lsrB基因对维氏气单胞菌TH0426菌株运动性影响的研究

为了研究lsrB基因对维氏气单胞菌(A.veronii)TH0426菌株运动性的影响,试验以A.veronii TH0426菌株基因组为模板,扩增lsrB基因的上下游同源臂片段L1与L2,利用重叠PCR连接L1与L2,以得到的连接片段构建重组自杀性质粒pRE-112-lsrB,然后转化至E.coli WM3064感受态细胞内,得到接合转移菌株,通过同源重组的方法构建A.veronii的lsrB基因缺失株ΔlsrB,随后比较A.veronii TH0426菌株与ΔlsrB菌株的生长性能,并利用含3%琼脂的LB固体培养基检测ΔlsrB菌株的运动能力,最后利用实时荧光定量PCR方法检测ΔlsrB菌株中15个鞭毛主要调控基因的表达情况。结果表明:经PCR及测序鉴定后,成功扩增出lsrB基因的上下游同源臂片段L1与L2,通过重叠PCR得到基因片段L1L2,并成功构建出重组自杀性质粒pRE-112-lsrB和得到接合转移供体菌株WM3064(pRE-112-lsrB),通过一次接合转移与二次同源重组成功得到lsrB基因缺失菌株ΔlsrB;与A.veronii TH0426菌株相比,ΔlsrB菌株的生长性能保持不变,但在含3%琼脂的LB固体培养基中运动距离减小,同时ΔlsrB菌株中15个鞭毛主要调控基因的表达量显著高于A.veronii TH0426菌株(P<0.05)。说明lsrB基因可影响A.veronii TH0426菌株的运动性。