lncRNA NEAT1降表达人喉鳞状细胞癌细胞增殖凋亡变化及与miR-214靶向关系

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)降表达的人喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞增殖凋亡变化,探讨其与微小RNA-214(miR-214)的靶向关系。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人永生化表皮细胞Hacat和人LSCC细胞系(FD-LSC-1、Hep-2、TU177)中lncRNA NEAT1、miR-214,选择TU177细胞为受试细胞。取对数生长期TU177细胞,分为甲、乙组,分别转染si-lncRNA NEAT1(敲低lncRNA NEAT1表达)、si-NC(乱序无意义序列),培养至24 h时采用CCK8法观察两组细胞增殖情况、采用平板克隆形成实验观察两组细胞克隆形成情况、采用流式细胞术观察两组细胞周期和细胞凋亡情况、采用RT-qPCR法检测两组细胞lncRNA NEAT1及miR-214。另取对数生长期TU177细胞,分为一二三四组,一组顺序转染WT-lncRNA NEAT1、miR-214 mimic,二组顺序转染WT-lncRNA NEAT1、miR-NC,三组顺序转染MUT-lncRNA NEAT1、miR-214 mimics,四组顺序转染MUT-lncRNA NEAT1、miR-NC。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NEAT1及miR-214的靶向关系。结果与乙组相比,培养24、48、72 h时甲组TU177细胞OD值低,培养14 d时甲组TU177细胞克隆形成数少,甲组TU177细胞G0/G1期细胞比例高、S期细胞比例低,细胞凋亡率高(P均<0.05);与乙组相比,转染24 h时甲组TU177细胞lncRNA NEAT1相对表达量低、miR-214相对表达量高(P均<0.05)。培养48 h时一、二、三、四组TU177细胞细胞荧光素酶活性分别为0.63±0.08、0.99±0.01、1.02±0.02、0.98±0.03,与二组相比,一组细胞荧光素酶活性低(P<0.05)。结论敲低lncRNA NEAT1表达可抑制TU177细胞的增殖和克隆,阻滞细胞周期于G0/G1期,并促进细胞的凋亡。TU177细胞中lncRNA NEAT1与miR-214靶向相关。lncRNA NEAT1可能通过与miR-214靶向结合,抑制TU177细胞的增殖克隆,阻滞细胞周期于G0/G1期,促进细胞的凋亡。

胃癌患者血清lncRNA NEAT1的表达及其意义

目的检测胃癌患者外周血清中长链非编码RNA核富集转录本(NEAT)1的相对表达水平,探讨其应用于胃癌辅助诊断的可能性。方法选取2017年11月至2019年12月南通市肿瘤医院收治的胃癌初诊患者101例为胃癌组,胃良性病变患者60例为胃良性病变组,以及同期体检健康者76例为对照组。分别检测各组血清标本中lncRNA NEAT1相对表达水平和癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)水平,分析lncRNA NEAT1与临床病理参数的相关性,并用受试者工作特征(ROC)曲线评价lncRNA NEAT1、CEA、CA19-9单独及联合应用时的诊断效能。结果胃癌组、胃良性病变组及对照组血清中lncRNA NEAT1的相对表达水平分别为2.163(1.357,2.843)、1.176(0.677,1.381)、1.063(0.570,1.308),组间比较差异有统计学意义(H=52.467,P<0.001)。胃癌患者血清lncRNA NEAT1相对表达水平与患者性别(P=0.353)、年龄(P=0.382)无关,而与肿瘤最大径(P=0.031)、TNM分期(P=0.037)及淋巴结转移(P=0.046)有关。胃癌患者血清中lncRNA NEAT1相对表达水平与CEA、CA19-9均无相关性(P>0.05)。ROC曲线结果显示,lncRNA NEAT1诊断胃癌的曲线下面积和灵敏度均高于CEA、CA19-9单独诊断,三者联合诊断时效能最高。结论胃癌患者外周血lncRNA NEAT1相对表达水平升高,且与部分临床病理参数相关,lncRNA NEAT1有望成为胃癌辅助诊断新的标志物。

长链非编码RNA核富集转录本1对瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和迁移的影响

背景:已有研究阐明核富集转录本1(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)下调抑制了瘢痕成纤维细胞的进展,但具体机制尚不完全清楚。目的:探讨长链非编码RNA NEAT1调节miR-136-5p/泛素特异性蛋白酶4(ubiquitin specific protease 4,USP4)轴对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响。方法:将瘢痕成纤维细胞分为5组:si-NC组、空白对照组、si-NEAT1组、si-NEAT1+miR-136-5p inhibitor组、si-NEAT1+inhibitor-NC组,qRT-PCR检测NEAT1、miR-136-5p表达;CCK-8法及EDU染色检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;划痕愈合实验检测细胞迁移情况;Western blot检测USP4、p27、Bax、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达;双荧光素酶实验检测NEAT1与miR-136-5p、miR-136-5p与USP4的关系。结果与结论:①与si-NC组比较,si-NEAT1组NEAT1表达、A450值、EDU阳性细胞百分比、划痕愈合率以及USP4、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达降低(P<0.05),miR-136-5p表达、细胞凋亡率及p27、Bax蛋白表达升高(P<0.05);②miR-136-5p inhibitor逆转了沉默NEAT1对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响;③miR-136-5p与NEAT1、miR-136-5p与USP4存在靶向调控关系。结果表明,沉默NEAT1可能通过调控miR-136-5p/USP4轴抑制瘢痕成纤维细胞的增殖和迁移,诱导其凋亡。

