶质瘤细胞的凋亡,降低MMP2、MMP9蛋白的表达量。

缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生

背景:既往研究发现缺氧预处理能够提高骨髓间充质干细胞生存和改善其移植治疗效率,且此效应主要由缺氧诱导因子1α(hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)介导,但下游机制未明。目的:体外观察缺氧预处理对骨髓间充质干细胞生存和血管再生能力的影响,探讨HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路在其中的调控作用。方法:将体外培养的骨髓间充质干细胞分为缺氧实验组(体积分数为1%O2)和常氧对照组(体积分数为20%O2),培养24 h后检测细胞增殖、凋亡以及血管形成情况以及HIF-1α、MALAT1和VEGFA的表达;在此基础上,分别采用相应的siRNA抑制HIF-1α以及MALAT1的表达,以HIF-1αsiRNA scramble和MALAT1 siRNA scramble作为阴性对照,再进行缺氧预处理,检测并比较各组通路因子的表达变化。结果与结论:①与常氧对照组相比,缺氧实验组细胞生存力明显增强,凋亡比例显著减少,血管管腔样结构明显增多(P<0.01),HIF-1α、MALAT1和VEGFA的表达均明显增高(P<0.01);②在抑制HIF-1α的基础上进行缺氧预处理,MALAT1和VEGFA表达均明显下降(P<0.01);而抑制MALAT1后,VEGFA的表达亦显著降低(P<0.01);③结果表明,缺氧预处理能够通过激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生。

长链非编码RNA在喉癌中的研究进展

喉癌是较常见的恶性肿瘤之一,目前的治疗手段大多会影响患者的生存质量,如何尽早发现并治疗该疾病是当前面对的重要难题。如长链非编码RNA(LncRNA),广泛存在于细胞间质与细胞器中,其长度为200~1 000 bp,可以在特定的生理状态和生物过程中表达,参与遗传修饰的调控,LncRNA在转录和转录后水平参与了细胞的发生、发展过程,部分LncRNA也可作为喉癌早期诊断指标或评价喉癌预后的标志物。因此,LncRNA可作为肿瘤治疗新的靶点,并有助于为患者预后做出准确判断。

MTT比色法检测苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖、MALAT1、HOTAIR及UCA1的影响

目的探讨噻唑蓝(MTT)比色法检测苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖、肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)、长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)基因及尿路上皮癌相关1(UCA1)的影响。方法按MTT法的相关操作原则与相关流程提取膀胱癌患者的苦瓜MAP30蛋白后进行克隆、表达及纯化处理,接着提取其处理膀胱癌5637细胞并进行MTT检测。探析苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖和对MALAT1、HOTAIR及UCA1表达的相关性。结果抑制率:膀胱癌5637细胞增殖时所产生的抑制率越高时,MAP30蛋白浓度也越高,且时间越长,即MAP30蛋白浓度与膀胱癌5637细胞增殖呈正比(P<0.05)。凋亡率:膀胱癌5637细胞凋亡随MAP30浓度递增而逐渐上升,且MAP30浓度(培养48 h)为400μg/mL时,膀胱癌5637细胞凋亡率达到最高,MAP30浓度与膀胱癌5637细胞凋亡呈正比(P<0.05)。膀胱癌5637细胞lncRNA MALAT-1、HOTAIR、UCA1表达水平随苦瓜MAP30蛋白浓度的递增而逐渐降低,检测时间为48 h且苦瓜MAP30蛋白浓度为400μg/mL时上述三项指标的表达水平均显著低于48、24 h的其他苦瓜MAP30蛋白浓度(P<0.05)。结论苦瓜MAP30蛋白对膀胱癌5637细胞增殖的抑制和凋亡诱导方面有较好的效果,且可下调MALAT-1、HOTAIR、UCA1表达水平。

高体积分数氧暴露下新生早产大鼠肺组织长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1和核转录相关因子-2表达变化的意义

