大豆拟茎点种腐病菌Phomopsis longicolla荧光素酶标记菌株的制备及应用

大豆拟茎点种腐病菌(Phomopsis/Diaporthe longicolla)可侵染大豆引起种腐病和茎枯病等多种病害。本研究根据该病菌基因组的密码子偏好性,优化了外源的荧光素酶基因序列,通过酵母同源重组构建了荧光素酶表达载体,利用PEG介导的原生质体转化法获得了稳定表达荧光素酶的大豆拟茎点种腐病菌菌株PlYC2-1-Luc。结果显示:荧光素酶基因的引入不影响大豆拟茎点种腐病菌的生长速率和致病力。以PlYC2-1-Luc菌株进行示踪可直观发现:健康大豆中分离的3株内生镰孢菌能够显著抑制PlYC2-1-Luc生长,具有生防潜力;含苯醚甲环唑、精甲霜灵·咯菌腈和咯菌腈·噻霉酮的种衣剂均可抑制PlYC2-1-Luc向大豆种子扩展,表明这些药剂或其成分可用于病害防控;PlYC2-1-Luc对大豆品种Williams的致病力强于齐黄34,表明齐黄34更加抗病。该荧光素酶标记方法具有较好的有效性和稳定性,该研究为进一步开展大豆拟茎点种腐病菌的致病机理及病害防控技术研究提供了一种可视化、高效的菌株材料。

大豆拟茎点种腐病菌(Phomopsis longicolla)对大豆种子致病性及侵入部位研究

大豆拟茎点种腐病菌(Phomopsis longicolla Hobbs)可引起大豆种腐病,严重影响大豆产量和品质。为探讨大豆拟茎点种腐病菌对大豆种子发芽的影响及侵染种子的部位,在实验室条件下采用种子接菌法进行了研究。结果表明,大豆拟茎点种腐病菌可明显降低种子的发芽势和发芽率。侵入部位包括种子的种皮、子叶及胚,严重影响种子活力。

广藿香内生真菌Diaporthe longicolla A616细胞毒活性次级代谢产物研究

为了研究广藿香内生真菌Diaporthe longicolla A616的活性次级代谢产物。采用正相硅胶、C18反相、Sephadex LH-20凝胶、HPLC等色谱技术从该菌株的发酵产物中分离得到了10个化合物,经波谱数据分析和文献比对,分别鉴定为1,3-diamino-1,3-dimethylurea（1）,（7R,9R）-7-hydroxy-9-propyl-5-nonen-9-olide（2）,ergosta-5,7,22-trien-3β-ol（3）,（22E,24R）-ergosta-4,6,8（14）-22-tetraen-3-one（4）,（22E,24R）-3β,5α-dihydroxy-6β-ergosta-7,22-diene（5）,citreoisocoumarin（6）,glycerol monolinoleate（7）,1-（2-hydroxyethoxy）ethyl（E）-octadec-9-enoate（8）,cyclo-（L-Pro-L-Ala）（9）,cyclo（L）-Pro-（L）-Val（10）,其中,化合物6~10为首次从Diaporthe属真菌中分离得到。体外细胞毒活性结果显示化合物4和5对肿瘤细胞株SF-268,MCF-7,NCIH460和Hep G-2具有显著的抑制活性,IC50分别为5.3,6.5,12.2,6.1μmol·L-1和8.2,5.2,6.1,9.4μmol·L-1。

红树尖瓣海莲内生真菌Phomopsis longicolla HL-2232次级代谢产物研究

通过活性追踪的方法,从一株来源于药用红树尖瓣海莲的内生真菌Phomopsis longicolla HL-2232中分离鉴定了5个生物碱类化合物、1个色原酮类化合物以及4个甾醇类化合物,分别鉴定为：6-氨基嘌呤-9-羧酸甲酯（1）,腺嘌呤核苷（2）,尿嘧啶核苷（3）,N,N＇-二苯基尿素（4）,（2S,2＇R,3R,4E,8E,3＇E）-2-（2＇-羟基-3＇-十八碳烯酰胺）-9-甲基-4,8-十八碳二烯-1,3-二醇（5）,2-（2＇S-羟丙基）-5-甲基-7-羟基对氧萘酮（6）,fortisterol（7）,（22E）-5α,8α-表二氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇（8）,啤酒甾醇（9）,β-谷甾醇亚油酸酯（10）.其中化合物1为新化合物,化合物5为新天然产物,其碳谱数据至今未曾报道.细胞毒活性表明化合物1-3对肿瘤细胞A549,B16F10,HL-60,MCF-7具有不同程度的抑制活性.其中新化合物1对乳腺癌细胞（MCF-7）的IC50值为14.9μmol·L-1、化合物3对肺癌细胞（A549）的IC50值为8.6μmol·L-1,两者活性强于阳性对照药顺铂.