血清LncRNA NEAT1、TFF1在视网膜母细胞瘤中的表达及预后评估价值

目的分析视网膜母细胞瘤(Rb)患儿血清长链非编码RNA核内富集转录物1(LncRNA NEAT1)、三叶因子1(TFF1)表达及预后评估价值。方法选取2018年1月—2021年1月首都医科大学附属北京安贞医院南充医院眼科手术治疗的Rb患儿85例作为Rb组,以同期体检健康者60例为健康对照组。采用实时荧光定量PCR检测血清LncRNA NEAT1水平,采用酶联免疫吸附试验检测血清TFF1;分析血清LncRNA NEAT1、TFF1与临床病理特征的关系;Cox回归分析Rb预后影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA NEAT1、TFF1对Rb患儿预后的评估价值。结果Rb组血清LncRNA NEAT1水平高于健康对照组,血清TFF1低于健康对照组(t/P=38.305/<0.001、34.858/<0.001)。与肿瘤直径<20 mm、病理分化型Rb患儿比较,肿瘤直径≥20 mm、未分化型Rb患儿血清LncRNA NEAT1较高,TFF1较低(LncRNA NEAT1:t/P=17.925/<0.001,16.848/<0.001;TFF1:t/P=12.505/<0.001,8.120/<0.001)。血清LncRNA NEAT1高表达组3年无进展生存率低于低表达组(57.50%vs.88.89%),TFF1低表达组3年无进展生存率低于高表达组(57.14%vs.90.70%)(Log rankχ^(2)/P=13.551/<0.001、15.310/<0.001)。病理未分化型、血清LncRNA NEAT1升高是影响Rb预后的危险因素,血清TFF1升高是其保护因素[HR(95%CI)=1.523(1.147~2.024),1.473(1.108~1.957),0.612(0.413~0.908)];血清LncRNA NEAT1、TFF1及二者联合预测Rb预后的曲线下面积分别为0.836、0.861、0.921,二者联合大于血清LncRNA NEAT1、TFF1单项检测(Z=4.823、4.312,P均<0.001)。结论Rb患儿血清LncRNA NEAT1升高,血清TFF1水平降低,两者与肿瘤最大径及病理分型有关,均是影响Rb患儿预后的因素,两者联合有助于评估患者预后。

急性冠脉综合征患者血浆LncRNA NEAT1、LMR水平变化及其临床意义

目的探讨血浆长链非编码RNA核内富集转录物1(LncRNA NEAT1)、淋巴细胞/单核细胞比值(LMR)与急性冠脉综合征(ACS)的相关性。方法选取2021年1月至2022年1月因胸闷胸痛等胸前区不适症状在娄底市中心医院心血管内科住院行冠状动脉造影术检查的194例患者作为研究对象。其中,冠状动脉造影检查阴性(冠状动脉造影检查显示冠状动脉正常)共50例,纳入对照组;其余144例冠状动脉造影检查阳性的患者(即ACS患者)根据诊断标准分为不稳定型心绞痛(UA)组(n=64)和急性心肌梗死(AMI)组(n=80)。用实时定量PCR检测各组血浆中LncRNA NEAT1的表达水平;检测并收集血常规淋巴细胞计数(LC)和单核细胞计数(MC)并计算出LMR水平。采用Spearman分析LncRNA NEAT1、外周血LMR、Gensini积分和肌钙蛋白I(TnI)的相关性;通过ROC曲线评估血浆LncRNA NEAT1、LMR对ACS的诊断效能。结果三组患者的吸烟史比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中AMI组的有吸烟史率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.017);AMI组的肌酸激酶同工酶(CK-MB)、TnI水平、Gensini积分高于对照组及UA组,差异有统计学意义(P<0.05)。AMI组的LncRNA NEAT1表达水平[1.85(1.45,2.31)]高于对照组[0.80(0.35,1.03)]、UA组[1.26(0.69,1.38)],UA组的LncRNA NEAT1表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。AMI组的LMR水平(3.59±1.42)低于对照组(4.97±1.50)、UA组(4.63±1.45),差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,LncRNA NEAT1与TnI呈正相关(r=0.684,P<0.001),LMR与TnI呈负相关(r=-0.317,P<0.05);LncRNA NEAT1与LMR呈负相关(r=-0.297,P<0.05);LncRNA NEAT1与Gensini积分呈正相关(r=0.654,P<0.001),LMR与Gensini积分呈负相关(r=-0.393,P<0.001)。ROC分析结果显示,血浆LncRNA NEAT1诊断ACS的AUC为0.855(95%CI:0.773~0.936,P<0.001),敏感度和特异度分别为76.4%和88.0%;LMR诊断ACS的AUC为0.684(95%CI:0.561~0.807,P<0.001),敏感度和特异度分别为84.7%和48.0%。结论血浆LncRNA NEAT1表达水平、LMR均与ACS及冠状动脉病变严重程度有关,可能可以作为潜在生物标志物辅助诊断ACS,并判断冠状动脉的病变严重程度。

