海马组织高表达Neuritin转基因小鼠的构建及鉴定

目的 构建海马组织高表达Neuritin的基因小鼠并进行繁殖、基因型鉴定,为研究上调Neuritin表达对2型糖尿病认知功能障碍作用机制提供模型。方法 将4对Emx1-cre基因小鼠、Neuritin-Loxp基因小鼠和db/db纯合子小鼠进行配对繁殖,提取小鼠尾巴DNA样本,经PCR法鉴定各繁殖后子代小鼠的基因型,获得杂合子Loxp/Emx1-cre/db基因小鼠,繁殖并鉴定该小鼠子代基因型,获得纯合子loxp/^(+)_Emx1-cre/^(+)_db/db/+基因小鼠。以C57BL/6J野生型小鼠作为正常对照组,采用免疫荧光进一步确定模型的成功性,采用尼氏染色观察各组神经元病理形态。结果 3种转基因型小鼠均有较好的繁殖能力,相互杂交其子鼠基因型为loxp/^(+)_Emx1-cre/+、loxp/-_Emx1-cre/+、loxp/^(+)_Emx1-cre/-、loxp/^(+)_Emx1-cre/^(+)_db/db/-、loxp/-_Emx1-cre/^(+)_db/db/-、loxp/^(+)_Emx1-cre/-_db/db/-、loxp/^(+)_Emx1-cre/^(+)_db/db/+、loxp/-_Emx1-cre/^(+)_db/db/+、loxp/^(+)_Emx1-cre/-_db/db/+等,上述基因小鼠繁殖结果基本符合孟德尔遗传定律。免疫荧光结果显示:loxp/^(+)_Emx1-cre/^(+)_db/db/+基因小鼠的Neuritin较Db/db/纯合子基因小鼠表达量较高,差异有统计学意义(F=18.15,P<0.05)。结论 PCR鉴定小鼠基因型的方法可靠,loxp/-_Emx1-cre/+基因型小鼠与Db/db纯合子小鼠交配是获得loxp/^(+)_Emx1-cre/-_db/db/+基因型小鼠的有效途径。