目的观察高体积分数氧（高氧）暴露下新生早产大鼠肺组织的长链非编码RNA（lncRNA）转移相关肺腺癌转录本1（MALAT1）和核转录相关因子－2（Nrf2）的动态表达，探讨MALAT1和Nrf2的表达变化在高氧肺损伤中的作用。方法孕21 d SD大鼠行剖宫产，80只早产大鼠喂养24 h后按随机数字表法分为空气组和高氧组。空气组早产大鼠置于室内空气中饲养[吸入氧体积分数（FiO2）＝210 mL/L]，高氧组早产大鼠置于常压氧箱（FiO2〉850 mL/L）中饲养，2组新生早产大鼠分别于空气或高氧暴露后第1、4、7、10、14天处死并收集肺组织标本。采用苏木精－伊红染色法观察新生早产大鼠肺组织病理变化；采用实时定量聚合酶链反应（qPCR）及Western blot技术分别检测MALAT1、Nrf2的RNA和蛋白表达水平。结果与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织肺泡化程度降低，辐射状肺泡计数（RAC）在第1天减少，但差异无统计学意义（P〉0.05），第4天[（3.14±0.23）个]、第7天[（5.25±0.38）个]、第10天[（4.41±0.44）个]、第14天[（3.41±0.13）个]均显著减少，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织中MALAT1的RNA相对表达量在第1天（0.527±0.124）显著减弱，第4天（0.538±0.128）、第7天（0.748±0.071）均显著增强，第10天（0.519±0.081）显著减弱，差异均有统计学意义（均P〈0.05），第14天时减弱，但差异无统计学意义（P〉0.05）。与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织中Nrf2 mRNA的表达在第1天（0.791±0.031）显著减弱，第4天（0.977±0.189）、第7天（1.369±0.100）、第10天（1.094±0.104）均显著增强，差异均有统计学意义（均P〈0.05），第14天表达减弱，但差异无统计学意义（P〉0.05）。与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织中游离态Nrf2蛋白在各时间点表达均增强，Nrf2－Keap1结合型蛋白在各时间点表达均减弱。高氧作用下，MALAT1表达与RAC、Nrf2均呈正相关（r＝0.517、0.533，均P〈0.001）。结论肺组织损伤程度随高氧暴露时间延长逐渐加重，MALAT1表达与肺损伤程度及Nrf2水平具有相关性，提示MALAT1与Nrf2相关信号通路可能共同参与新生早产大鼠高氧肺损伤的发病过程。

肺炎支原体肺炎患儿血清中lncRNA MALAT1和lncRNA GAS5表达与病情严重程度及预后的相关性分析

目的 探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清中长链非编码RNA肺癌转移相关转录本1(lncRNA MALAT1)和长链非编码RNA生长抑制特异因子5(lncRNA GAS5)表达水平及其与病情严重程度和预后的相关性。方法 选择2019年6月-2022年2月本院收治的MPP患儿113例作为观察对象,根据病情将其分为轻症组(65例)和重症组(48例),根据预后将其分为预后良好组(86例)和预后不良组(27例)。另选取同期健康体检儿童110例作为对照组。对MPP患儿进行临床肺部感染评分(CPIS),并检测血清lncRNA MALAT1、lncRNA GAS5、TNF-α、CRP、PCT水平,采用Pearson法分析MPP患儿血清lncRNA MALAT1、lncRNA GAS5水平与TNF-α、CRP、PCT水平及CPIS评分相关性,采用ROC曲线分析血清lncRNA MALAT1、lncRNA GAS5对重症MPP的诊断价值。结果 与对照组[(1.01±0.15)、(16.35±5.46)ng/L、(2.98±0.81)mg/L、(0.35±0.11)ng/mL、(1.05±0.13)]比较,MPP患儿血清lncRNA MALAT1(2.35±0.42)、TNF-α[(42.71±8.43)ng/L]、CRP [(15.34±3.56)mg/L]、PCT [(0.35±0.11)ng/mL]水平显著升高(均P<0.01),lncRNA GAS5(0.65±0.10)表达水平显著降低(P<0.01);与轻症MPP患儿[(2.06±0.38)、(38.86±7.69)ng/L、(11.36±2.89)mg/L、(7.35±2.28)ng/mL、(5.31±0.73)分、(0.70±0.08)]比较,重症MPP患儿血清lncRNA MALAT1(2.74±0.35)、TNF-α[(47.92±8.15)ng/L]、CRP [(20.73±3.47)mg/L]、PCT [(12.03±2.61)ng/mL]水平及CPIS评分[(7.25±0.92)分]显著升高(均P<0.01),lncRNA GAS5(0.58±0.09)表达水平显著降低(P<0.01)。相关性分析显示,MPP患儿血清lncRNA MALAT1水平与TNF-α、CRP、PCT水平及CPIS评分呈正相关(均P<0.01),lncRNA GAS5水平与TNF-α、CRP、PCT水平及CPIS评分呈负相关(均P<0.01);血清lncRNA MALAT1、lncRNA GAS5联合诊断重症MPP的AUC为0.921(95CI%=0.851~0.961,P<0.01),敏感度为89.58%,特异度为78.46%。与预后良好组比较,预后不良组MPP患儿血清lncRNA MALAT1水平与TNF-α、CRP、PCT水平显著升高(均P<0.01),lncRNA GAS5表达水平显著降低(P<0.01)。结论 MPP患儿血清中lncRNA MALAT1高表达,lncRNA GAS5低表达,两者表达水平变化均与患儿疾病严重程度及预后有关,可作为MPP患儿病情与预后评估的标志物。