子宫内膜异位症患者血清LncRNA NEAT1,miR-424-5p水平表达与临床分期及不孕诊断的相关研究

目的探讨长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(long non-coding RNA nuclear-enriched abundant transcript1,LncRNA NEAT1),微小RNA(microRNA,miR)-424-5p对子宫内膜异位症(endometriosis,EM)并发不孕的诊断及对疾病分期的应用价值。方法将2021年10月~2023年10月在石家庄市妇幼保健院就诊的232例EM患者作为研究对象,其中120例为EM并发不孕患者作为不孕组,另外112例为单纯EM患者作为对照组,不孕组根据美国r-AFS分期标准将患者分为r-AFSⅠ~Ⅱ期(n=27)、r-AFSⅢ期(n=45)和r-AFSⅣ期(n=48);采用qRT-PCR法检测血清LncRNA NEAT1,miR-424-5p的表达水平;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA NEAT1,miR-424-5p诊断EM并发不孕的价值;多因素Logistic回归分析EM并发不孕患病的影响因素;在TargetScanHuman网站上进行LncRNA NEAT1靶向miR-424-5p的生物信息学分析;Pearson法分析EM并发不孕患者血清LncRNA NEAT1与miR-424-5p表达水平的相关性。结果不孕组和对照组血清LncRNA NEAT1(1.16±0.15 vs 1.02±0.13)、盆腔术史比例(17.50%vs 1.79%)、miR-424-5p(0.92±0.11 vs 1.04±0.12)表达水平比较,差异具有统计学意义(t/χ^(2)=7.753,16.018,7.974,均P<0.05);r-AFSⅠ~Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ期患者血清LncRNA NEAT1(1.05±0.10,1.14±0.14,1.24±0.19)依次升高,miR-424-5p(0.99±0.12,0.93±0.11,0.87±0.10)表达水平依次降低,差异具统计学意义(F=13.528,10.910,均P<0.05);LncRNA NEAT1与miR-424-5p存在靶向关系,EM并发不孕患者血清LncRNA NEAT1与miR-424-5p表达水平呈负相关(r=-0.431,P<0.05)。血清LncRNA NEAT1,miR-424-5p及联合诊断EM并发不孕的AUC分别为0.782,0.719和0.835,二者联合诊断的AUC优于各自单独检测(Z=2.625,3.861,P=0.009,0.001);LncRNA NEAT1是EM并发不孕的危险因素,miR-424-5p是保护因素(P<0.05)。结论EM并发不孕患者血清LncRNA NEAT1表达水平升高,miR-424-5p表达水平下降,二者与疾病分期和不孕的发生有关。

NEAT1、miR-27a-3p在阿尔茨海默病患者血清和脑脊液中的表达关系

目的:探究长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(long chain non-coding RNA nuclear-enriched abundant transcript 1, LncRNA NEAT1)、miR-27a-3p在阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)患者血清和脑脊液中的表达关系及意义。方法:选择2019年10月至2021年9月天津市第五中心医院神经内科收治的AD患者66例作为病例组,根据临床痴呆评定量表(clinical dementia rating, CDR)评分分为轻度组(≤1分,n=41)与中重度组(>1分,n=25);另取同期门诊其他就诊患者血清和脑脊液标本66例志愿者作为对照组。收集所有受试者的一般资料并评估认知程度,采用实时荧光定量PCR检测血清和脑脊液miR-27a-3p、NEAT1表达水平,酶联免疫吸附试验检测脑脊液β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1,BACE1)、β淀粉样蛋白(amyloid β,Aβ)40和Aβ42水平,采用Spearman法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与简易精神状态检测量表的相关性,采用Pearson法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与Aβ沉积平均标准摄取值比率(standardized uptake value ratio, SUVR)及脑脊液miR-27a-3p、NEAT1、BACE1、Aβ42、Aβ40水平的相关性。结果:MMSE评分[21 (17,25),9(7,11)vs. 27 (21,34)]、MoCA评分[17 (12,21),10 (7,13)vs. 27 (21,31)]、血清miR-27a-3p水平(0.55±0.13,0.46±0.06 vs. 0.97±0.22)、脑脊液miR-27a-3p(0.48±0.10,0.35±0.10 vs. 1.03±0.31)、Aβ42水平[(303.55±36.77) ng/L,(231.45±34.14) ng/L vs.(499.99±53.63) ng/L]及Aβ42/Aβ40比值(0.030±0.008, 0.022±0.007 vs. 0.048±0.010)轻度组、中重度组AD患者均低于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组低(P均<0.05);血清NEAT1水平(2.31±0.64,3.13±0.76 vs. 1.05±0.20)、SUVR(1.50±0.29,1.76±0.52 vs. 0.74±0.15)及脑脊液NEAT1(3.51±1.24,4.30±1.65 vs. 1.01±0.23)、BACE1水平[(55.78±5.98)μg/L,(72.32±16.08)μg/L vs.(21.39±3.73)μg/L]轻度组、中重度组AD患者均高于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组高(P均<0.05)。AD患者血清NEAT1水平与SUVR及脑脊液NEAT1、BACE1呈正相关(r=0.350,0.606,0.341,P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分呈负相关(r=-0.473,-0.482,P均<0.05);血清miR-27a-3p水平与脑脊液miR-27a-3p水平、MMSE评分、MoCA评分呈正相关(r=0.695,0.424,0.412,P<0.05),与SUVR及脑脊液BACE1水平呈负相关(r=-0.521、-0.447,P均<0.05)。结论:NEAT1、miR-27a-3p在AD患者血清及脑脊液中表达趋势具有一致性,NEAT1水平均升高,miR-27a-3p水平均降低,二者水平呈负相关,与AD患者脑中Aβ沉积程度有关,并参与AD的病情进展。

长链非编码RNA核富集转录子1对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭、自噬的影响及机制研究

