LncRNA XIST调节miR-574-5p/TLR4轴对呼吸道合胞病毒感染的支气管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码(long non-coding,Lnc)核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)X-非活性特异性转录本(X-inactive specific transcript,XIST)调节微小RNA(microRNA,miR)-574-5p/Toll样受体(Toll-like receptor 4,TLR4)轴对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染的支气管上皮细胞凋亡的影响。方法将人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial,16HBE)分为阴性对照(negative control,NC)组、RSV感染(RSV infection,RSV)组、小干扰RNA阴性对照(small interfering RNA negative control,si-NC)组、XIST小干扰RNA(XIST small interfering RNA,si-XIST)组、siXIST+抑制剂阴性对照(inhibitor negative control,inhibitor-NC)组、si-XIST+miR-574-5p抑制剂(miR-574-5p inhibitor)组,实时荧光定量聚合酶链反应检测LncRNA XIST、miR-574-5p表达;5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)染色、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β的分泌;双荧光素酶报告基因实验验证miR-574-5p与LncRNA XIST和TLR4的关系;蛋白质印迹检测TLR4、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(B lymphoblastoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteine aspartate proteolytic enzyme 3,Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果相较于NC组,RSV组、si-NC组LncRNA XIST、凋亡率、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、TLR4、Bax、Cleaved Caspase-3表达升高,EdU阳性率、miR-574-5p、PCNA、Bcl-2表达降低(P均<0.05);相较于si-NC组,si-XIST组LncRNA XIST表达、凋亡率、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、TLR4、Bax、Cleaved Caspase-3表达降低,EdU阳性率、miR-574-5p、PCNA、Bcl-2表达升高(P均<0.05);下调miR-574-5p可逆转敲低LncRNA XIST对RSV感染的16HBE细胞凋亡和炎症反应的抑制(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-574-5p与LncRNA XIST、miR-574-5p与TLR4存在靶向调控关系(P<0.05)。结论LncRNA XIST在RSV感染的16HBE细胞中上调表达,敲低LncRNA XIST可能通过上调miR-574-5p来下调TLR4表达,抑制RSV感染后的16HBE细胞凋亡。

LncRNA-GAS5在食管鳞癌中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码核糖核酸生长组织特异性转录体5(LncRNA-GAS5)在食管鳞癌组织中的表达及其对食管鳞癌细胞株EC9706细胞增殖、凋亡的影响。方法:选取2016年2月至2019年1月于中国人民解放军陆军第958医院诊治的食管鳞癌患者78例,比较LncRNA-GAS5在食管鳞癌组织及癌旁组织中的表达差异;过表达质粒(pEGFP-C1-GAS5)转染EC9706后通过CCK-8试剂盒以及平板克隆试验检测LncRNAGAS5过表达对细胞增殖能力的影响,采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测LncRNA-GAS5过表达对细胞凋亡的影响,荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白质免疫印迹法检测抑癌基因PTEN表达变化。结果:与癌旁组相比,食管鳞癌组LncRNA-GAS5相对表达量降低(P<0.05);与空白组、阴性对照组相比,pEGFP-C1-GAS5组LncRNA-GAS5相对表达量升高(P<0.05);与空白组、阴性对照组相比,pEGFP-C1-GAS5组转染后48、72、96 h OD值、细胞克隆数降低(P<0.05),p EGFP-C1-GAS5组细胞凋亡率升高(P<0.05),PTEN mRNA、PTEN蛋白表达升高(P<0.05)。结论:食管鳞癌患者癌组织内LncRNA-GAS5低表达,LncRNA-GAS5过表达抑制癌细胞增殖,促进癌细胞凋亡,可能是通过促进抑癌基因PTEN表达实现的。