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结核分支杆菌LprG基因的克隆、表达及纯化
被引量:
1
1
作者
张欣
张荣波
赵金存
《广东医学》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期1420-1421,共2页
目的在大肠杆菌中重组表达MTB LprG基因,纯化回收,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法从MTB H37Rv基因组中PCR扩增出MTB LprG基因,克隆到pEASYT1载体中,经序列测定后,再亚克隆到表达载体pET28a(+)中,转化入E.coli BL21(D...
目的在大肠杆菌中重组表达MTB LprG基因,纯化回收,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法从MTB H37Rv基因组中PCR扩增出MTB LprG基因,克隆到pEASYT1载体中,经序列测定后,再亚克隆到表达载体pET28a(+)中,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,Western-blot分析鉴定,采用Ni-NTA柱纯化LprG蛋白。结果扩增产物序列无突变,重组表达载体pET28a(+)-LprG酶切鉴定正确,LprG蛋白在E.coliBL21(DE3)中的表达量约占菌体总蛋白的38%左右,主要以可溶性形式存在,Western-blot分析在27kDa处见到目的蛋白条带,经Ni-NTA柱纯化后,得到纯度较高的该蛋白。结论构建了LprG基因的重组表达载体,获得了纯化的蛋白,为以后研究奠定了基础。
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关键词
结核分支杆菌(MTB)
lprg基因
克隆
表达
纯化
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职称材料
结核分枝杆菌LprG基因的克隆、表达
2
作者
张欣
张荣波
赵金存
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期1013-1015,共3页
目的构建结核分枝杆菌LprG基因的融合表达载体,在大肠杆菌中进行表达,为研究其在结核病诊断中的作用奠定基础。方法采用聚合酶链反应(PCR)从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出LprG基因,克隆到pEASY T1中,序列测定正确后,再亚克隆到融合...
目的构建结核分枝杆菌LprG基因的融合表达载体,在大肠杆菌中进行表达,为研究其在结核病诊断中的作用奠定基础。方法采用聚合酶链反应(PCR)从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出LprG基因,克隆到pEASY T1中,序列测定正确后,再亚克隆到融合表达载体PET28a(+)中,转化入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。结果获得结核分枝杆菌LprG蛋白,凝胶薄层扫描分析表达量在38%左右,主要以可溶性形式存在。结论获得了重组结核分枝杆菌LprG蛋白,为以后研究奠定了基础。
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关键词
结核分枝杆菌
lprg基因
克隆
表达
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职称材料
lprG基因表达上调对THP1细胞表达谱的影响
3
作者
曹雯
宛宝山
+3 位作者
陈伟伟
张冉冉
乐军
陈晋
《同济大学学报(医学版)》
CAS
2018年第4期11-16,共6页
目的分析lprG基因表达上调对THP1细胞表达谱的影响。方法建立稳定表达lprG的THP1细胞系,通过q PCR及Western印迹法检测lprG的表达。用RNA-seq分析稳定表达lprG对THP1细胞基因表达谱有何影响。对测序数据进行分析,作GO及KEGG通路的显著...