目的:分析长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录子1(NEAT1)通过调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭及自噬的影响。方法:人胃癌SGC7901细胞传代培养后分为对照组、过表达组和沉默组。对照组为不做任何处理,过表达组给予lncRNA NEAT1过表达质粒转染,沉默组给予lncRNA NEAT1沉默质粒转染。鉴定lncRNA NEAT1转染效率,分析沉默lncRNA NEAT1对人胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭、自噬、MAPK信号通路蛋白表达量的影响。结果:与对照组比较,过表达组lncRNA NEAT1表达量、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2、细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达量增加,上皮性钙黏附素(E-cadherin)、Beclin-1、Ⅱ型/Ⅰ型微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达量降低;沉默组lncRNA NEAT1表达量、MMP-9、MMP-2、ERK蛋白表达量降低,E-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p38、JNK蛋白表达量增加(均P<0.05)。与过表达组比较,沉默组lncRNA NEAT1表达量、MMP-9、MMP-2、ERK蛋白表达量降低,E-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p38、JNK蛋白表达量增加(均P<0.05)。结论:抑制lncRNA NEAT1可有效抑制胃癌细胞的迁移、侵袭、自噬,其机制可能与调控MAPK信号通路有关。

lncRNA NEAT1沉默通过IL-10/STAT3信号通路调节小胶质细胞极化对脑缺血再灌注损伤大鼠的影响

目的探讨长链非编码RNA核富集转录体1(lncRNA NEAT1)沉默通过白细胞介素(IL)-10/信号传导与转录激活因子3(STAT3)信号通路调节小胶质细胞极化对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、CIRI组、CIRI+si-NC组、CIRI+si-NEAT1组,每组24只。除Sham组外,其余各组大鼠采用线栓法构建CIRI模型。建模结束后,各组大鼠给予对应处理7 d。对大鼠神经功能缺损进行评分;观察脑组织病理学变化;检测脑梗死体积百分比,脑组织中离子钙接头蛋白分子1阳性(Iba1+)细胞中M1型、M2型极化标志物阳性(Iba1+CD86+、Iba1+CD206+)细胞的数量,IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10,lncRNA NEAT1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg-1)、IL-10 mRNA,IL-10、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平。结果与Sham组相比,CIRI组大鼠脑组织病理损伤严重,神经功能缺损评分、脑梗死体积百分比、脑组织中Iba1+CD86+、Iba1+CD206+阳性细胞数量、CD86/CD206比值、IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10水平、lncRNA NEAT1、iNOS、Arg-1、IL-10 mRNA水平、IL-10、p-STAT3/STAT3蛋白水平显著升高(P<0.05);与CIRI组和CIRI+si-NC组相比,CIRI+si-NEAT1组大鼠脑组织病理损伤减轻,神经功能缺损评分、脑梗死体积百分比、脑组织中Iba1+CD86+阳性细胞数量、CD86/CD206比值、IL-1β、TNF-α水平、lncRNA NEAT1、iNOS mRNA水平显著降低(P<0.05),Iba1+CD206+阳性细胞数量、IL-4、IL-10水平、Arg-1、IL-10 mRNA、IL-10、p-STAT3/STAT3蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论沉默lncRNA NEAT1可能通过激活IL-10/STAT3信号通路,调控小胶质细胞极化,从而改善CIRI大鼠脑组织损伤。

脑性瘫痪儿童循环lncRNA NEAT1水平在语言认知康复训练疗效中的评估价值

目的探讨lncRNA NEAT1在脑性瘫痪中的临床意义及其对语言认知康复训练疗效的评估价值。方法研究纳入63例脑性瘫痪儿童及50例健康儿童为对照组。通过实时定量PCR分析患儿及对照组儿童血清中lncRNA NEAT1的表达水平,运用ROC分析评估其对脑性瘫痪的诊断价值。对脑性瘫痪儿童施以语言认知康复训练,通过患儿训练前后定向能力、记忆力、注意力、语言功能、运动发育及智力发育变化评估语言认知康复训练的疗效。并通过χ^(2)检验评估lncRNA NEAT1对语言认知康复训练疗效的评估价值。结果脑性瘫痪患儿血清中lncRNA NEAT1的表达水平显著低于对照组儿童血清中的lncRNA NEAT1水平(P<0.001),且对脑性瘫痪具有显著的诊断价值(AUC=0.867)。语言认知康复训练显著提高了患儿的定向能力、记忆力、注意力、语言功能及运动与智力发育(P<0.05),且康复训练后患儿血清中lncRNA NEAT1表达水平显著升高(P<0.01)。lncRNA NEAT1升高的表达水平与患儿康复训练后提高的定向能力、记忆力、注意力、语言功能及运动与智力发育密切相关(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1可作为脑性瘫痪的早期诊断生物标志物,且可有效评估语言认知康复训练疗效。