一种新发生的大豆茎枯病病原菌鉴定

鉴定了一种新发生的大豆茎枯病病原菌。在酸化PDA培养基上所有病原菌分离物菌落呈白色,气生菌丝呈密集的卷毛状,有时部分区域显黄绿色;培养基背面开始无色,随后产生大的、扩展的黑色子座。在接种的大豆茎秆上产生大小不等的黑色子座和分散的分生孢子器。共产生2类分生孢子,其中α型分生孢子丰富,无色,单孢,椭圆至纺锤状形,大小4.05～7.57μm×1.48～3.25μm,含2个油滴;β型分生孢子极少见,无色,线形。在培养基及大豆茎秆上未发现有性态。致病性测定表明选择的分离物引起合丰25大豆100%植株发病和种子腐烂。用AluI、RsaI和HhaI酶切通用引物对ITS4/ITS5扩增的rDNA-ITS产物,所有分离物都产生与大豆拟茎点种腐病菌Phomopsis longicolla一致的酶切谱带;序列比对发现测序的2个分离物ITS序列与GenBank中9个P.longicolla分离物ITS序列100%同源。这是我国首次报道大豆田间发现P.longicolla,而且能引发严重的大豆茎枯病。

猕猴桃采后腐烂病原的鉴定

2015年9月,于湖南省浏阳果园内发现大量采摘后易腐烂的猕猴桃,腐烂部位有明显块状褐色病斑。对染病猕猴桃腐烂部位进行病原物的分离纯化、形态学观察和致病力验证、分子生物学方法进一步区分鉴定病原菌,结果表明,导致猕猴桃腐烂的病原菌为大豆拟茎点种腐病菌(Phomopsis longicolla)。

8种杀菌剂对大豆南北方茎溃疡病菌和拟茎点种腐病菌的室内毒力测定

试验选用8种低毒杀菌剂,采用菌丝生长抑制法对大豆北方茎溃疡病菌、大豆南方茎溃疡病菌和大豆拟茎点种腐病菌进行了室内毒力测定。结果表明,50%多菌灵SC对供试3种病菌毒力最强,EC50值分别为0.118、0.112、0.152mg/L。25%醚唑EC对南方茎溃疡病菌和拟茎点种腐病菌的毒力仅次于多菌灵,5%己唑醇EC对北方茎溃疡病菌抑菌效果也仅次于多菌灵,这3种药剂都可作为防治3种病害的有效杀菌剂。

大豆拟茎点种腐病菌的分离与鉴定*

本文对美国进境大豆及其中混杂的豆杆上发现的拟茎点属(Phomopsissp.)进行了形态学和分子生物学鉴定。无论从形态学还是从分子生物学角度都支持将该检测种鉴定为Phomopsislongicolla。该种病原真菌是在大豆上发生的危险性病原真菌,国内过去未见报道。

福建莎草科一个新记录种——长颈薹草

报道了福建省一个新记录种——长颈薹草Carex longicolla Tang&F.T.Wang ex Y.F.Deng。

湖南永州奈李果实一种新病害的病原鉴定

【目的】明确危害湖南永州奈李果实新发生病害的病原物种类，为更好地识别并防控该病害提供理论依据。【方法】用常规分离方法对湖南永州奈李果园发病样品进行病原菌分离，通过形态学特征观察，ITS、TUB、CAL和ACT序列和系统发育进化树分析及致病性测定，对分离获得的病原菌进行鉴定。【结果】分离获得的病原菌形态学特征与大豆拟茎点霉（Phomopsislongicolla）一致；其ITS、TUB、CAL、ACT序列与P．10ngicolla同源性分别为98％、99％、99％和98％。室内人工接种病原菌3～5d后果实形成椭圆形至不规则形褐色病斑、后转腐烂等症状，与田间果实危害症状一致。【结论】初步确定危害湖南永州奈李果实的病原菌为PlongicollaYZ。

引起大豆苗期根腐病的大豆拟茎点种腐病菌鉴定

对10个引起大豆根腐病的真菌分离物进行鉴定。结果表明,这些分离物形态学上与大豆拟茎点种腐病菌相似。用ITS通用引物进行PCR扩增,该菌株与拟茎点种腐病菌MP4PL11PS(GenBank登录号HQ130441.1)同源性达98%。因此,确定该菌株为大豆拟茎点种腐病菌。