目的分析lprG基因表达上调对THP1细胞表达谱的影响。方法建立稳定表达lprG的THP1细胞系,通过q PCR及Western印迹法检测lprG的表达。用RNA-seq分析稳定表达lprG对THP1细胞基因表达谱有何影响。对测序数据进行分析,作GO及KEGG通路的显著性富集分析,并选取6个差异表达基因进行q PCR验证。结果成功构建稳定表达lprG的THP1细胞系。RNA-seq检测发现共有712个差异表达的基因,其中419个上调,占58.8%,293个下调,占41.2%。富集分析显示,lprG的异位表达可影响THP1细胞多种生理或代谢过程。q PCR结果与RNAseq结果一致。结论 lprG会影响THP1细胞内与Toll样受体信号通路、补体、细胞吞噬、溶酶体及过氧化物酶体等过程相关的基因的表达,这可为进一步研究lprG与巨噬细胞相互作用机制提供前期基础。
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关键词
lprg基因
THP1细胞
转录组测序
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职称材料
题名
结核分支杆菌LprG基因的克隆、表达及纯化
被引量:
1
1
作者
张欣
张荣波
赵金存
机构
安徽理工大学医学院病原生物学教研室
北京大学医学部免疫系
出处
《广东医学》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期1420-1421,共2页
文摘
目的在大肠杆菌中重组表达MTB LprG基因,纯化回收,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法从MTB H37Rv基因组中PCR扩增出MTB LprG基因,克隆到pEASYT1载体中,经序列测定后,再亚克隆到表达载体pET28a(+)中,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,Western-blot分析鉴定,采用Ni-NTA柱纯化LprG蛋白。结果扩增产物序列无突变,重组表达载体pET28a(+)-LprG酶切鉴定正确,LprG蛋白在E.coliBL21(DE3)中的表达量约占菌体总蛋白的38%左右,主要以可溶性形式存在,Western-blot分析在27kDa处见到目的蛋白条带,经Ni-NTA柱纯化后,得到纯度较高的该蛋白。结论构建了LprG基因的重组表达载体,获得了纯化的蛋白,为以后研究奠定了基础。
关键词
结核分支杆菌(MTB)
lprg基因
克隆
表达
纯化
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
结核分枝杆菌LprG基因的克隆、表达
2
作者
张欣
张荣波
赵金存
机构
安徽理工大学医学院
北京大学医学部
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期1013-1015,共3页
文摘
目的构建结核分枝杆菌LprG基因的融合表达载体,在大肠杆菌中进行表达,为研究其在结核病诊断中的作用奠定基础。方法采用聚合酶链反应(PCR)从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出LprG基因,克隆到pEASY T1中,序列测定正确后,再亚克隆到融合表达载体PET28a(+)中,转化入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。结果获得结核分枝杆菌LprG蛋白,凝胶薄层扫描分析表达量在38%左右,主要以可溶性形式存在。结论获得了重组结核分枝杆菌LprG蛋白,为以后研究奠定了基础。
关键词
结核分枝杆菌
lprg基因
克隆
表达
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
lprg
clone
expression
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
lprG基因表达上调对THP1细胞表达谱的影响
3
作者
曹雯
宛宝山
陈伟伟
张冉冉
乐军
陈晋
机构
同济大学附属上海市肺科医院检验科
出处
《同济大学学报(医学版)》
CAS
2018年第4期11-16,共6页
基金
国家自然科学基金(81371775)
同济大学优秀人才项目(1511219025)
文摘
目的分析lprG基因表达上调对THP1细胞表达谱的影响。方法建立稳定表达lprG的THP1细胞系,通过q PCR及Western印迹法检测lprG的表达。用RNA-seq分析稳定表达lprG对THP1细胞基因表达谱有何影响。对测序数据进行分析,作GO及KEGG通路的显著性富集分析,并选取6个差异表达基因进行q PCR验证。结果成功构建稳定表达lprG的THP1细胞系。RNA-seq检测发现共有712个差异表达的基因,其中419个上调,占58.8%,293个下调,占41.2%。富集分析显示,lprG的异位表达可影响THP1细胞多种生理或代谢过程。q PCR结果与RNAseq结果一致。结论 lprG会影响THP1细胞内与Toll样受体信号通路、补体、细胞吞噬、溶酶体及过氧化物酶体等过程相关的基因的表达,这可为进一步研究lprG与巨噬细胞相互作用机制提供前期基础。
关键词
lprg基因
THP1细胞
转录组测序
Keywords
lprg
gene
THP1 cells
RNA-sequencing
分类号
R310.41 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分支杆菌LprG基因的克隆、表达及纯化
张欣
张荣波
赵金存
《广东医学》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
下载PDF
职称材料
2
结核分枝杆菌LprG基因的克隆、表达
张欣
张荣波
赵金存
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
下载PDF
职称材料
3
lprG基因表达上调对THP1细胞表达谱的影响
曹雯
宛宝山
陈伟伟
张冉冉
乐军
陈晋
《同济大学学报(医学版)》
CAS
2018
0
下载PDF
职称材料
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