lncRNA NEAT1通过抑制miR-let-7a激活BZW2促进喉乳头状瘤细胞的增殖和凋亡逃逸

目的探讨长链非编码RNA核富集转录本1(lncRNA NEAT1)对喉乳头状瘤(LP)细胞的增殖和凋亡逃逸的调控作用和机制。方法培养人喉乳头状瘤细胞Hs840.T,将正常人口腔上皮细胞(HOECs)作为对照。将Hs840.T分为lncRNA NEAT1过表达载体(pcDNA-NEAT1)组、pcDNA-NEAT1阴性对照(pcDNA-NC)组、沉默lncRNA NEAT1的小干扰RNA载体(siNEAT1)组、siNEAT1的阴性对照(siNC)组、miR-let-7a的模拟物(mimic)组、mimic阴性对照(mimic-NC)组、miR-let-7a抑制剂(inhibitor)组、inhibitor阴性对照(inhibitor-NC)组、沉默碱性亮氨酸拉链和W2结构域2(BZW2)的小干扰RNA载体(siBZW2)组、siBZW2的阴性对照(siBZW2-NC)组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2给药(pcDNA-NEAT1+siBZW2)组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2-NC给药(pcDNA-NEAT1+siBZW2-NC)组。qRT-PCR检测各组中lncRNA NEAT1及其预测靶分子miR-let-7a的表达。Western blot和qRT-PCR检测BZW2的表达。双荧光素酶报告基因实验检测Hs840.T中lncRNA NEAT1和miR-let-7a以及miR-let-7a和BZW2的靶向关系。MTT实验测定Hs840.T的增殖能力。Annexin V-FITC/PI双染法检测Hs840.T的凋亡逃逸能力。结果Hs840.T中的lncRNA NEAT1和BZW2表达高于HOECs(P<0.05),而miR-let-7a表达低于HOECs(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果表明,Hs840.T中lncRNA NEAT1吸附抑制miR-let-7a并上调BZW2的表达(P<0.05),且BZW2是miR-let-7a的靶基因。与pcDNA-NC组相比,pcDNA-NEAT1组Hs840.T的增殖率增加(P<0.05),早期、晚期凋亡率均降低(P<0.05);与siNC组相比,siNEAT1组Hs840.T的增殖率降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率均增加(P<0.05)。另外,与pcDNA-NEAT1+siBZW2-NC组相比,pcDNA-NEAT1+siBZW2组Hs840.T的增殖率降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率均增高(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1通过抑制miR-let-7a激活BZW2促进LP细胞的增殖和凋亡逃逸。

糖尿病肾病患者血清miR-495-3p和LncRNA NEAT1表达水平及其与患者预后的相关性研究

目的研究血清微小RNA(micro RNA,miR)-495-3p,长链非编码RNA核富集转录体1(LncRNA NEAT1)水平与糖尿病肾病(DN)患者预后的关系。方法纳入河北以岭医院2019年1月~2021年1月期间116例DN患者作为DN组,收集其临床资料,根据肾脏病理损伤程度分为Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组和Ⅳ级组;根据治疗后6个月随访期间是否发展为终末期肾病分为预后良好组和预后不良组;另收集同期单纯2型糖尿病(T2DM)患者102例作为T2DM组和健康体检者100例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-495-3p和LncRNA NEAT1水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-495-3p和LncRNA NEAT1水平对DN患者预后的预测价值。结果对照组、T2DM组和DN组血清miR-495-3p水平(1.02±0.25,0.76±0.22,0.58±0.16)依次降低,LncRNA NEAT1水平(1.01±0.23,1.58±0.29,2.16±0.36)依次升高,差异均有统计学意义(F=117.238,391.506,均P<0.05)。DN中T2DM病程≥10年,eGFR≥60 ml/min/1.73 m^(2),FBG≥8mmol/L,24 h尿蛋白≥3 g/24 h的血清miR-495-3p水平(0.52±0.14,0.52±0.15,0.50±0.16,0.49±0.15)低于T2DM病程<10年,eGFR<60 ml/min/1.73 m^(2),FBG<8mmol/L和24 h尿蛋白<3 g/24 h(0.67±0.18,0.69±0.19,0.70±0.19,0.73±0.18);而LncRNA NEAT1水平(2.33±0.42,2.29±0.38,2.35±0.43,2.31±0.40)高于T2DM病程<10年,eGFR<60 ml/min/1.73 m^(2),FBG<8mmol/L和24 h尿蛋白<3 g/24 h(1.90±0.31,1.92±0.33,1.88±0.31,1.90±0.36),差异均有统计学意义(tmiR-495-3p=5.033,5.300,6.122,7.721,t LncRNA NEAT1=5.956,5.244,6.436,5.529,均P<0.05)。Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组和Ⅳ级组血清miR-495-3p水平(0.74±0.19,0.61±0.16,0.50±0.08,0.39±0.06)依次降低,LncRNA NEAT1水平(1.69±0.30,2.08±0.32,2.34±0.35,2.74±0.39)依次升高,差异有统计学意义(F=32.060,46.730,均P<0.05)。预后不良组血清miR-495-3p水平(0.45±0.10)低于预后良好组(0.65±0.17),LncRNA NEAT1(2.53±0.47)水平高于预后良好组(1.97±0.36),差异有统计学意义(t=6.836,7.148,均P<0.05)。血清miR-495-3p,LncRNA NEAT1水平单独及联合预测DN患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.784(95%CⅠ:0.702~0.867),0.753(95%CⅠ:0.658~0.848)和0.834(95%CⅠ:0.755~0.912),特异度分别为71.1%,86.8%和77.6%,敏感度分别为62.5%,57.5%和77.5%。结论DN患者血清miR-495-3p低表达,LncRNA NEAT1高表达,二者水平与DN患者肾损伤及预后有关。

精神分裂症病人外周血长链非编码RNA核富集转录本1表达与临床症状相关性分析

目的探讨长链非编码RNA核富集转录本1(lncRNA NEAT1)在精神分裂症(sch)病人外周血中的表达与临床症状的相关性。方法选择2019年6月至2022年3月在菏泽市第三人民医院及河北医科大学第一医院精神科收治的sch病人73例作为观察对象(sch组),另选取同期在该两家医院体检人员(无精神病障碍史及无精神疾病家族史)68例作为对照组,采用阳性与阴性症状量表(PANSS)评估病人临床症状,采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估病人认知功能,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单核细胞(PBMC)中lncRNA NEAT1表达水平,Spearman法分析lncRNA NEAT1与PANSS评分、MoCA评分的相关性,受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA NEAT1水平对sch的诊断价值。结果对照组和sch组病人外周血lncRNA NEAT1表达水平分别为1.05±0.21、0.73±0.15,差异有统计学意义(P<0.001);ROC曲线分析显示:lncRNA NEAT1的曲线下面积为0.82,截断值为0.89,灵敏度为79.45%,特异度为73.93%;相关性分析表明:lncRNA NEAT1与PANSS量表总分和阴性症状量表评分呈负相关(r=−0.40、−0.49,P<0.05),且与MoCA量表中执行能力、注意力、延迟记忆和总分呈负相关(r=−0.38、−0.40、−0.40、−0.42,P<0.05)。结论lncRNA NEAT1在sch病人外周血中表达水平降低,与sch病人精神症状和认知功能有关,可能参与sch的发生发展。

