低危型HPV-11E6在小鼠骨髓源树突细胞中的定位表达及其诱发凋亡的研究

目的采用绿色荧光蛋白表达系统追踪低危型HPV-11E6蛋白在树突细胞(dentritic cell,DC)内的表达,探讨低危型HPV-11E6在树突细胞中的定位,观察低危型HPV-11E6蛋白诱导的树突细胞凋亡。方法构建真核表达载体pGFP-11E6,转染小鼠骨髓源树突细胞,荧光显微镜动态观察E6蛋白的定位和表达水平。采用流式细胞术检测转染后24 h低危型HPV-11E6蛋白的凋亡。结果树突细胞在分别转染pGFP-11E6和p EGFP-C1质粒后,GFP-11E6主要定位于细胞质内;而对照组的只表达GFP的蛋白则均匀分布于树突细胞。蛋白表达水平的检测表明,在转染树突细胞12 h,GFP-11E6和GFP蛋白开始表达(荧光强度分别为73.22,84.34),转染24 h蛋白表达均到达高峰(荧光强度分别为98.25,126.77),转染48 h蛋白表达荧光强度分别为87.46和103.56,转染72 h蛋白表达荧光强度分别为72.11和97.45。Annexin-Ⅴ/PI流式细胞仪检测可见,GFP-11E6转染的细胞发生了凋亡。结论低危型HPV-11E6主要定位于树突细胞质内,并且可以诱导树突细胞凋亡。

西南地区HPV-6和HPV-11 E6/E7基因多态性分析

目的研究西南地区人乳头瘤病毒6型(HPV-6)和11型(HPV-11)E6/E7基因多态性,为低危型HPV的防治提供分子水平。方法对HPV-6和HPV-11阳性标本扩增其目的基因,测序并对比Genenbank参考序列,对变异初步分析;PAML 4.8软件作用于E6/E7基因的选择压力。结果 HPV-6E6/E7基因共12个突变位点,其中有3个是首次发现的突变位点,5/12为非同义突变;HPV-11E6/E7中,共计5个单核苷酸突变,具有2/5非同义和3/5同义突变。选择压力结果显示,只有HPV-6E7基因有3个正向选择位点,分别是4R**,34E**和52F**。结论 HPV-6E6和E7序列在分析的群组中高度保守,表示HPV-6在进化的过程中,形成了有利于生存的分离株。HPV-11突变未发现正向选择位点,表明选择的变异对HPV-11来说适应环境较困难。