lncRNA NEAT1调节miR-15a-5p/HOXD10轴对子痫前期滋养细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)核富集转录本1(nuclear-enriched abundant transcript 1,NEAT1)对子痫前期(preeclampsia,PE)滋养细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及分子机制。方法体外培养人绒毛膜滋养细胞HTR-8/Svneo,分为正常对照(NC)组、si-NC组、si-NEAT1组、si-NEAT1+anti-NC组和si-NEAT1+anti-miR-15a-5p组。采用四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞术和Transwell小室实验检测细胞增殖活性、凋亡和侵袭能力;实时定量聚合酶链反应检测细胞中NEAT1、miR-15a-5p和同源盒基因D10(homeobox D10,HOXD10)mRNA表达;蛋白质印迹法检测细胞中HOXD10和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白[钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和神经钙黏素(N-cadherin)]的表达;双荧光素酶报告基因和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)实验验证HTR-8/Svneo细胞中NEAT1、miR-15a-5p和HOXD10的调控机制。结果敲减NEAT1可显著促进HTR-8/Svneo细胞增殖、侵袭和EMT,抑制细胞凋亡,并上调miR-15a-5p表达,抑制HOXD10的mRNA和蛋白表达(P<0.05);下调miR-15a-5p的表达可明显逆转NEAT1敲减对滋养细胞增殖、凋亡和侵袭的影响(P<0.05)。双荧光素酶和RIP实验证实NEAT1可靶向结合并负调控HTR-8/Svneo细胞中的miR-15a-5p,且HOXD10是miR-15a-5p的靶标。结论敲减NEAT1可通过上调miR-15a-5p抑制HOXD10表达,进而促进滋养细胞的增殖和侵袭,并抑制滋养细胞的凋亡。

LncRNA NEAT1调节微小RNA-144-3p/NOVA1轴对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞损伤的影响

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)核富含丰富的转录本1(nuclear-enriched abundant transcript 1,NEAT1)通过微小RNA(micro RNA,miR)-144-3p/神经肿瘤腹侧抗原1(neural tumor ventral antigen 1,NOVA1)对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(human retinal microvascular endothelial cells,hRMECs)损伤的影响。方法将h RMECs分为高糖组(不转染)、对照组(不转染)、高糖+si-NEAT1-阴性对照(negative control,NC)组(转染siRNA-NC)、高糖+si-NEAT1组(转染NEAT1 siRNA)、高糖+si-NEAT1+抑制剂-NC组(共转染NEAT1 siRNA+抑制剂-NC)、高糖+si-NEAT1+miR-144-3p抑制剂组(共转染NEAT1 siRNA+miR-144-3p抑制剂)、高糖+si-NOVA1-NC组(转染NOVA1 siRNA-NC)、高糖+si-NOVA1组(转染NOVA1 siRNA)。实时荧光定量聚合酶链反应技术(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测hRMECs中NEAT1、miR-144-3p表达量;CCK-8、Transwell和血管形成实验分别分析hRMECs增殖、迁移和血管形成能力;双荧光素酶报告实验分析NEAT1与miR-144-3p、miR-144-3p与NOVA1的结合情况;Western blot检测NOVA1、VEGF蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组hRMECs中NEAT1表达(2.67±0.13 vs.1.02±0.08)、相对活力、迁移数量[(271.50±20.35)个vs.(144.30±16.41)个]、成管节点数[(426.50±22.75)个vs.(181.70±12.43)个]、管长度[(12725.46±136.57)μm vs.(8009.32±107.32)μm]均较高,miR-144-3p表达(0.46±0.06 vs.1.00±0.05)较低,差异有统计学意义(P<0.05)。敲低NEAT1可明显下调h RMECs中NEAT1的表达,上调miR-144-3p的表达,同时降低NOVA1(0.80±0.09 vs.1.35±0.07)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达及hRMECs的相对活力、迁移数量[(231.60±14.25)个vs.(271.50±20.35)个]、成管节点数[(234.30±13.18)个vs.(426.50±22.75)个]和管长度[(9208.74±130.85)μm vs.(12725.46±136.57)μm],差异有统计学意义(P<0.05),上述作用可被miR-144-3p抑制剂减弱。NEAT1可结合并下调miR-144-3p表达,且NOVA1为miR-144-3p的靶基因。敲低NOVA1可明显降低hRMECs相对活力、迁移数量、成管节点数、管长度,差异有统计学意义(P<0.05)。结论敲低NEAT1可上调miR-144-3p表达,下调NOVA1蛋白表达,进而抑制hRMECs增殖、迁移和血管形成能力。

LncRNA NEAT1作为ceRNA解除miR-205-5p对E2F1的靶向作用

目的探讨LncRNA NEAT1作为ceRNA解除miR-205-5p对E2F1的靶向作用。方法培养MH-S肺巨噬细胞,转染siCtrl、silncRNA NEAT1、silncRNA NEAT1+miR-205-5p抑制剂后,qRT-PCR检测E2F1的mRNA转录水平,WB检测E2F1的蛋白水平;并用RIP和RNA pull-down检测lncRNA NEAT1和miR-205-5p的结合情况。建立矽肺和对照小鼠模型,并尾静脉注射小鼠模型(siCtrl、silncRNA NEAT1、silncRNA NEAT1+miR-205-5p抑制剂),qRT-PCR检测E2F1的mRNA转录水平,WB检测E2F1的蛋白水平。结果与siCtrl组(1.15±0.10)比较,转染silncRNA NEAT1后E2F1表达(0.38±0.08)下调;与silncRNA NEAT1组比较,转染silncRNA NEAT1+miR-205-5p抑制剂后E2F1表达(0.58±0.10)上调,差异有统计学意义(P<0.01)。抗AGO2抗体可以将lncRNA NEAT1沉淀下来,表明lncRNA NEAT1可以与AGO2形成复合物,竞争性结合miR-205-5p。与NEAT1-Mut组(1.04±0.05)、NEAT1-NC组(0.99±0.04)比较,NEAT1处理后miR-205-5p(3.90±0.10)显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论LncRNA NEAT1可作为ceRNA,解除miR-205-5p对E2F1的靶向作用。

lncRNA NEAT1与miR-342-3p对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录本1(NEAT1)在肝细胞癌(HCC)组织和细胞株中的表达及临床意义,并验证NEAT1与miR-342-3p对HCC细胞迁移和侵袭能力的影响。方法收集2013年6月至2014年10月南京医科大学附属淮安第一医院接受手术的90例患者HCC组织和癌旁组织。采用qRT-PCR检测组织中NEAT1和miR-342-3p的表达,分析HCC组织中NEAT1的相对表达水平与患者临床病理参数、生存率以及预后的相关性。qRT-PCR检测HCC细胞株Hep3B、Huh7、HepG2和HCCLM3以及正常肝细胞株(LO2)中NEAT1的表达,Transwell实验检测HCC细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告实验验证NEAT1与miR-342-3p之间的调控关系。生存率差异比较采用log-rank检验,不良预后的危险因素分析采用Cox比例风险模型。结果NEAT1在HCC组织中的相对表达水平升高,并与肿瘤淋巴结转移及TNM分期密切相关,miR-342-3p在HCC组织中的表达较癌旁组织下调(P<0.05);根据NEAT1中位水平分为高表达NEAT1和低表达NEAT1,在TNMⅠ期、TNMⅡ期以及TNMⅠ~Ⅳ期HCC患者中,高表达NEAT1患者总体生存率较低表达NEAT1患者显著降低,NEAT1的表达水平是HCC患者预后较差的独立危险因素。NEAT1在HCC细胞株中较LO2细胞株表达升高(P<0.05),下调NEAT1的表达能够抑制HepG2细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验表明NEAT1能够通过竞争性内源RNA机制调控miR-342-3p。Transwell实验表明下调miR-342-3p能够逆转NEAT1沉默介导的HCC细胞迁移和侵袭的抑制作用(均P<0.05)。结论NEAT1的高表达与HCC患者的恶性程度以及不良预后密切相关,其能够调控miR-342-3p诱导HCC细胞的迁移和侵袭。

LncRNA NEAT1通过调节miR-125b-5p/IGFBP5轴对血管瘤内皮细胞增殖、凋亡、迁移的实验研究

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)核富集转录本1(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)通过调节微小核糖核酸(micro RNAs,miR)-125b-5p/胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulinlike growth factor binding protein 5,IGFBP5)轴对血管瘤内皮细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测血管瘤组织(2016年3月~2019年3月收集,n=18)、瘤旁组织样本(2016年3月~2019年3月收集,n=18)以及人脐静脉内皮细胞HUVES,人血管瘤内皮细胞HemECs,HDEC中NEAT1,miR-125b-5p及IGFBP5蛋白表达。构建沉默NEAT1,同时沉默NEAT1和miR-125b-5p的HemECs细胞系,通过细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、台盼蓝染色、流式细胞术、划痕愈合实验、Western blot分别观察NEAT1和miR-125b-5p对HemECs细胞增殖、凋亡、迁移及IGFBP5,增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达的影响;双荧光素酶报告基因实验检测NEAT1与miR-125b-5p,mi R-125b-5p与IGFBP5的关系。结果 与瘤旁组织比较,血管瘤组织中NEAT1(2.87±0.22 vs 1.00±0.00),IGFBP5蛋白(1.45±0.14 vs 0.27±0.02)表达水平升高,miR-125b-5p(0.24±0.02 vs 1.00±0.00)表达水平降低,差异具有统计学意义(t=35.400~161.220,均P <0.05);与HUVES细胞比较,HemECs,HDEC细胞中NEAT1(2.76±0.24,1.78±0.13 vs 1.00±0.00),IGFBP5蛋白(1.31±0.15,0.78±0.06 vs 0.24±0.02)表达升高,miR-125b-5p表达(0.19±0.02,0.45±0.04 vs 1.00±0.00)降低,差异具有统计学意义(t=17.320~99.204,14.697~33.680,均P<0.05),且HemECs细胞中NEAT1和IGFBP5蛋白表达量最高,miR-125b-5p表达量最低,因此,选取HemECs细胞为研究对象;与si-NC组比较,si-NEAT1组NEAT1(0.32±0.02 vs 1.01±0.12)表达、A值(0.45±0.04 vs 1.13±0.11)、细胞生长率(32.28%±2.79%vs 99.41%±0.22%)、划痕愈合率(20.33%±1.23%vs 49.24%±2.43%)及IGFBP5(0.41±0.04 vs 1.31±0.20),PCNA(0.36±0.04 vs 1.27±0.14),Bcl-2(0.48±0.04 vs 1.39±0.16)和MMP-9(0.21±0.02 vs 1.09±0.10)蛋白表达降低,mi R-125b-5p(1.87±0.15 vs 1.02±0.10)表达、细胞凋亡率(45.58%±3.34%vs 12.36%±1.07%)升高,差异具有统计学意义(t=10.809~58.755,均P <0.05);下调miR-125b-5p减弱了沉默NEAT1对HemECs细胞增殖、迁移的抑制及对细胞凋亡的促进作用(t=9.218~15.010,均P <0.05);NEAT1与miR-125b-5p,miR-125b-5p与IGFBP5存在靶向调控关系。结论 沉默NEAT1通过上调miR-125b-5p来抑制IGFBP5表达,从而抑制HemECs细胞增殖、迁移,并促进细胞凋亡。

急性胰腺炎病人血清长链非编码RNA核富集转录体1、Toll样受体2表达变化及临床意义研究

目的探讨急性胰腺炎(AP)病人血清长链非编码RNA核富集转录体1(LncRNA NETA1)、Toll样受体2(TLR2)表达及临床意义。方法选取2017年5月至2020年12月石家庄平安医院收治的AP病人125例为研究对象,根据急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)对AP病人进行评分,并将病人分为轻症组56例,重症组69例;根据住院期间重症组AP病人预后情况,将病人分为预后不良25例,预后良好44例。同期选取该院健康体检者130例为健康组。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清LncRNA NETA1水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清TLR2水平;Pearson相关性分析探索AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2水平相关性及二者与病人APACHEⅡ评分的关系;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清LncRNA NEAT1、TLR2对AP病人重症的评估价值。结果与健康组比较,AP组血清LncRNA NEAT1(2.16±0.31比1.00±0.00)、TLR2水平[(6.43±1.05)µg/L比(0.59±0.24)µg/L]升高(P<0.05);与轻症组比较,重症组AP病人血清LncRNA NEAT1(2.31±0.33比1.98±0.27)、TLR2水平[(6.89±1.16)µg/L比(5.86±0.92)µg/L]升高(P<0.05);与预后良好组比较,预后不良组重症AP病人血清LncRNA NEAT1(2.43±0.36比2.14±0.27)、TLR2水平[(7.12±1.24)µg/L比(6.45±1.02)µg/L]升高(P<0.05);Pearson相关性分析结果表明,AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2呈正相关(r=0.65,P<0.05),二者与病人APACHEⅡ评分均呈正相关(r=0.50、0.52,P<0.05);ROC曲线结果显示,血清LncRNA NEAT1水平、TLR2单独及联合评估AP病人重症的曲线下面积(AUC)分别为0.73[95%CI:(0.64,0.82)]、0.75[95%CI:(0.67,0.84)]、0.88[95%CI:(0.82,0.94)],血清LncRNA NEAT1联合TLR2水平预测AP病人重症的AUC明显大于二者单独预测(P<0.05)。结论AP病人血清LncRNA NEAT1、TLR2表达水平显著升高,且与病人严重程度和预后有关,临床上检测LncRNA NEAT1、TLR2表达可能有助于AP病人的病情评估。

血清lncRNA NEAT1和Klotho水平变化与慢性心力衰竭疾病严重程度和心室重构的相关性分析

目的探究血清长链非编码RNA富核转录本1(lncRNA NEAT1)和Klotho水平变化与慢性心力衰竭(CHF)疾病严重程度和心室重构的相关性。方法选取2019年3月~2022年3月95829部队医院收治的CHF患者112例即为CHF组。按照美国纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级的标准分为NYHAⅡ级组(n=38)、NYHAⅢ级组(n=39)和NYHAⅣ级组(n=35)。同期选择在我院体检中心体检健康的志愿者108例为对照组,经胸超声心动图检查测量心室重构指标。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测实验室指标。应用qRTPCR法检测血清中lncRNA NEAT1和Klotho表达水平。采用Pearson相关性分析血清lncRNA NEAT1和Klotho表达水平相关性以及二者与心室重构指标的相关性。结果CHF组与对照组相比,ALT、TC、IL-6、TNF-α、BNP与LDL-C水平均显著升高(均P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.05)。与对照组相比,CHF组血清中lncRNA NEAT1的表达水平显著升高,Klotho表达水平显著降低(均P<0.01)。CHF患者NYHAⅣ级组血清lncRNA NEAT1的表达水平显著高于NYHAⅡ级组和NYHAⅢ级组,NYHAⅢ级组表达水平显著高于NYHAⅡ级组;CHF患者NYHAⅣ级组血清Klotho的表达水平显著低于NYHAⅡ级组和NYHAⅢ级组,NYHAⅢ级组表达水平显著低于NYHAⅡ级组(均P<0.01)。相关性分析显示,CHF患者血清中lncRNA NEAT1和Klotho的表达水平呈负相关关系(r=-0.411,P<0.01)。与对照组相比,NYHAⅡ级组、NYHAⅢ级组、NYHAⅣ级组IVST、LVEDd、LVPWT的值依次显著升高,LVEF的值依次显著降低(均P<0.01)。血清lncRNA NEAT1表达水平与IVST、LVEDd、LVPWT的值呈正相关,与LVEF的值呈负相关;血清Klotho表达水平与LVEF的值呈正相关,与IVST、LVEDd、LVPWT的值呈负相关(均P<0.01)。结论CHF患者血清lncRNA NEAT1表达水平显著升高,而Klotho表达水平显著降低,二者与CHF患者疾病严重程度、心室重构具有一定的相关性。